Действащ
МУ 4.2.2039-05
ИНСТРУКЦИИ
4.2. МЕТОДИ ЗА КОНТРОЛ. БИОЛОГИЧНИ И МИКРОБИОЛОГИЧНИ ФАКТОРИ
Техника за събиране и транспортиране на биоматериали до микробиологични
лаборатории
Дата на въвеждане 2006-07-01
2. ПРЕПОРЪЧВА ЗА ОДОБРЕНИЕ от Комисията по държавно санитарно-хигиенно регулиране към Федералната служба за надзор на защитата на правата на потребителите и благосъстоянието на човека на 6 октомври 2005 г. (Протокол № 3).
3. ОДОБРЕН И ВЪВЕДЕН в действие от ръководителя на Федералната служба за надзор на защитата на правата на потребителите и благосъстоянието на човека, главния държавен санитарен лекар на Руската федерация Г. Г. Онишченко 23 декември 2005 г.
5. ВЪВЕДЕН ЗА ПЪРВИ ПЪТ.
1 област на употреба
1 област на употреба
1.1. Насоките определят правилата за събиране и транспортиране на биологични материали до микробиологични лаборатории с цел подобряване на качеството на резултатите от лабораторните изследвания и организиране на противоепидемични и превантивни мерки, както и предотвратяване на вътреболнични инфекции при медицински персонал и пациенти.
1.2. Насоките са предназначени за използване от органи и организации на Федералната служба за надзор на защитата на правата на потребителите и благосъстоянието на човека и могат да се използват и от здравни органи и организации.
2. Общи положения
2.1. Получаването на надеждни данни за идентифициране на източниците на инфекция е необходимо за навременното и ефективно организиране на противоепидемични и превантивни мерки, за оценка на нивото на зараза сред населението по време на епидемиологичен надзор.
2.2. Разработената техника за събиране и транспортиране на биологични материали до микробиологични лаборатории ще намали нивото на преданалитична грешка и ще подобри качеството на лабораторната работа за обективизиране на резултатите.
2.4. Насоките могат да се използват при провеждане на епидемиологичен надзор на антимикробната резистентност на патогени, изолирани и идентифицирани в лаборатория, оптимизиране на употребата на антимикробни лекарства и мерки в областта на превенцията, контрола и ограничаването на резистентността на местно, регионално и национално ниво.
3. Общи изисквания за вземане на проби от биологичен материал за микробиологични изследвания
3.1. За предпазване на медицинския персонал и пациентите от инфекция при събиране на проби от биоматериали и доставянето им в лабораторията е необходимо:
не замърсявайте външната повърхност на съдовете по време на събиране и доставка на проби;
да не замърсяват придружаващите документи (упътвания);
да се сведе до минимум директният контакт на пробата от биоматериал с ръцете на медицински работник, който я събира и доставя в лабораторията;
да използват стерилни еднократни или одобрени за тези цели контейнери (контейнери) по предписания начин за събиране, съхранение и доставка на проби;
транспортиране на проби в носители или кутии с отделни гнезда;
спазвайте асептичните условия за предотвратяване на инфекция на пациента в процеса на извършване на инвазивни мерки;
събирайте проби в стерилни контейнери за еднократна употреба или стъклени контейнери (не замърсени с биоматериал, не повредени от пукнатини, напукани ръбове и други дефекти)
3.2. Пробите от биоматериал трябва да се събират, както следва:
преди началото на антибиотична терапия, при липса на такава възможност - непосредствено преди повторното въвеждане (приема) на лекарства;
в количеството (тегло, обем), необходимо за анализа, т.к недостатъчно количество биоматериал за изследване води до фалшиви резултати;
с минимално замърсяване на материала с нормална микрофлора, т.к наличието му води до погрешно тълкуване на получените резултати, например при изследване на храчки, проби от носа, фаринкса (глътката), гениталиите и др.
3.3. Когато събирате проба, уверете се, че в лабораторията не се образува аерозол, когато контейнерът с биоматериал се отвори: пробите от кръв и други телесни течности внимателно се прехвърлят от спринцовката, без да се разпенват в суха и/или се пълнят със среда ( антикоагулант) съд.
3.4. В посоката на изследването посочете: фамилия, име, бащино име на пациента; година на раждане; клонът, в който се намира; номер на медицинска история (амбулаторна карта); диагноза; материали, изпратени за изследователски и изследователски цели; дата и час на вземане на материала (часове); антибактериални (имунни) лекарства, ако пробата е взета на фона на антибиотична и/или имунотерапия; фамилия, име, отчество на лекуващия лекар (консултант), изпращащ пробата за изследване. При препращане към биоматериали, получени по време на аутопсията, се посочва и отделението, в което е починал пациентът.
3.5. Преди вземане на проба, особено при използване на инвазивни методи, се взема предвид вероятността от риск за пациента и полза, както и значението на този конкретен вид биоматериал за целите на обективизиране на клиничната диагноза и оценка на текущите или планираните мерки за лечение. под внимание.
4. Общи изисквания за доставка на проби от биоматериал в микробиологичната лаборатория
4.1. Всички събрани проби се изпращат в микробиологичната лаборатория веднага след получаване, с изключение на случаите на използване на контейнери с транспортни среди, одобрени за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред.
Това е необходимо за:
запазване на жизнеспособността на патогените и възможността за изолиране на микроорганизми, които изискват специални условия на култивиране (Haemophylus и др.);
предотвратяване на свръхрастеж на бързорастящи и активни микроорганизми;
поддържане на съотношението на изходните концентрации на изолати при наличие на микробни асоциации в пробата;
намаляване на времето за контакт на пробата с някои локално използвани антисептици, които могат да имат антибактериална активност;
обективиране на клиничната диагноза на инфекциозно-възпалително заболяване и оценка на резултатите от терапията.
4.2. Разрешено е използването на алтернативни методи за увеличаване на времето за доставка на биоматериала до лабораторията.
Съхранявайте пробите в хладилник при температура 2-8 °C, с изключение на случаите, изброени по-долу.
4.2.1. Когато пробата се съхранява в специализиран транспортен контейнер (транспортна система), одобрен за употреба по установения ред, който представлява стерилна епруветка за еднократна употреба с агар или течна транспортна среда и тампон-сонда, поставена в запушалката и стерилно опакована заедно с тръбата. В такива контейнери пробите се съхраняват при стайна температура (18-20 ° C). Транспортна среда, специална плътна с и без активен въглен, позволява поддържане на жизнеспособността на микроорганизмите, изискващи специални условия за култивиране в продължение на 48-72 часа.
За проби за анаероби и за фекална флора се използват специални контейнери с транспортна среда, епруветки със среда за изолиране на Campylobacter и Helicobacter, одобрени за употреба по предписания начин. Такива среди създават анабиотична атмосфера за микроорганизмите, която помага за намаляване на техния метаболизъм, инхибира растежа и предотвратява изсушаването им и натрупването на отпадъчни продукти.
Всяка проба, събрана в течна среда, се смесва старателно със средата.
4.2.2. Когато кръвта се култивира в бульон, след получаване пробата се съхранява в термостат при температура 35-37 ° C.
Ако пробите се събират в специални контейнери за последващо изследване с двуфазна среда, те трябва да се съхраняват при стайна температура (18-20 ° C).
4.2.3. Когато, в случай на възможно наличие на температурно-зависими микроорганизми (Neisseria sp.), пробите се оставят при стайна температура (18-20°C).
4.3. За транспортиране на проби, изследвани за наличие на аероби и факултативни анаероби, използвайте:
стерилни сухи епруветки за еднократна употреба с вградена тампонна сонда (груби) или контейнери с транспортна среда, одобрени за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред; допуска се използване на стерилни стъклени епруветки, запечатани с газопропусклива запушалка с вградена тампонна сонда, изготвени в лаборатория;
стерилни контейнери за еднократна употреба с винтова капачка (разрешени са стъкло с газопропусклива запушалка) - за събиране на проби от урина, храчки, изпражнения, бронхо-алвеоларен лаваж, биопсичен (парченца тъкан) материал;
стерилни за еднократна употреба с винтова капачка или стъклени епруветки - за събиране на стерилни течности, бронхо-алвеоларен лаваж, отделен от дренажи или остъргвания;
стерилни панички на Петри - за събиране на проби от косми или за транспортиране на остъргвания с маркировка на дъното на съда;
специални стерилни назофарингеални и урогенитални сонди-тампони с алуминиева ос (диаметър на оста - 0,9 mm) и малък памучен или вискозен тампон на върха (диаметър на тампона - 2,5 mm), монтирани в запушалка, която запечатва стерилна стъклена тръба за еднократна употреба - за проби от назофаринкса за B. pertusis и от уретрата при мъжете.
