Въз основа на антителата и определянето на показателите за тяхната концентрация в кръвната плазма се извършва диагностика на много състояния на тялото. Един от показателите е антинуклеарният фактор, който обединява под името си група от различни видове антитела, насочени срещу клетъчните компоненти. Когато се установи такъв фактор, има смисъл да се говори за автоимунно заболяване, особено за системен лупус еритематозус.
Въпреки че тестът е универсален за определяне на много системни патологии на тялото, по -специално такова сериозно заболяване като лупус еритематозус, някои интересни характеристики са свързани с него. Използва се от 1957 г., но техниката става широко разпространена едва от края на 80 -те години на миналия век. Трябва да се отбележи, че наличието на импланти в гърдата увеличава титъра на антинуклеарните антитела, който се наблюдава от 5% до 55% от всички случаи при пациенти от женски пол.
Какво са
Комплексът от антитела, който включва антинуклеарния фактор, е представен от повече от 200 показателя, най -често това са имуноглобулини от клас G, в редки случаи IgM и IgA. Те се появяват при патологии, характеризиращи се с автоимунен или ревматичен характер на лезията в резултат на нарушена толерантност на имунитета към собствените му тъкани.
При някои условия имунната система насочва всичките си сили не към борба с чужди фактори, а срещу собствените си тъкани, клетки, което обикновено не бива да се случва. Толерантността към някои от клетките, насочени от агресия, е нарушена и се развива автоимунно заболяване. Антителата, произведени в хода на заболяването, или комплексите се наричат автоимунни.
Много хора имат малки количества автоантитела, но това не е признак на заболяване. Само сериозна неизправност в имунитета може да доведе до повишаване нивото на автоантитела, това е причината за подходяща диагноза. Но тя все още трябва да бъде допълнена с други изследвания, по -специално кръв, урина, както и клинични прояви.
При човек със системен лупус еритематозус ANF се повишава още преди да се развият първите симптоми. От всички пациенти 95% имат повишен антиядрен фактор в кръвта, който се допълва от симптоми на заболяването, което от своя страна потвърждава диагнозата.
Механизмът на появата на фактора
Има няколко причини, допринасящи за развитието на болестта при хората. Всичко се случва в определена последователност:
- Под въздействието на ултравиолетовото лъчение на слънцето върху кожата се задействат процесите на генетично програмирана клетъчна смърт, която се нарича апоптоза. Това е нормална реакция на организма, но в случай на системни заболявания лимфоцитите започват да мигрират енергично.
- Досега недостъпни, невидими компоненти на клетките стават достъпни за имунитет, по -специално клетъчната мембрана, нуклеолите, хистоните, мембраната на ядрото и други. Те стават голи и макрофагите, вместо да използват такъв материал, предават информация допълнително, провокирайки имунния отговор на организма.
- В-лимфоцитите, които произвеждат антинуклеарни антитела, реагират на сигнала, изпратен от макрофага; те взаимодействат със съответния антиген, образувайки комплекс.
- Комплексите се отлагат върху мембраните на органи, тъкани, това се случва изобилно на повърхността на съдовата стена отвътре, комплемент или се активира локален имунен отговор.
- Увреждането нарушава функцията на органа.
Анализ, индикации
Има няколко индикации, когато се предписва тест за антинуклеарни антитела. На първо място, това е подозрение за развитие на системен лупус еритематозус, синдром на Sjogren. Ако има едно системно заболяване, лекарят подозира друго, например може да се развие антифосфолипиден синдром на фона на лупус.
Симптоми, когато си струва да се тествате
Винаги има симптоми, появата на които трябва да предупреди човек, да го принуди да премине преглед. Лекарят трябва да насочи пациента, ако има:
- Артрит, проявен чрез възпаление на ставата, с болка, подуване, нарушена подвижност, зачервяване на кожата над нея и треска.
- Преглед за перикардит, плеврит, причината за който е неизвестна, няма да се намеси.
- Увреждане на бъбреците, свързано с нарушение на състоянието на имунната система, появата на промени в анализа на урината, по -специално протеин, кръв.
- Друго показание е хемолитичният вариант на анемия, при който червените кръвни клетки се разрушават в големи количества, нивото на билирубин в кръвта се повишава и анализ на урината.
- Индикацията е намаляване на нивото на тромбоцитите, неутрофилите във формулата на левкоцитите.