4.4. За транспортиране на проби, изследвани за наличие на анаероби, се използват контейнери със специални транспортни среди и епруветки с тиогликолова среда; епруветки със среда за изолиране на Campylobacter и Helicobacter, одобрени за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред. Пробата, събрана в течна среда, се смесва старателно с нея. За получаване на проби се препоръчват следните техники:
изпускането на дренажите, използвани за активна аспирация на кухините, се аспирира със стерилна спринцовка с плътно бутало в обем 2-4 ml; стерилна игла, покрита със стерилен памучен тампон, се поставя върху напълнената спринцовка, излишният въздух се отстранява от спринцовката; памучен тампон се пуска в дезинфекционен разтвор; краят на иглата се инжектира в стерилна гумена запушалка и в тази форма спринцовката с материала се доставя в лабораторията;
съдържанието на огнища на инфекция и кухини, получени чрез пункция, се събират в обем от 2-4 ml с помощта на 2-, 5-, 10-ml спринцовки с плътно бутало; излишният въздух се отстранява от спринцовката чрез покриване на иглата със стерилен памучен тампон, който след това се изсипва в дезинфекционен разтвор; иглата се дезинфекцира чрез избърсване с тампон, навлажнен със 70% етилов алкохол; за запечатване краят на иглата се инжектира в стерилна гумена запушалка и в тази форма спринцовката с материала се доставя в лабораторията.
При събиране на голям обем материал (3 ml или повече), анаеробните бактерии могат да останат жизнеспособни в продължение на 24 часа при стайна температура (18-20 ° C).
Ако има само няколко капки за отделяне, те се прехвърлят от спринцовката в малък контейнер или в епруветка с транспортна среда веднага след получаване (контейнери с транспортна среда се получават в лабораторията предния ден).
Парчетата тъкан (биоптичен материал), ако има съмнение за анаеробна инфекция, се събират в стерилни контейнери за еднократна употреба с винтова капачка (разрешено - в стъклени съдове със смлян капак) и се доставят незабавно в лабораторията.
4.5. За транспортиране на проби, изследвани за наличие на вируси, се използват специални контейнери с течна среда за запазване на вирусите.
5. Проби от различни видове биоматериал и среда на пациента
маса 1
Съдове, използвани за доставяне на проби в лабораторията
|
Източник и вид клиничен материал |
Артикулите, използвани за доставка на проба |
|
Специални транспортни контейнери със среда, с неутрализатори на антибиотици и реагенти, които разрушават кръвните телца, или без тях, одобрени за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред; двуфазна среда във флакони |
|
|
Централна нервна система |
|
|
ликьор |
Стерилни тръби за еднократна употреба с винт; стерилни стъклени епруветки с целулозни или памучно-марлеви запушалки |
|
Материал за мозъчни абсцеси и биопсичен материал за възпалителни процеси в централната нервна система |
Спринцовка с игла, поставена в стерилна гумена запушалка; епруветка с тиогликолова среда, затворена със стерилна гумена запушалка; транспортни контейнери със среда за съхраняване на анаероби |
|
Долни дихателни пътища |
|
|
Материал за биопсия на белите дробове и трахеята; храчки, естествено изкашлящи и предизвикани; изстъргване от бронхите |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка (за събиране на храчки); лабораторно приготвен стерилен стъклен съд |
|
Трахеален аспират, бронхо-алвеоларен лаваж, бронхиален лаваж |
Стерилен контейнер за събиране на храчки за еднократна употреба с винтова капачка; плътно прилепнала стерилна стъклена тръба |
|
Транстрахеален и белодробен аспират |
Специални транспортни контейнери със среда за анаероби; спринцовка с игла, поставена в стерилна гумена запушалка; контейнер с тиогликолова среда; стерилен пластмасов контейнер за еднократна употреба с винтова капачка; плътно прилепнала тръба |
|
Горни дихателни пътища |
|
|
Натривки от носа, фаринкса, назофаринкса, външното ухо |
Стерилен тампон за еднократна употреба, поставен в стерилна суха епруветка (епруветка) или транспортен контейнер с подходяща среда; транспортен съд за вируси; стерилни стъклени съдове, сглобени в лабораторията |
|
Промиване на носа, назофагеален аспират |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с капачка на винт; съд за транспортиране на вируси |
|
Течност за тимпаноцентеза, аспират на синусите, аспириран с игла |
Спринцовка с игла, дезинфекцирана след манипулация с тампон, навлажнен със 70% етилов алкохол, и залепен в стерилна гумена запушалка; можете да прехвърлите материал от спринцовка в стерилни еднократни или стъклени епруветки или специален съд със среда за транспортиране на анаероби |
|
Тъкан, получен по време на операция на носа, фаринкса, ухото |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с капачка на винт; епруветка с тиогликол или друга транспортна среда, плътно затворена със стерилна гумена запушалка; плътно затворена стерилна пластмасова или стъклена тръба за еднократна употреба |
|
Остъргвания от конюнктивата на ъгъла на окото |
Тампони върху стерилни предметни стъкла без мазнини; материал, който се пренася в специален транспортен контейнер със среда или се инокулира в хранителна среда |
|
Вътреочна течност |
Тампони върху стерилни предметни стъкла без мазнини; материал, който се поема в специален транспортен контейнер със среда за анаероби или спринцовка с игла, предварително дезинфекцирана със 70% етилов алкохол и поставена в стерилна гумена запушалка |
|
Отделяща се, взета със стерилна стъклена пръчка или стерилен памучен тампон от лигавицата на долната преходна гънка, от ръба на клепачите, с язва - от роговицата (след анестезия), с ъглов конюнктивит - от ъглите на клепачите |
Стерилен флакон за еднократна употреба или стъклен флакон със захарен бульон, в който е монтирана сонда за тампон, или стерилна стъклена пръчка, използвана за вземане на проби; специален транспортен контейнер със среда за вируси |
|
Тайната от слъзния сак |
Стерилен тампон за еднократна употреба, поставен в стерилна суха тръба (епруветка) или стъклена епруветка |
|
Пикочно-половата система |
|
|
Средна порция свободно течаща урина; от илеалния канал, използван за създаване на изкуствен пикочен мехур; от катетър при реанимационни пациенти. Зачервяване от пикочния мехур. Проба, получена с двустранна уретрална катетеризация |
Стерилен контейнер за събиране на урина за еднократна употреба с капачка на винт или стерилна епруветка за еднократна употреба с капачка; или специална тръба за събиране на урина за еднократна употреба. Когато използвате стерилна стъклена епруветка със запушалка от целулоза или памучна марля, внимавайте да не намокрите запушалката с материал (обем на пробата 10-20 ml) |
|
Супрапубична аспирационна проба |
Стерилна спринцовка без игла, затворена със стерилна гумена запушалка; стерилна спринцовка с игла, предварително дезинфекцирана със 70% етилов алкохол и поставена в гумена запушалка |
|
Материал от женски полови органи |
|
|
Течности: амниотични, фалопиеви тръби, бартолинови |
Специален транспортен контейнер със среда за анаероби; спринцовка без игла, затворена със стерилна гумена запушалка; спринцовка с игла, обработена със 70% алкохол и поставена в стерилна гумена запушалка (обем на пробата 1-2 ml) |
|
Проби от цервикалния канал, уретрата, вагината |
Стерилен тампон за еднократна употреба, поставен в стерилна суха епруветка (tubeser) или транспортен контейнер със специална среда; сонда за тампон, монтирана в целулозна или памучно-марлева запушалка на стерилна стъклена епруветка. |
|
Проби от материал от ендометриума |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или епруветка, или транспортен контейнер със среда за анаероби; стерилни стъклени съдове |
|
Външен генитален материал |
Стерилна спринцовка без игла, затворена със стерилна гумена запушалка; предметно стъкло с намазка, покрито с покривен лист за определяне на T. pallidum; сонда за тампон, монтирана в стерилна еднократна (tubeser) или стъклена тръба; специална транспортна тръба със среда с активен въглен за съхранение на гонококи и транспортни контейнери за вируси и хламидии; намазки върху предметни стъкла за откриване на други патогени, предавани по полов път |
|
Мъжки полов материал |
|
|
Тампони от уретрата |
Тампона сонда върху алуминиева ос (уретрална тампонна сонда), монтирана в стерилни еднократни (тубезер) или стъклени тръби; |
|
Еякулат, сперма |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с капачка на винт; стерилна епруветка или епруветка, еднократна или стъклена |
|
Материал на епидидима с епидидимит |
Специален транспортен контейнер с анаеробна среда или контейнер с тиогликолова среда; стерилен контейнер за еднократна употреба с капачка на винт или стерилна стъклена тръба с целулозна или памучно-марлена запушалка |
|
Лезия на пениса |
Спринцовка без игла, затворена със стерилна гумена запушалка; предметно стъкло с намазка за T. pallidum, покрито с покривен лист; сонда за тампон, монтирана в стерилна еднократна (tubeser) или стъклена тръба; Транспортни контейнери за вируси и хламидия; тампони за откриване на други полово предавани инфекции |
|
Материал за съмнение за гонорея |
|
|
Намазки от ануса, цервикалния канал, уретрата, вагината |
Тампон-сонда, монтирана в стерилна епруветка за еднократна употреба (тубер) или стъклена епруветка; специална транспортна тръба със среда с активен въглен за съхранение на гонококи за 48 часа или повече |
|
Стомашно-чревния тракт |
|
|
Устна кухина |
Тампон-сонда, монтирана в стерилна епруветка за еднократна употреба (тубер) или стъклена епруветка; стерилен контейнер за еднократна употреба или стъклен съд за събиране на отмиване от устната кухина |
|
Стомашна промивка или течност за промиване; дуоденален аспират; проба, получена с сигмоидоскопия; материал за ректална биопсия |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с капачка на винт; специален стерилен контейнер за събиране на храчки; |
|
Ректална намазка |
Стерилен тампон за еднократна употреба, поставен в стерилна суха епруветка (tubeser); или стерилна епруветка със специална транспортна среда; тампон, изработен от неръждаем материал, монтиран в запушалка от целулоза или памучна марля на стерилна стъклена тръба |
|
Изпражнения за чревни инфекции ("disgroup"), Helicobacter, Campylobacter |
Стерилна епруветка с тампон във физиологичен разтвор с глицерин; транспортен контейнер със среда за анаероби във фекални проби, със специална среда с и без активен въглен за изолиране на Campylobacter sp. и Helicobacter sp.; тампон-сонда в суха стерилна епруветка за еднократна употреба (епруветка); стерилна стъклена тръба, монтирана с тампон-сонда върху метална тел от титан, стомана, алуминий. Не се допуска използването на тампон с дървена ос |
|
Изпражнения за наличие на дисбактериоза от рода и видовия състав на микробите („на флората“) |
Специален транспортен контейнер с анаеробна среда във фекални проби, със специална среда с и без активен въглен за изолиране на Campylobacter sp. и Helicobacter sp., одобрени за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред; проба за тампон в епруветка с физиологичен разтвор с глицерин в стерилна еднократна или стъклена епруветка; специален стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка; лабораторно монтиран стъклен контейнер |
|
Изпражнения за наличие на дисбиоза с количествено отчитане на изолирани и идентифицирани микроби ("за дисбиоза") |
Специални стерилни контейнери за еднократна употреба с капачка на винт и шпатула за събиране на материал и вземане на проба за инокулация, със стандартно тегло; лабораторно монтиран специален стерилен стъклен контейнер |
|
Кожа и подкожна тъкан |
|
|
Язви, възли (нодуларни удебеления), плитки, повърхностни рани (гнойни; изгаряния); дълбоки рани или абсцеси, кости |
Специални стерилни контейнери за еднократна употреба с винтова капачка; стерилни 5 ml еднократни или стъклени епруветки със запушалки; контейнери със специална среда за анаероби |
|
Ексудат от подкожни и меки тъкани; аспират от меки тъкани |
Стерилна спринцовка без игла, затворена със стерилна гумена запушалка; спринцовка с игла, предварително дезинфекцирана със 70% етилов алкохол и поставена в гумена запушалка |
|
Стерилни телесни течности, с изключение на кръвта, цереброспиналната течност, урината (вижте по-горе) |
|
|
Течности |
|
|
Плеврална, перитонеална, асцитична, ставна, синовиална |
Стерилен контейнер за еднократна употреба с капачка на винт; затворена спринцовка без игла или с игла, предварително дезинфекцирана със 70% етилов алкохол и поставена в стерилна гумена запушалка |
|
Биоматериал за PCR диагностика |
|
|
Кръв; други телесни течности |
Стерилни епруветки за еднократна употреба със запушалка от 1,5 ml с антикоагулант. Епруветката се обръща 3-5 пъти, за да се смеси пробата с антикоагуланта. Доставка до лабораторията - в стелаж от материали за стерилизация в автоклав |
|
биопсичен материал; остъргвания; храчки и други видове биоматериал |
Стерилни сухи епруветки за еднократна употреба Eppendorf и други подобни. Доставка до лабораторията - в специален стелаж от материали за стерилизация в автоклав |
|
Проби от средата на пациента |
|
|
Въздух |
Стерилни за еднократна употреба Петри (= 90 mm) или стъкло (= 100 mm) с твърда хранителна среда. Доставка до лабораторията в специални контейнери |
|
Измива се от предмети от околната среда около пациента |
|
|
Тестове за стерилност |
|
|
Кръв и кръвни съставки от отделението за събиране |
Контейнерите с приготвения материал се доставят в лабораторията в специални контейнери за носене |
|
Измива от медицински инструменти, маркучи на оборудване, използвано в отделенията за интензивно лечение и анестезиология, както и в операционни зали; ръце на медицински персонал; бельо |
Стерилни тампони, монтирани в прозрачни епруветки с бистра, безцветна течна среда. |
|
Хирургически материал: тампони, салфетки, турунди, памучни тампони върху дървена ос |
Стерилни прозрачни епруветки със запушалки, с прозрачна безцветна течна среда с 3-5 стерилни стъклени перли. |
|
Материал за шев: кетгут, съхраняван в операционната в алкохолен разтвор на йод |
Стерилна епруветка (бутилка със запушалка) с разтвор на неутрализатор (натриев хипосулфит) |
|
Копринени, найлонови, мономерни синтетични конци, съхранявани в операционна в алкохолен разтвор |
Стерилна епруветка със запушалка със стерилна дестилирана вода като течност за промиване. |
|
Измива от операционното поле на пациента |
Преди обработка на полето: в прозрачни епруветки, пълни с прозрачна течна културална среда. |
|
Проби за определяне на имунологични фактори на противоинфекциозната защитна система |
|
|
Кръв и други телесни течности за определяне на хуморалните защитни фактори |
Спринцовки-епруветки за еднократна употреба (вакутейнери); стерилни тръби за еднократна употреба с винт; стерилни стъклени епруветки със стерилни гумени, целулозни или памучно-марлеви запушалки. Пробите се доставят в лабораторията в специална поставка, изработена от материали за стерилизация в автоклав. |
|
Кръв и други телесни течности за определяне на клетъчните защитни фактори |
Стерилни тръби за еднократна употреба с винт; стерилни стъклени епруветки, плътно затворени със стерилна гумена запушалка. Еднократни епруветки с антикоагулант, подлежащи на центрофугиране. Доставката до лабораторията се извършва в специален стелаж, изработен от материали за стерилизация в автоклав |
|
Тампони за откриване на бактериални и вирусни антигени (например, ако се подозира полово предавана инфекция) |
Стерилно обезмаслено стъкло; за T. pallidum, предметното стъкло трябва да бъде покрито с покривен лист. Доставката до лабораторията се извършва в контейнер за еднократна употреба или стерилни еднократни или стъклени блюда на Петри в специални контейнери |
Забележка.Пробите от гной, течности и тъкани трябва да се доставят в лабораторията в специални стерилни контейнери за еднократна употреба с винтови капачки. Тампони сонди - изсушават се в стерилни епруветки за еднократна употреба (груби) или в контейнери с транспортна среда, ако материалът не може да бъде доставен в лабораторията веднага след вземане на пробата. За тези цели могат да се използват транспортни среди, вкл. в епруветки за еднократна употреба, опаковани заедно със стерилна сонда за тампон, одобрена за употреба в Руската федерация в съответствие с установената процедура. Тампонните сонди се произвеждат (подготвят) с помощта на редица материали: за самия тампон (памучна марля, памук, вискоза, дакрон), за оста на тампонната сонда (дърво, пластмаса, неръждаем метал - титан, стомана, алуминий) и плътна агарна среда: със и без въглен за анаероби.
Много клинично значими анаероби, например Clostridium perfringens, Bacteroides fragilis, са доста толерантни към присъствието на кислород и са добре запазени в голямо количество гной, течни проби и телесни тъкани, както и върху тампон сонда в специален транспорт или тиогликолова среда.
По-чувствителни към кислород (например фузобактерии) също са добре запазени в проба от биологичен материал и ако материалът се засява в рамките на 2-3 часа от момента на събирането му, тогава не се изисква специално внимание към метода на доставка. Анаеробите, изискващи специални условия на култивиране, не остават жизнеспособни върху сонда за тампон в транспортен контейнер със среда, която не е предназначена за доставяне на анаероби, с изключение на контейнери със специална транспортна среда или тиогликол.
В същото време тези микроорганизми растат с 5-7 дни по-дълго от времето, през което повечето практически лаборатории инкубират съдове, инокулирани с материал за изолиране и идентифициране на аероби и факултативни анаероби. Поради тази причина в обикновените практически лаборатории изглежда неподходящо рутинно да се тества за наличие на анаероби, като се използват специални транспортни анаеробни контейнери със среда и можете да се ограничите до епруветки с тиогликолова среда.
За събиране и транспортиране на проби се използват носители, контейнери, инструменти и материали, разрешени за използване в Руската федерация по установения ред.
6. Правила и техники за получаване на проби от различни видове биологичен материал за микробиологични изследвания
Всяка проба, която изисква използването на инвазивни методи, се препоръчва да бъде взета от пациента от лекар (с изключение на кръвна проба, която може да бъде взета от медицинската сестра).
Ако е необходимо събиране на материал с помощта на тампонна сонда върху открита операционна повърхност или в случай на друга инвазивна интервенция, е разрешено да се използват готови тампонни сонди с международно ниво на безопасност не по-ниско от Клас IIA, одобрени за употреба за тези цели в Руската федерация по установения ред.