- Кожни прояви под формата на обрив, удебеляване, което възниква след излагане на слънце.
- Синдром на Рейно, при който пръстите на ръцете и ръцете периодично променят цвета си. Те стават бледи, сини или зачервени, чувствителността е нарушена, болката се притеснява.
- Показанието са нехарактерни симптоми от неврологията или психиатрията.
- Ако температурата се повиши, се развива умора, намалява телесното тегло и се увеличават лимфните възли.
Изследователски сортове
Има два метода, които ви позволяват да определите антинуклеарните антитела в кръвта. Първият се нарича непряка имунофлуоресцентна микроскопия. Клетъчната линия за нея е получена от аденокарцином в областта на ларинкса. Ако има антиядрени антитела, те се свързват със специфични антигени, след което се добавят етикети, които могат да светят в определен спектър от светлина. Под микроскоп става възможно да се определи интензивността, вида на сиянието.
Тази техника е призната за най -добрата за определяне на показателя за антиядрени антитела. Той има друго име - тест ленти за лупус.
Резултатът от изследването е титърът или максималното разреждане на кръвта, което дава блясък. Ако резултатът е положителен, се описва видът на сиянието. Титърът се повишава, когато има голямо натрупване на антитела. Нисък титър може да се счита за отрицателен резултат, а с висок титър можем да кажем, че концентрацията на антиядрени антитела се увеличава.
Вторият диагностичен вариант е ензимен имунен анализ. Същността му се крие във факта, че антителата, които са в кръвта, влизат в контакт със съответния антиген, в резултат на което разтворът променя цвета си.
Трябва да се отбележи, че положителният резултат от теста не е абсолютна диагноза. Това е сигнал, че е необходим допълнителен преглед, който ще помогне да се идентифицира болестта в ранния период, да се предпише лечение. При отрицателен анализ за антиядрени фактори може да се говори за пълното им отсъствие, но не е изключена диагнозата на предполагаемата автоимунна патология.
Наложително е да се вземат кръвни изследвания за различни показатели. Струва си обаче да си припомним, че резултатът може да бъде повлиян от приема на определени лекарства, както и от остри или хронични заболявания. Специалист винаги ще ви помогне да разберете всички тънкости, след което ще установи диагноза, ще препоръча какво да правите по -нататък.
Дълго време исках да пиша за антиядрения фактор, но през цялото време нещо ме спираше. Защо? Е, защото писането за това се опитва да схване необятността, а краткостта очевидно не е сестрата на моя талант)))
Определянето на антиядрен фактор (ANF) е основният метод за откриване на антиядрени антитела, който позволява откриването на повечето видове антиядрени антитела. Резултатът от определянето на ANF е самият факт на наличието на автоантитела, крайният титър на разреждането на серума и вида на луминесценцията на клетъчното ядро.
ANF не е едно антитяло!
Методът за откриване на ANP е разработен от Tan (1982), използвайки човешка трансплантируема епителиоидна клетъчна линия HEp-2 като субстрат (може би сте виждали това име във формуляра за анализ). Тази клетъчна линия е получена от тумор на човешкия ларинкс (аденокарцином). Сравнителната непретенциозност на тази линия, големите ядра и наличието на всички човешки антигени направиха метода на непряка имунофлуоресценция (nRIF), използвайки непрекъсната клетъчна линия HEp-2, основен метод за откриване на ANP.
Други клетъчни линии също могат да се използват като субстрати (виж въртележка); но поради добрата си морфология и лекотата на отглеждане, именно Hep-2 линията се превърна в общопризнат субстрат за непряка имунофлуоресценция. В английската литература този метод понякога се нарича FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).
Понякога под термина "антиядрени антитела" имунологичните лаборатории се отнасят до тестове, както въз основа на методите на ензимен имуноанализ и имунохимичен анализ, така и на метода на имунофлуоресценция.
Антинуклеарният фактор (ANF) е антитяло, което се открива чрез имунофлуоресценция.
Необходимо е да се открие ANF от клас IgG, тъй като откриването на ANF, представени от други класове имуноглобулини, няма независимо значение.
Титърът на ANF се определя като последното разреждане на серума на пациента, който има ясна флуоресценция (луминесценция) на клетъчните ядра. Когато се използва клетъчна линия HEp-2, се препоръчва да се използва първоначален титър 1:80; в този случай нормалните титри на ANF са по-малки от 1: 160. За определяне на крайния титър обикновено се използва титруване със стъпка x2 (1: 160-1: 320 - 1: 640 - 1: 1280 - 1: 2560 - 1: 5120 и т.н.).