6.1. Кръвни проби
Проби за определяне на наличието на биологични агенти в кръвта (бактериемия, виремия и др.) се получават чрез венепункция на периферни вени (обикновено вените на лакътя), артерии или от петата при новородени.
Вземането на проба от постоянен интравенозен или интраартериален катетър е разрешено само в случаите на съмнение за наличие на свързана с катетър инфекция или невъзможност да се получи чрез венепункция.
6.1.1. При остър сепсис, менингит, остеомиелит, артрит, остра нелекувана бактериална пневмония и пиелонефрит се вземат 2 проби от два съда или две части на кръвоносен съд преди започване на антибиотична терапия.
6.1.2. Ако подозирате наличието на ендокардит и бавен сепсис с малка (10-30 CFU / ml) концентрация на патогена в кръвообращението:
при наличие на остър процес се вземат 2 проби от две части на съдовете (различни съдове) през първите 1-2 часа от повишаването на телесната температура (не при пика на температурата!) и преди началото на терапия;
в случай на подостър или бавен ход, на първия ден се вземат 3 проби с интервал от 15 минути или повече. Ако всички проби са отрицателни, на втория ден след засяването се събират още 3;
при пациенти с ендокардит, приемащи антибиотици, се вземат 2 отделни проби на всеки три дни с положителна клинична динамика на терапията;
за потвърждаване на клиничната диагноза "инфекциозен ендокардит", ако е невъзможно да се получи необходимия брой кръвни проби от пациента за микробиологичен анализ или ако резултатите от културата са отрицателни, кръвните проби се изпращат за изследване на имунологичните фактори на защитата на организма система (система за антиинфекциозна резистентност - CAIR); доставката до лабораторията се извършва в стерилни стъклени или епруветки за еднократна употреба с капак (запушалка), получени предния ден в лабораторията;
ако пациентът страда от вродено сърдечно заболяване (CHD), трябва да се помни, че CHD е продрома на инфекциозен ендокардит и определянето на имунологичните фактори на CAIR е включено в алгоритъма за изследване на такъв пациент.
6.1.3. При пациенти, чийто комплекс от терапия включва антибиотици, се вземат 6 проби в рамките на 48 часа; пробите трябва да се вземат непосредствено преди въвеждането (приемането) на следващата доза от лекарството.
6.1.4. Ако пациентът има треска с неизвестен произход, първоначално се вземат 2 проби от различни кръвоносни съдове (две части на съда), след това след 24-36 часа се вземат още 2 проби на фона на повишаване на телесната температура ( не на пика на температурата!).
6.1.5. Техника за вземане на кръвна проба. Кръвните проби за инокулация се взимат от 2 души до леглото на пациента или в стаята за лечение.
За да получите проба, направете следното:
дезинфекцирайте областта на кожата над избрания за пункция съд: третирайте кожата с тампон, навлажнен със 70% етилов алкохол, след това с друг тампон, навлажнен с 1-2% разтвор на йод или друг дезинфектант, одобрен за употреба за тези цели по предписания начин, с кръгови движения, започвайки от центъра, в рамките на 30 s;
изчакайте, докато третираната зона изсъхне. Не е позволено палпиране на съда след обработка на кожата преди поставяне на иглата;
при работа с флакони с двойна среда: събирайте 10 ml кръв от възрастни със стерилна спринцовка и 5 ml от деца; отворете бутилката над пламъка на спиртната лампа; добавете кръв към флакона от спринцовката, след като извадите иглата; изгорете гърлото и тапата на бутилката в пламъка на алкохолна лампа, затворете бутилката с тапа; внимателно, за да не накиснете тапата на бутилката, разбъркайте съдържанието й с кръгови движения.
При използване на готови флакони със среда и реагенти, които неутрализират антибиотиците и разрушават кръвните телца или без тях, одобрени за употреба за тези цели в Руската федерация по установения ред, възрастни получават 10-30 ml кръв, деца - 0,5- 3,0 мл.
при което:
успоредно с дезинфекцията на кожата за пункция, капачките на бутилките се третират със 70% етилов алкохол (забранено е използването на йоден разтвор за обработка на капачки при работа с бутилки, например, Bactec, Vital и други подобни одобрени за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред);
кръвта, получена от възрастни, в равни обеми, пробити тапата на контейнера, се въвежда в "аеробни" и "анаеробни" контейнери; кръв, получена от деца - в специална "бебешка" бутилка, пробиваща тапата на контейнера.
6.1.6. След венопункция и инокулация на кръв в съд със среда, за предотвратяване на евентуално дразнене (изгаряния), остатъците от йод се отстраняват от кожата на пациента с тампон, навлажнен със 70% етилов алкохол.
6.2. Проби за инфекциозни и възпалителни процеси на централната нервна система (ЦНС)
6.2.1. ликьор. 4,0-5,5 ml цереброспинална течност, получена чрез лумбална пункция от субарахноидалното пространство между прешлените L3-L4, L4-L5 или L5-S1, както и чрез пункция на страничните вентрикули на мозъка, се изпращат в микробиологичната лаборатория за изследване.
Вземането на проби се извършва чрез бавно пълнене на три епруветки с три порции материал за изследване в лаборатории. Използвайте стерилни епруветки с плътно прилепнали капаци (за еднократна употреба със запушалка или стъкло със стерилна гумена запушалка).
От трите епруветки с материала, получен чрез лумбална пункция, винаги изпращайте епруветката с най-мътно съдържание, като правило това е втората епруветка в процеса на събиране.
При получаване на материала чрез пункция на страничните вентрикули на мозъка, прясно извадената цереброспинална течност от спринцовката, след отстраняване на иглата, се въвежда в стерилна епруветка над пламъка на алкохолна лампа, гърлото на епруветката и запушалката се изгаря в пламъка на спиртна лампа (при работа със стъклена епруветка, запечатана с памучно-марлени или гумени запушалки) и запушалката на епруветката.
Във всички случаи със съмнение за менингит, в допълнение към цереброспиналната течност, се взема материал от предполагаемите огнища на инфекция: тампони от назофаринкса, средното ухо, кръвни проби и заедно с цереброспиналната течност се изпращат в лабораторията. Добър начин за запазване на менингокока за дълго време (до 48 часа) е да вземете материала с тампон с тампон и да го поставите в епруветка с транспортна среда със или без активен въглен.
Ликьорът за микробиологични изследвания незабавно се изпраща в лабораторията върху нагревателна подложка, за да се поддържа температурата 35-37 ° C. При липса на такава възможност, цереброспиналната течност се събира в контейнер с транспортна среда и се оставя в хладилник (при температура 4-8 ° C) до сутринта, след което се доставя в лабораторията.
Ако е необходимо да се проведат вирусологични изследвания, пробите от CSF се поставят в хладилник при температура 2-8 ° C или се замразяват, или се съхраняват при стайна температура, като се използват контейнери със специална течна среда.
6.2.2. Материал от мозъчни абсцеси. Като се има предвид, че в 90% от случаите в пробата растат анаероби, материалът се аспирира от фокуса и се изпраща в лабораторията в контейнер с анаеробна среда, одобрена за използване за тези цели в Руската федерация по установения ред, или в спринцовка, с която е взета пробата, след изваждане на иглата и затваряне на спринцовката със стерилна гумена запушалка.
Пробата се доставя веднага след получаване.
6.2.3. Материал за биопсия. По време на операцията се получават проби, поставени в контейнер с анаеробна среда или в стерилна епруветка с тиогликолова среда, затворена със стерилна гумена запушалка.
Материалът се изпраща незабавно в лабораторията.
6.3. Проби за инфекциозни и възпалителни очни процеси
Повечето от пробите, взети от окото, се вземат от офталмолог. Тези проби трябва да бъдат инокулирани върху хранителни среди до леглото на пациента или в стаята за лечение, или в лекарския кабинет по време на приема, а инокулираният материал трябва да бъде прехвърлен в лабораторията за култивиране, изолиране, идентифициране и определяне на антибиотична чувствителност на патогени . Проби, взети с помощта на инвазивни и други агресивни методи, се събират успоредно с конюнктивална намазка, която в такива случаи служи за контрол.
В навечерието, за 6-8 часа (нощ), всички лекарства и процедури се отменят.
При наличие на специфични клинични прояви на инфекциозен и възпалителен процес или подозрения на лекар е задължително преди анестезия да се изготвят намазки за определяне на хламидия и вируси, а лекарствата да се изпращат в лабораторията. За запазване на хламидията и вирусите материалът се събира в контейнери с транспортна среда.
Отделянето се събира със стерилна стъклена пръчка или стерилна тампонна сонда: с две или три движения се извършва по протежение на лигавицата на долната преходна гънка, от ръба на клепачите; с язва - от роговицата (след анестезия), с "ъглов конюнктивит" - от ъглите на клепачите.
Тайната от слъзния сак се събира със стерилен тампон след лек масаж.
Взетият материал с пръчка и/или тампон сонда се поставя в контейнер с транспортна среда или в стерилна стъклена епруветка с течна среда и се доставя в лабораторията, като се внимава да не се накисва целулозната или памучно-марлевата запушалка на тръбата.