На фона на обостряне на заболяването обикновено се отбелязват титри на ANF над 1: 640, а с ремисия титрите могат да намалят до 1: 160-1: 320.
Точкуването на резултатите от откриването ("в кръстове" +++) позволява на лабораториите да спестяват реактиви и да намалят разходите за труд за извършване на изследвания. В този случай определянето на крайния титър не е възможно❌
Желателно е да се определи крайният титър при всички положителни пациенти, което дава възможност да се изясни наличието на автоантитела в серума, които са по -тясно свързани с активността на процеса.
Типове светещи ядра
Видът на ядреното сияние е една от ключовите характеристики при откриването на ANF. Всеки тип антинуклеарни антитела (ANA) има специфични цели в клетката и отразява взаимодействието на серума на пациента със структури вътре в клетката. Видът на луминесценцията зависи от наличието на специфични автоантитела в кръвта, въз основа на които може да се направи предварително заключение относно онези видове антитела, които присъстват в този серум. Типът луминесценция на клетъчното ядро значително увеличава информационното съдържание при откриване на ANF.
Използването на HEp-2 клетки дава възможност да се характеризират повече от 20 различни варианта на ядрено оцветяване; за клинична практика обаче е достатъчно да се отделят основните. Всеки вид сияние има много характерни характеристики, които позволяват да се разграничи една опция от друга.
При хомогенен вид сияниеАвтоантителата реагират с онези антигени, които са разпределени дифузно в ядрото, т.е. са част от хроматин.
С какви средства? Антитела срещу нуклеозоми, ДНК, хистони.
Кога? При пациенти със СЛЕ и медикаментозно индуциран лупус, както и при пациенти със склеродермия.
Често откриването на висок титър на ANP с хомогенен тип флуоресценция показва диагноза на SLE.
Тип периферно сияниеможе да се изолира отделно, въпреки че е вид хомогенна. Периферният тип луминесценция се открива при пациенти с антитела към двуверижна ДНК и се открива главно при СЛЕ, чернодробни заболявания.
Зърнест тип (петна, мрежа)е най -често срещаният и в същото време най -много неспецифичен.
С какви средства? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигени и PCNA.
Кога? SLE, болест / синдром на Sjogren, склеродермия, дерматомиозит / полимиозит, RA и редица други заболявания. Ниски титри (1: 160-1: 320) ANF с гранулиран тип луминесценция може да бъде в кръвния серум на клинично здрави индивиди БЕЗ признаци на системно заболяване.
Откриването на много високи титри на ANP (1: 2560-1: 10000) с голям гранулиран тип ядрена флуоресценция обикновено показва диагноза и изисква допълнително изследване за идентифициране на RNP антигена.
Ядрените антигени могат да действат като мишени за ANA, което води до откриване на нуклеоларен тип флуоресценция.
С какви средства? РНК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM / Scl.
Кога? Склеродермия и нейните разновидности.
Центромерен типотбелязва се, когато се появят антитела към хромозомни центромери и се открива само в делящите се клетки. Наличието му е характерно за синдрома на CREST (вариант на склеродермия).
Цитоплазмен вид сияние.
С какви средства? Антитела към тРНК синтетази, по-специално Jo-1, които се отбелязват при полимиозит. Освен това се открива при пациенти с ANA, насочени срещу други компоненти на клетъчната цитоплазма: при автоимунен хепатит, при първична билиарна цироза.
Могат да се характеризират редица други видове сияние. Антитела към Scl-70 дават финозърнестоцветяване на ядрото и ядрата, анти -р80 - светещи точки в ядрото, които отсъстват в митотичните клетки.
Често може да възникне комбинация от няколко вида луминесценция, например дребнозърнеста и нуклеоларна, което е характерно за антителата към Scl-70.
Понякога при ниски разреждания преобладава един вид флуоресценция, например гранулиран, а при по -нататъшни разреждания се разкриват хомогенни или центромерни видове флуоресценция, което показва наличието на различни видове АНА в серума на пациента.