Когато използвате сонди за тампон, за предпочитане е да използвате контейнери за еднократна употреба с транспортна среда или стерилни стъклени епруветки с памучно-марлени запушалки, пълни със стерилна среда.
Най-правилната информация за причинителя на възпалителния процес може да се получи от микробиологичния анализ на изстъргвания.
6.3.1. Конюнктивит и блефароконюнктивит. Предния ден за 6-8 часа (нощ) всички лекарства и процедури се отменят при пациенти в болницата.
Пробите от конюнктивата се събират с помощта на стерилен, предварително навлажнен тампон от вискоза или калциев алгинат в стерилна епруветка за еднократна употреба или стъклена епруветка. Пробите от всяко око се събират с отделни тампони с две или три кръгови движения по протежение на лигавицата.
Клубените с щрихи от всяко око маркират съответно "дясно" и "ляво" и незабавноизпратен в лабораторията.
Преди остъргване се инжектират 1-2 капки анестетик, например пропаракаин хидрохлорид или друг, който е наличен и одобрен за употреба за тези цели по предписания начин.
С две или три кратки, резки движения в една посока, с помощта на специална стерилна шпатула, се събират остъргвания от конюнктивата. При извършване на манипулацията окото трябва да е отворено.
При вземане на пробата трябва да се внимава да не се докосват миглите.
Пригответе най-малко 2 тампона от всяко око, като нанесете материала върху чисто предметно стъкло без мазнини с кръгови движения върху зона с диаметър 1 cm.
Намазките се фиксират за 5 минути в 95% метилов алкохол в специален, плътно затворен съд.
Веднагав лабораторията се пренасят епруветки със сонди, тампони и очила с намазки.
6.3.2. Бактериален кератит. Предния ден за 6-8 часа (нощ) всички лекарства и процедури се отменят при пациенти в болницата.
Вземете 2 проби от конюнктивата, както е описано в параграф 6.3.1, т.к резултатите от тяхната култура могат да бъдат полезни при определяне на източника на замърсяване на роговицата (използва се една проба, ако се подозира гъбична инфекция).
При съмнение за вирусна инфекция конюнктивалният ексудат и изстърган материал се поставят в специална транспортна среда за вируси.
Анестезията се извършва, както е посочено в точка 6.3.1.
Събират се 3-5 остъргвания по метода, описан в параграф 6.3.1.
Поставете събрания материал в малка (5 ml) стерилна епруветка с винт за еднократна употреба или стерилна стъклена епруветка с гумена запушалка, пълна със среда.
Пригответе 2-3 намазки върху предметно стъкло и след изсъхване ги фиксирайте, както е описано в параграф 6.3.1.
Веднагапрехвърлете целия материал в лабораторията.
6.3.3. Бактериален ендоофталмит. Проба от стъкловидното тяло (1-2 ml) се събира чрез аспирация с тънка игла и пробата се получава по време на витректомия.
След това направете следното:
След изваждане на иглата от спринцовката, съдържанието се поставя в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или епруветка, плътно затворена с гумена запушалка;
проба от материала може да бъде оставена в спринцовката, като се отстрани въздухът и се извади иглата, затворете спринцовката със стерилна гумена запушалка;
вземете проба от конюнктивата, както е описано в параграф 6.3.1;
всички материали незабавноизпратен в лабораторията.
6.3.4. Пресептален целулит. Кожата се третира със 70% етилов алкохол и 1-2% йоден разтвор или йодоформ или друг наличен дезинфектант, одобрен за употреба по предписания начин.
При липса на отворена рана, горният или долният клепач се пробива, за да се събере материал.
При наличие на отворена рана се взема проба от гноен материал със спринцовка с игла.
Подгответе намазки върху предметно стъкло, както е описано в 6.3.1.
Прехвърлете събрания материал в транспортен контейнер със среда за анаероби или, оставяйки го в спринцовка, която след отстраняване на въздуха от него и изваждане на иглата се затваря със запушалка.
Събран материал и щрихи незабавноизпратен в лабораторията.
6.3.5. Орбитален целулит. Съберете аспирата от зоната съгласно метода, описан по-рано в параграф 6.3.2.
Вземете проба от конюнктивата и пригответе намазки върху предметно стъкло, както е в параграф 6.3.1.
За доставка до лабораторията използвайте материалите, описани в точка 6.3.3.
Вземете кръвни проби от пациента съгласно метода, описан в точка 6.1. Кръвните проби, целият събран материал се пренасят в лабораторията.
6.3.6. Възпаление на слъзната жлеза (дакриоаденит).
Съберете гнойното съдържание с помощта на тампон-сонда, както е в параграф 6.3.1.
Не използвайте метода на аспирация с игла, за да не нарушите целостта на слъзната жлеза.
Сондата за тампон и предметните стъкла с намазки се пренасят в лабораторията.
6.3.7. Възпаление на слъзния сак (дакриоцистит). Вземете проба от конюнктивата, както е в параграф 6.3.1.
Масажирайте и натиснете върху слъзния сак, за да получите проба от ексудат за инокулация и приготвяне на намазки, или, като използвате друг метод, съберете ексудат със спринцовка с игла.
Поставете събраната проба от ексудат в транспортни контейнери, както е описано по-горе, и доставете в лабораторията.
6.3.8. Каналикулит. Натиснете вътрешната страна на клепача, за да изтеглите гной.
След това работата се извършва съгласно методите, описани по-рано в този раздел.
При наличие на специализирано отделение (клиника) в лечебно-профилактична организация, всички култури се правят до леглото на пациента върху хранителни среди, получени в лабораторията. Посаденият материал заедно с приготвените намазки се пренасят в лабораторията.
6.4. Проби за инфекциозни и възпалителни процеси на ушите
6.4.1. При увреждане на външното ухо кожата се третира със 70% алкохол, последвано от изплакване със стерилен физиологичен разтвор. Отделянето от огнището се събира върху стерилна епруветка за еднократна употреба или епруветки с транспортна среда, или върху тампон, монтиран в стерилна стъклена епруветка, затворена със запушалка, със или без специална среда. Тампонът се поставя в епруветка и се доставя в лабораторията.
6.4.2. При увреждане на средното и вътрешното ухо се събират пункции и друг материал, получен по време на операцията. Елементите се доставят в лабораторията в затворена спринцовка с предварително отстранен въздух. Тъканни проби - в транспортен контейнер с анаеробна среда, одобрена за използване за тези цели в Руската федерация в съответствие с установената процедура, или в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка. Възможно е използването на стерилна стъклена тръба, затворена със стерилна гумена запушалка.
6.4.3. Тимпаноцентезата на тъпанчевата мембрана се извършва за микробиологична диагностика на инфекции на средното ухо само в случаите, когато пациентът не се повлиява от предишна терапия или при торпидно протичане на катарален среден отит дори при визуална липса на ексудат в изпъкналата кръв (назофарингеални култури се положителен в по-малко от 90% от случаите).
За получаване на проба външният канал се почиства с тампон, навлажнен със 70% етилов алкохол, последвано от третиране със стерилен физиологичен разтвор.
С помощта на спринцовка течността се събира от тъпанчевата кухина. Пробата се доставя в лабораторията в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или в затворена спринцовка с предварително обезвъздушен въздух.
Ако тъпанчевата мембрана е повредена, материалът се събира с тампонна сонда с помощта на спекулум. Тампонът се поставя в стерилна еднократна епруветка (тубичка) или контейнер с транспортна среда (разрешено е използването на стерилна стъклена епруветка със или без среда) и в тази форма се доставя в лабораторията.
6.5. Проби за инфекциозни и възпалителни процеси на дихателните пътища
6.5.1. Горни дихателни пътища. Ако пациентът има съмнения за дифтерия, магарешка кашлица, хламидия, микоплазмоза, легионелоза, гонорея, лабораторните работници се информират преди доставянето на пробата, за да се подготвят за анализа на този вид материал.
6.5.1.1. Проба от лигавиците на предните части на носната кухина се събира с една стерилна сонда-тампон, монтирана в стерилна епруветка за еднократна употреба (tubeser) или специално монтирана в стерилна стъклена тръба:
от епруветката се отстранява тампон, вкарва се в дясната ноздра и с ротационни движения се събира материал от крилата на носа и горния ъгъл на носния отвор;
повторете манипулацията за лявата ноздра;
Поставете тампона в епруветка и го доставете в лабораторията.
Получените по този начин проби са полезни за определяне на носенето на Staphylococcus aureus при медицински работници, наличието на патогени на нозокомиална инфекция, както и за характеризиране на дисбиотични нарушения на лигавиците на горните дихателни пътища при цялостно клинично и имуномикробиологично изследване. на пациенти, провеждани в научни и практически лаборатории.
Ако има огнища на възпаление или язва в носната кухина, се използва отделен тампон за събиране на материал от огнището (огнищата).
6.5.1.2. Аспирати от назофаринкса се събират за определяне на носенето на пиогенен стрептокок, менингокок, патогени на дифтерия и коклюш, както и по време на епидемиологични изследвания на антимикробната резистентност на S. pneumoniae и H. influenzae:
смукателен материал от назофаринкса;
Прехвърлете материала в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или специална стерилна епруветка с газопропусклива целулозна или памучно-марлена запушалка, като внимавате да не се накисва с проба от клиничен материал.
6.5.1.3. Назофарингеален тампон. Материалът се събира за определяне на носенето на менингококи и за диагностициране на магарешка кашлица.
Внимателни въртеливи движения по протежение на долния назален проход последователно в двете ноздри се вкарват в назофаринкса памучна, вискозна или калциев алгинат тампонна сонда в назофаринкса. В същото време крилата на носа се притискат към тампона и носната преграда за по-близък контакт с лигавицата.
Поставете тампона в стерилна епруветка и го доставете в лабораторията.
6.5.1.4. Измиване на носа се използва за определяне на наличието не само на бактериална, но и на предимно вирусна инфекция.
Предупредете пациента да не поглъща по време на процедурата.
Главата на пациента се поставя в положение нагоре и назад под ъгъл от приблизително 70 °, във всяка ноздра се инжектира 5 ml стерилен физиологичен разтвор, пациентът трябва да бъде в това положение за 3-5 секунди.
За да съберете материал, спуснете главата на пациента напред, за да източите течността от ноздрите в стерилен контейнер за еднократна употреба, или аспирирайте течността, като поставите гумен дренаж във всяка ноздра.
Поставете равен обем промиване в контейнер с вирусна транспортна среда или поставете тази порция в стерилен контейнер за еднократна употреба.
6.5.1.5. Синусова пункция. Използвайки техниката на аспирация със спринцовка, специално обучен, опитен лекар или отоларинголог получава материал от челюстните фронтални или други синуси. Съдържанието на спринцовката се поставя в контейнер с транспортна среда за анаероби или в стерилна епруветка с тиогликолова среда. Можете да оставите материала в спринцовката и със стерилна гумена запушалка да го доставите в лабораторията.
6.5.1.6. Получаване на проба от лигавицата на фаринкса (фаринкса).
Не се допуска събиране на материал от фаринкса (фаринкса) с възпален епиглотис, тъй като процедурата може да доведе до сериозно запушване на дишането.
Когато вземете проба от лигавицата на фаринкса (глътката), не докосвайте лигавиците на бузите, езика, венците, устните с тампон и също така не събирайте слюнка, тъй като този материал характеризира лигавиците на устната кухина, тоест горната част на стомашно-чревния тракт.
Тампон от фаринкса (фаринкса) се взема на празен стомах или 3-4 часа след хранене. Преди да вземе проба, пациентът трябва да изплакне устата си с топла преварена вода.
За да получите проба, използвайте стерилна шпатула или тампон: отстранете тампон от вискоза от стерилна епруветка (епруветка) за еднократна употреба или използвайте тампон, приготвен в лаборатория, монтиран в стерилна стъклена епруветка. Използването на тампонна сонда с вискозна глава е за предпочитане, т.к вискозата абсорбира по-малко течност и повече клетъчен материал.
С едната ръка езикът на пациента се притиска със стерилна шпатула.
С другата ръка се събира материал, като се третират последователно дясната сливица, дясната палатинна дъга, лявата сливица, лявата палатинна дъга, увулата с тампон; на нивото на увулата докоснете задната част на фаринкса с тампон.
Получените по този начин проби са полезни за определяне наличието на причинител на нозокомиална инфекция, както и за характеризиране на дисбиотичните нарушения на лигавиците на горните дихателни пътища по време на цялостно клинично и имуномикробиологично изследване на пациенти, проведено в научни и практически лаборатории.
При наличие на огнища на възпаление или язви по лигавицата, те третират събирането на пробата особено внимателно и събират допълнителен материал от огнището (огнищата) с отделен тампон.
Поставете тампона в стерилна еднократна или стъклена епруветка и го доставете в лабораторията.
6.5.1.7. При съмнение за дифтерия се информират лабораторните работници, като се посочват диагнозата в посоката.
При наличие на респираторен патологичен процес материалът се събира едновременно от лигавиците на назофаринкса и фаринкса по методите, представени по-горе.
При съмнение за кожна форма на дифтерия се взема материал от кожата, както и от лигавиците на фаринкса (фаринкса) и назофаринкса и всички проби се доставят в лабораторията.
6.5.2. Долни дихателни пътища. Микробиологичната диагностика на възпалителните процеси в долните дихателни пътища представлява сериозни затруднения, т.к По време на събирането пробата може да бъде замърсена с микроорганизми, които колонизират горните дихателни пътища. Тази екологична ниша е доста обилно засята с опортюнистични микроби, особено при наличие на дисбиоза (качествено – видов състав и/или количествено – концентрацията на видовете, присъстващи в CFU/ml при отслабен и/или имунокомпрометиран контингент от субекти).
Поради тази причина пробите от материал от долните дихателни пътища се събират особено внимателно, за да се получи точна информация за етиологичния агент(и). При използване на инвазивни методи за вземане на проба (ако това не се случи по време на операцията), използваните инструменти преминават през горните дихателни пътища и има реална възможност за засяване на по-дълбоки локуси с микроорганизми - обитатели на горните дихателни пътища.
6.5.2.1. храчки.
Свободно отделяща се (експекторирана) храчка- сутрешното събиране е за предпочитане.
Преди да вземе проба, пациентът, ако е възможно, трябва да измие зъбите си и да изплакне устата и гърлото си с топла преварена вода, ако пациентът не може да направи това сам, тогава тоалетната на устната му кухина се извършва от медицински работници .
Предупредете пациента да не събира слюнка или назофарингеален секрет в контейнер.
Проба от храчки, получена в резултат на дълбока кашлица, се събира в специален стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или в специално подготвен стерилен стъклен буркан.
Пробата от храчките се изпраща в лабораторията.
Индуцирана храчка (препоръчва се главно при съмнения за Mycobacterium tuberculosis и Pneumocystis yiroveci)- сутрешното събиране е за предпочитане.
Преди да вземе проба, пациентът, ако е възможно, трябва да измие зъбите си и да изплакне устата и гърлото си с топла преварена вода; ако пациентът не може да направи това сам, тогава тоалетната на устната му кухина се извършва от медицинския персонал.
Преди процедурата чиста четка за зъби се навлажнява с топла преварена вода и се прекарва по лигавицата на двете бузи, езика и венците.
Активно изплакнете устата на пациента с топла преварена вода.
С помощта на инхалатора оставете пациента да погълне 20-30 ml 3-10% стерилен физиологичен разтвор.
Съберете индуцираната храчка в специален стерилен контейнер с винт за еднократна употреба или в подходящо подготвен стерилен стъклен буркан.
Прехвърлете пробата в лабораторията.
Едновременно с пробата от храчките, лабораторията трябва да изпрати проба от фаринкса (фаринкса), събрана след оралната тоалетна и непосредствено преди събирането на храчки, свободно отделени (експекторирани) или индуцирани.
6.5.2.2. Трахеостомия и ендотрахеални аспирати. Трахеостомата се колонизира от микроорганизми още 24 часа след интубацията на пациента, в резултат на което резултатите от изследването на културата са с ниска клинична значимост. Като се има предвид горното, резултатите от културата, получени при интубирани пациенти, трябва постоянно да се сравняват с клиничните данни (например треска или поява на инфилтрати на рентгенови лъчи).
Проби от бронхиална промивка или бронхоалвеоларен лаваж се събират, ако е възможно, преди събиране на остъргвания или биопсии. Правилото е продиктувано от необходимостта да се избягва излишната кръв в получената течност, т.к кръвта може да промени концентрацията на клетъчни и неклетъчни компоненти на пробата и да повлияе на резултата от микробиологичния анализ.
Съберете аспирираната проба в стерилен контейнер с винт за еднократна употреба или в подходящо монтиран стерилен стъклен контейнер или в стерилна стъклена тръба за еднократна употреба със запушалка или доставете в лабораторията в затворена спринцовка с отстранен въздух.
6.5.2.3. Проби, получени с помощта на бронхоскоп. Бронхоалвеоларен лаваж (проба по избор), зачервяване на бронхите (ниска чувствителност при диагностициране на пневмония), изстъргване от бронхите (по-значимо от зачервяване), проби от транстрахеална биопсия се получават чрез въвеждане на бронхоскоп трансназално или трансорално на неинтубиран пациент или през ендотрахеална тръба при интубиран пациент.
За да получите проба от промивка от бронхите или бронхоалвеоларен лаваж:
стерилен небактериостатичен (официален) физиологичен разтвор се инжектира със спринцовка през биопсичния канал на бронхоскопа на отделни порции (общ обем от 5-20 до 100 ml);
преди да въведете следващата порция физиологичен разтвор, внимателно аспирирайте поставената част от спринцовката в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или в стерилна еднократна или стъклена епруветка със запушалка или я оставете в затворена спринцовка, след като отстраните въздуха от нея ( обикновено 50-70% от инжектирания физиологичен разтвор, намиращ се в промивка);
всяка порция за изсмукване се събира в отделна чиния;
в края на процедурата комбинирайте пробите, получени от едно и също място. Проби от различни места (например десен горен лоб на белия дроб и десен долен лоб) трябва да се съединяват само след консултация с лекуващия лекар;
в посоката показват общия обем на инжектирания физиологичен разтвор.