Антинуклеарни антитела (ANA, ANA, антиядрени антитела, антинуклеарен фактор-ANF)-NIF метод върху клетъчната линия HEp-2 с определяне на типа флуоресценция.- индикатор за автоимунни заболявания на съединителната тъкан. ANA е група от автоантитела срещу протеини и други компоненти (включително ДНК), открити в ядрото на клетките. Основните индикации за употреба: изключване на диагнозата - системен лупус еритематозус (смята се, че ANA се появява в 90% от случаите на SLE, с други думи, отрицателен резултат с вероятност от около 90% изключва диагнозата SLE), диференциална диагноза на системни колагенови заболявания (системен лупус еритематозус, склеродермия, нодуларен периартериит, дерматомиозит), хроничен активен хепатит.
Към днешна дата са описани повече от 200 разновидности на ANA, насочени срещу нуклеинови киселини, хистони, протеини на ядрената мембрана, компоненти на сплайсозоми, рибонуклеорхайни, нуклеоларни протеини и центромери. В същото време те увреждат съединителната тъкан, което допринася за въвеждането на определянето на антинуклеарния фактор като тест за системни заболявания на съединителната тъкан. Терминът "антиядрен фактор" означава тест за откриване на антиядрени антитела, използвайки метода на непряка имунофлуоресценция.
Един от методите за откриване на антинуклеарен фактор в кръвта (антиядрени антитела) е методът на непряка имунофлуоресценция чрез прилагане на серума на пациента към тъканните клетки на трансплантирана човешка клетка HEp-2 (човешки ларингеален епителен карцином Hep-2 клетки, съдържащи различни ядрени антигени), използвайки маркиран конюгат с човешки антитела. Други човешки клетъчни линии също могат да се използват като субстрати; въпреки това, поради добрата морфология и удобството на отглеждане, именно линиите на Hep-2 се превърнаха в общопризнат субстрат за непряка имунофлуоресценция. Методът за откриване на ANP е разработен от Tan през 1982 г., като се използва човешка трансплантируема епителиоидна клетъчна линия HEp-2 като субстрат. Тази клетъчна линия, получена от аденокарцином на човешкия ларинкс, е голяма полиплоидна некаратинизираща плоска епителна клетка, която образува монослой върху стъкло. Серумът на пациента се инкубира с тъканен субстрат, докато антинуклеарните антитела от серума на пациента (ако има такива) се свързват със съответните ядрени антигени. Свързващите се с автоантитела места се откриват с флуоресцеин-белязан античовешки антисерум. Резултатите от реакцията се оценяват чрез микроскопия с помощта на луминесцентен микроскоп и визуална оценка на естеството на луминесценцията на свързаните антитела. Сред предимствата на HEp-2 (в сравнение с криосекциите на животински тъкани) може да се отбележи висока честота на клетъчно делене, което прави възможно откриването на антитела към антигени, експресирани само по време на клетъчното делене, и липсата на клетъчна тъканна матрица , което затруднява визуализирането на специфична флуоресценция в сравнение с хистологичните разрези. При някои заболявания, като SLE, системна склеродермия (системна склероза), някои инфекции, имунната система на пациента възприема ядрата (протеините на ядрата) на клетките на собствените им тъкани като чужди и произвежда антитела към тях (антиядрени антитела - AHA). В същото време те увреждат съединителната тъкан, което допринася за въвеждането на определянето на антинуклеарния фактор като тест за системни заболявания на съединителната тъкан.
При тълкуването на данните трябва да се има предвид, че спектърът на AHA включва голяма група автоантитела към ДНК, нуклеопротеини, хистони, ядрени рибонуклеопротеини и други компоненти на ядрото. По този начин тестът има за цел да открие различни антитела към компонентите на ядрото и цитоплазмата, които за първи път бяха открити при СЛЕ. В бъдеще диагностичните критерии на теста бяха разширени във връзка с откриването на тези антитела и при други заболявания на съединителната тъкан.
При скрининговите тестове за определяне на общата ANA обикновено се използва набор от следните антигени, които са основните маркери на автоимунни заболявания на съединителната тъкан: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP / Sm, J01, центромер Б.
Основните антигени, използвани в съвременните комплекти за откриване на ядрени антитела от клас IgG, са представени от следния набор:
- SS -A (Ro) - ядрени рибонуклеопротеини (полипептиди). На тях се откриват антитела, по -често със системна склеродермия (60% от случаите), синдром на Sjogren (до 70% от случаите) и със SLE (до 30% от случаите). Смята се, че ако тези антитела се открият в кръвта на бременни жени, това е индикатор за риска от повишена поява на неонатален лупус-подобен синдром при новородено дете (неонатален лупусов синдром). Тези майчини антитела преминават през плацентата и причиняват увреждане на плода, което води до хемолитична анемия и тромбоцитопения. Тежките последици включват увреждане на проводимата система на сърцето на детето (до постоянна сърдечна стимулация). Отбелязва се, че жените, при които по време на бременност е открит значителен титър на тези антитела, без очевидни клинични признаци, впоследствие развиват някакво автоимунно заболяване, включително SLE.