За да получите проба от остъргване от бронхите:
телескопичен двоен катетър с дистален край, обработен с полиетиленгликол (или друг подходящ реагент), се вкарва през биопсичния канал на бронхоскопа, за да се предотврати замърсяване на пробата;
събирайте материала в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или в транспортен контейнер със среда за анаероби или в стерилна епруветка с тиогликолова среда, плътно затворена със стерилна гумена запушалка;
доставете материала в лабораторията.
За получаване на трансбронхиална биопсия се взема проба през биопсичния канал на бронхоскопа и се поставя в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка с малко количество (1-2 ml) небактериостатичен (официален) физиологичен разтвор или в епруветка с тиогликолова среда, плътно затворена с гумена запушалка, пренесена в лаборатории
6.5.2.4. Проби от белодробен аспират. За да се вземе пробата, иглата се вкарва през гръдната кост в инфилтрата на белия дроб под контрола на CT скенер. Материалът се аспирира от огнището на възпалението. Ако има голяма инфилтрация или няколко от тях, е необходимо да се вземат няколко проби от съответните огнища или няколко проби от едно голямо огнище. Материалът се пренася в лабораторията в транспортен контейнер с анаеробна среда или в стъклена епруветка с тиогликолова среда, или в контейнер за еднократна употреба с винт.
6.5.2.5. Проби от белодробна биопсия. Ако е възможно, вземете парчета тъкан с размер 1-3 см. Ако лезията е голяма или няколко, вземете няколко проби. Поставете пробата в стерилен контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или в транспортен контейнер със среда за анаероби, или в контейнер (епруветка) с тиогликолова среда, затворен със стерилна гумена запушалка.
6.6. Проби за инфекциозни и възпалителни процеси на пикочно-половата система
6.6.1. Проби от урина.
6.6.1.1. Общи правила за събиране на проби:
не се допуска събиране на урина от легло или от торбичка за урина;
за анализ на урината по време на естествено уриниране използвайте средната сутрешна порция;
преди да вземете проба, е необходимо да изплакнете обилно външните полови органи и областта на ануса с топла преварена вода; В този случай трябва да се обърне специално внимание на лечението на отвора на уретрата при мъжете (преддверието на влагалището - при жените), за да сте сигурни, че по време на процедурата пробата няма да бъде допълнително замърсена с микроби;
за обработка, не е позволено да се използват дезинфектанти, т.к когато се въвеждат в проба, те могат да инхибират растежа на микроорганизми;
пробата се пренася в лабораторията не по-късно от 2 часа от момента на вземане;
за събиране и доставяне на проби в лабораторията използвайте стерилни контейнери за еднократна употреба с винтова капачка или епруветки (възможно е да се използват стерилни специално монтирани стъклени епруветки с газопропусклива целулозна или памучно-марлена запушалка, но не се обръща специално внимание на накиснете тапата);
доставката до лабораторията на аспиратни проби, получени с помощта на техниката за пункция на надпубисния пикочен мехур, се извършва в транспортен контейнер със специална среда за анаероби или в затворена спринцовка без игла;
при съмнение за вирусна инфекция, пробите се доставят в лабораторията в стерилен контейнер за еднократна употреба, поставен върху разтопен лед (сух лед не се допуска!);
всяка процедура за получаване на проба с помощта на катетър (особено при жени) се извършва при внимателно спазване на правилата за асептика, за да се предотврати допълнително замърсяване на пациента по време на поставянето на катетъра;
за микробиологично изследване не се допуска използването на проба от ежедневен m
6.6.1.2. Събиране на проба от урина от жени по време на естествено уриниране.
Използвайте средна порция като първото преминаване на урина трябва да премахне коменсалите, вероятно в уретрата. Пробата, взета при следващите пасажи, не трябва да е замърсена. Надеждността на положителните резултати от такъв материал е 80% при събиране на една проба, 90% - при две последователни проби и 100% - при три, ако всички проби дават еднакви резултати.
Медицинският специалист, който взема пробата, трябва да измие ръцете си със сапун, да изплакне с вода и да подсуши. Ако пробата се взема от самия пациент, той се обяснява подробно как се прави това, като се има предвид горната подготовка и той се предупреждава какво може да се случи, ако наруши правилата:
трябва да изплакнете обилно отвора на уретрата и областта на вестибюла на влагалището, както и перинеума и областта на ануса със сапунена вода или течен сапун, изплакнете с топла преварена вода, подсушете с стерилна марля;
отворът на влагалището трябва да се затвори със стерилен памучен тампон;
дръжте външните срамни устни разделени, докато уринирате;
изцедете малко количество урина в специален контейнер за изхвърляне, докато уринирате;
Съберете средна порция урина (10-20 ml) в специален контейнер за еднократна употреба с винтова капачка или стерилен стъклен съд, специално монтиран в лабораторията.
6.6.1.3. Събиране на проба от урина от мъже по време на естествено уриниране.
При мъжете е необходима една порция урина за микробиологично изследване, т.к те са значително по-малко вероятно да бъдат заразени от жените.
Лицето, което взема пробата, трябва да измие ръцете си със сапун, да изплакне с вода и да подсуши. Ако пациентът сам взема пробите, той трябва да бъде обяснен подробно как се прави това, като се вземе предвид подготовката, описана по-долу, и да се предупреди какво може да се случи, ако правилата бъдат нарушени:
[защитен с имейл], ще го разберем.
Провеждането на изследвания по метода PCR е разрешено на базата на съществуващи лаборатории, при условие че в лабораторията са организирани самостоятелни или отделни работни зони, които съответстват на етапите на PCR анализ.
PCR лабораторията трябва да включва следния минимален набор от работни зони:
- приемане, регистриране, анализ и първична обработка на материала;
- изолиране на ДНК/РНК;
- приготвяне на реакционни смеси и PCR;
- откриване на продукти на амплификация чрез електрофореза или GiFA.
Важно е да се отбележи, че ако се използва методът, няма нужда да се откриват продукти на амплификация чрез електрофореза. Следователно работната зона в лабораторното помещение за електрофореза може да бъде пропусната.
В PCR лабораториите също е необходимо да се предвиди наличието на помощни помещения: архив (за счетоводни документи), стая за персонал, кабинет на управителя, съблекални за служители, стая за хранене, санитарни помещения (тоалетни), помощни помещения (склад).
В идеалния случай е необходимо да има автоклавно помещение за дезинфекциращия тестов материал. Може да се споделя с други части на институцията, при условие че са спазени изискванията за биосигурност.
Помещенията за извършване на работа на етапите на PCR анализ трябва да бъдат боксирани (кутии с предварителни кутии). В областта на приемане, регистриране, анализ и първична обработка на материалаполучават материал, подготовка на пробите (сортиране, етикетиране, центрофугиране и др.), съхранение и първично инактивиране на остатъците от биоматериал с дезинфектанти. Зоната за приемане, регистриране, анализ и първична обработка на материала се намира в помещението за приемане на материала или в отделно боксирано помещение. Тук можете също да получавате и обработвате проби за изследване по други методи (например имунология), при условие че е отделено отделно оборудвано работно място за PCR анализ.
Зона за извличане на ДНК/РНКпоставени в отделна стая. При организиране на PCR лаборатория на базата на съществуваща лаборатория е разрешено да се изолира ДНК / РНК в помещения, в които се извършват други видове изследвания, с изключение на работа по генно инженерство. В този случай в стаята е организирана работна зона за извличане на ДНК/РНК, в която се намира PCR кутия или биологичен сейф. Не извършвайте други видове работа в PCR кутията за изолиране на ДНК/РНК!
В зоната на приготвяне на реакционни смеси и PCRприготвяне на PCR смес, въвеждане на изолирани ДНК/РНК или сДНК препарати в епруветка за PCR, обратна транскрипция на РНК и амплификация на ДНК или сДНК. Помещението за приготвяне на реакционни смеси и PCR трябва да бъде отделно. Приготвянето на реакционни PCR смеси се извършва в PCR кутия.
Ако е необходимо, етапът на извличане на ДНК/РНК може да се комбинира в една и съща стая с етапа на приготвяне на реакционни смеси и провеждане на PCR в присъствието на отделни PCR кутии в него - за приготвяне на реакционни PCR смеси и за изолиране на ДНК/РНК.
Зона за откриване на продукти за усилванеразположени в отделна стая, по възможност оборудвана с PCR кутия. Ако е необходимо едновременно да се използва методът на електрофореза и методът за хибридизационен анализ за откриване на продукти на амплификация, трябва да се отдели отделна работна зона в стаята за откриване за хибридизационен анализ. В този случай оборудването и аксесоарите за всеки тип детекция са етикетирани за всяка зона. Не се допуска използването на пипети и съдове, предназначени за електрофореза за хибридизационен анализ.
Решенията за планиране и разположението на оборудването трябва да осигуряват потока на движение на изучавания материал. Обменът на въздух между помещението за откриване на усилващи продукти и други помещения трябва да бъде напълно изключен.