- SS -B (La) - ядрени протеини. Антителата към тях се откриват в до 60% от случаите със синдром на Sjogren и в 15% от случаите със SLE.
- Scl-70 е протеин-ензим, участващ в обмена на нуклеинови киселини (топоизомераза-1). Антителата към този протеин са най -специфични при системна склеродермия (до 70% от случаите).
- Двуверижната ДНК е естествена ДНК. Антителата срещу ДНК са най -специфични при СЛЕ (до 80% от случаите) и практически не се откриват при ревматоиден артрит и склеродермия.
- RNP / Sm-Комплексът RNP / Sm антиген се състои от U1 рибонуклеопротеини: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а също и от Sm-полипептиди: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антителата, генерирани срещу тези антигени, са най -специфични за смесени заболявания на съединителната тъкан - т.е. при наличие на симптоми на склеродермия, ревматоиден артрит, СЛЕ, полимиозит (около 95% от случаите) и в по -малка степен за СЛЕ (до 30% от случаите).
- Jo -1 - ензим - аминоацилтранспортна РНК синтетаза. Автоантителата към този протеин са диагностично значими при миозит (полимиозит / дерматомиозит).
- CENP-B (Centromera)-за откриване на антицентромерни антитела (Anti-Centromer B), за диагностициране на CREST синдром (този синдром е комбинация от калцификация на кожата, синдром на Raynaud, нарушения на подвижността на хранопровода, склеродактилия, телеангиектазия). Синдромът CREST се отнася до вариант на системна склеродермия (системна склероза). Тези антитела при пациенти показват благоприятен ход на системна склеродермия и показват леко увреждане на вътрешните органи.
- Hep-2 клетки-човешки ларингеален епителен карцином Hep-2 клетки, съдържащи много различни ядрени антигени, включително SS-A (Ro) антиген и центромерни антигени. Антитела срещу Hep-2 се откриват при пациенти с полимиозит и дерматомиозит до 90% от случаите.
- Митохондрии (PDC) - PDC - комплекс от пируват дехидрогеназа. Голяма група антимитохондриални антитела са автоантитела, които се образуват върху ензимите на пируват дехидрогеназния комплекс, разположени в митохондриите на клетките и участващи в окислителното декарбоксилиране на пируват.
ANA често се открива при билиарна цироза на черния дроб.
AHAs обикновено не влизат в живите клетки и следователно са безвредни. Но понякога те образуват комплекси антиген-антитяло, които причиняват увреждане на тъканите (като увреждане на бъбреците при СЛЕ). Поради участието на много органи в патологичния процес, диагностичната стойност на дефиницията на AHA е малка и резултатите от анализа само частично потвърждават клиничните данни.
Освен при ревматични заболявания, ANA се открива и при хроничен активен хепатит до 50% от случаите. Появата (ниски титри) е възможна при възпалителни заболявания, онкология и вирусни инфекции.
- Сравнителна честота на откриване на антинуклеарни антитела.
Болест и състояние Процент на откриване,% SLE 95-100 Лупоиден хепатит (ново име - хроничен автоимунен хепатит) 70 -80% Синдром на Felty (Felty. 1924) - ревматоиден артрит + спленомегалия + неутропения + левкопения + лимфаденопатия. 95-100 Системна склеродермия 75-80 Лекарствен синдром на лупус (хидралазин, прокаинамид, изониазид) Около 50 Синдром на Sjogren (Автоимунно системно увреждане на съединителната тъкан. Характеризира се с участието на жлезите с външна секреция в патологичния процес, главно слюнчените и слъзните, и хронично прогресиращо протичане). 40-75 Клинично здрави роднини на пациент със СЛЕ Около 25 Дискоиден лупус еритематозус 15-50 Хроничен ювенилен артрит, ревматоиден артрит 15-30 Периартериит нодоза 15-25 Дерматомиозит и полимиозит 10-30 Ревматизъм Около 5 Синдром на Рейно 15-20