PCR лабораторията е оборудвана с течаща вода, канализация, електричество и парно. Всички помещения на PCR лабораторията са осигурени с достатъчно естествено и изкуствено осветление.
При изграждане на нови или реконструкция на съществуващи PCR лаборатории, помещенията се оборудват с приточно-смукателна или смукателна вентилация. Разликата в налягането на въздуха в помещенията на PCR лабораторията се постига поради разлики в честотата на обмен на въздух в тях. Скоростта на обмен на въздух трябва да съответства на стойностите, дадени в таблицата:
При необходимост в PCR лабораторията могат да се монтират климатици.
Вътрешната декорация на помещенията се извършва в съответствие с тяхното функционално предназначение. Повърхностите на стените, подовете и таваните в лабораторните помещения трябва да са гладки, без пукнатини, лесно обработваеми, устойчиви на действието на детергенти и дезинфектанти. Подовете не трябва да са хлъзгави. Лабораторните мебели трябва да имат покритие, устойчиво на действието на детергенти и дезинфектанти. Повърхността на масите трябва да е без пукнатини и шевове. Лабораторните помещения трябва да са непроницаеми за гризачи и насекоми. PCR лабораторията е снабдена с пожарогасителни средства.
Оптималното време за изследване на кръвта е в интервала от 1 до 4 часа след вземането.В интервала от 5 до 30 минути тромбоцитите временно се адаптират към антикоагуланта и тяхната агрегация, което може да доведе до фалшивото им намаляване в кръвната проба.
Не е желателно кръвта да се изследва по-късно от 8 часа след вземането, т.к някои характеристики на клетките се променят: обемът на левкоцитите намалява, обемът на еритроцитите се увеличава, което в крайна сметка води до погрешни резултати от измерването и неправилно тълкуване на резултатите. Само концентрацията на хемоглобина и броят на тромбоцитите остават стабилни през деня на съхранение на кръвта.
Кръвта не трябва да се замразява. Капилярната кръв с K 2 EDTA трябва да се съхранява при стайна температура и да се анализира в рамките на 4 часа след събирането.
При необходимост от извършване на забавен анализ (транспортиране на дълги разстояния, техническа неизправност на уреда и др.), кръвните проби се съхраняват в хладилник (4 o - 8 o C) и се изследват в рамките на 24 часа. Трябва обаче да се има предвид, че има подуване на клетките и промяна в параметрите, свързани с техния обем. При практически здрави хора тези промени не са критични и не засягат количествените параметри, но при наличие на патологични клетки, последните могат да се променят или дори да бъдат унищожени в рамките на няколко часа от момента на вземане на кръв.
Непосредствено преди изследването кръвта трябва да се смеси добре в продължение на няколко минути, за да се разреди антикоагулантът и да се разпределят равномерно формираните елементи в плазмата. Не се препоръчва продължително постоянно разбъркване на пробите до момента на тяхното изследване поради възможно нараняване и разпадане на патологични клетки.
Кръвен тест на автоматичен анализатор се извършва при стайна температура. Кръвта, съхранявана в хладилника, трябва първо да се затопли до стайна температура, тъй като при ниски температури вискозитетът на кръвта се увеличава и формовите елементи са склонни да се слепват, което от своя страна води до нарушаване на смесването и непълен лизис. Изследването на студена кръв може да предизвика "аларми" поради компресия на хистограмата на левкоцитите.
При извършване на хематологични изследвания на значително разстояние от мястото на вземане на кръв, неизбежно възникват проблеми, свързани с неблагоприятни условия на транспортиране. Влиянието на механичните фактори (разклащане, вибрации, разбъркване и др.), температурните условия, вероятността от разливане и замърсяване на пробите могат да повлияят на качеството на анализите. За да се отстранят тези причини, при транспортиране на епруветки с кръв се препоръчва използването на херметически затворени пластмасови епруветки и специални транспортни изотермични контейнери. При транспортиране не се допуска контакт на пробата (с нативния материал) и формуляра за препоръка, в съответствие с правилата за биологична безопасност.
^ 4.3. Приемане и регистрация на биологичен материал
Епруветките с проби от венозна кръв се доставят в лабораторията в деня на вземане в стелажи в специални торби за доставка на биологичен материал, в които епруветките трябва да са в изправено положение, а при транспортиране на отдалечено разстояние - в специални контейнери.
Служителят на лабораторията, който получава материала, трябва да провери:
Коректността на насочването: формулярът за направление съдържа данните на изследвания (фамилия, име и отчество, възраст, номер на медицинска история или амбулаторна карта, отделение, диагноза, проведена терапия);
Етикетиране на епруветки с кръвни проби (те трябва да бъдат маркирани с кода или фамилията на пациента, идентични с кода и фамилните имена във формуляра за изпращане на материала за изследване). Лаборантът трябва да запише доставения материал, да отбележи броя на епруветките.
^ 4.4 Изчисляване на клетъчния състав на кръвта на хематологичен анализатор
Изчисляването на клетъчния състав на кръвта на хематологичен анализатор трябва да се извършва в стриктно съответствие с инструкциите за устройството.
Когато работите с хематологичен анализатор, трябва:
Използвайте кръв, стабилизирана с K-2 EDTA в препоръчителната пропорция за конкретна сол и епруветки за еднократна употреба за хематологични изследвания (обикновени или вакуумни);
Преди анализ внимателно, но старателно смесете епруветката с кръв (препоръчително е да използвате устройство за смесване на кръвни проби - rotomix за тази цел);
Използвайте регистрирани по предписания начин реактиви; при смяна на реактиви за продукти на друг производител инструментът трябва да бъде проверен и калибриран;
Стартирайте устройството, като наблюдавате всички етапи на промиване, постигайки нулеви (фонови) стойности на индикаторите за всички канали;
Обърнете внимание на съобщенията на инструмента за вероятни систематични грешки: не забравяйте, че увеличаването на MCSN над нормалните стойности, като правило, е резултат от грешка в измерването;
Ако бъде открита грешка, е наложително да се отстрани причината, не работете на дефектното устройство;
Следвайте процедурата за контрол на качеството според съответната програма. с оценка на получения резултат;
Работете смислено, сравнявайки получените резултати с клиничните характеристики на пробите на пациента;
След приключване на измерванията, изплакнете обилно анализатора;
При продължително спиране на устройството е задължително да се извършат всички процедури за съхранение (ако е възможно, съвместно със сервизен инженер);
Ако имате технически проблеми, трябва да използвате помощта на сервизен инженер от фирма, която има лиценз за поддръжка; не се доверявайте на необучен персонал за работа.
При започване на работа с хематологичен анализатор трябва да се вземат предвид границите на линейността на измерване на анализираните параметри. Оценката на проби със стойности на анализираните параметри, превишаващи границата на линейност на измерване, може да доведе до грешни резултати. В повечето случаи, когато се анализират проби с хиперцитоза, анализаторът показва "D" (разреден) вместо стойността на измерения параметър, което показва необходимостта от разреждане на пробата и повторно измерване. Разреждането трябва да се извършва, докато се получат подобни крайни резултати при следващите две разреждания.
^ ПРИМЕР Анализ на проба от пациент с хиперлевкоцитоза на три различни хематологични анализатора е представен в таблицата.
Таблица 3
¦Преброяване на хиперлевкоцитоза, извършено на три различни хематологични анализатора
| ^ Хематологични анализатори | Разреждане на пробата | Обща стойност |
|||
| ^ Пълна кръв | 1:1 | 1:3 | 1:4 | WBC |
|
| 1 | д | 274,5 | 274,5 | 143,1 | 715,5 |
| 2 | 322,6 | 253,2 | 177,7 | 141,8 | 709,0 |
| 3 | д | д | 168,3 | 139,1 | 695,5 |
Таблицата показва, че при анализ на цяла кръв само един анализатор (2-ри) даде цифрова стойност за броя на левкоцитите, другите два са посочили необходимостта от разреждане на пробата. Следващото поетапно измерване на пробата в три разреждания направи възможно постигането на подобни крайни резултати на всички устройства само при разреждане 1: 3 и 1: 4. По този начин общият брой на левкоцитите е 700,0 - 710,0 x 10 9 / L, което е повече от 2 пъти по-високо от първоначалната стойност, получена в цяла кръв на 2-ри анализатор и 1,5 пъти при разреждане 1:1 на 1-ви и 2-ри анализатори.
^ Калибриране на хематологични анализатори
Което постига нулево отклонение на систематичния компонент на грешката (нулево отклонение) или потвърждава, че отклонението е нула, като се вземе предвид грешката при калибриране. Калибрирането на хематологични анализатори може да се извърши по два основни начина:
Пълна кръв;
Въз основа на стабилизирани кръвни проби със сертифицирани стойности.
^ 5.1 Калибриране на цяла кръв
Калибрирането на цяла кръв може да се извърши чрез сравнение с референтен анализатор, чието калибриране е проверено и може да се приеме като еталон.
За калибриране чрез сравнение с референтен анализатор се използват 20 проби от венозна кръв от пациенти, избрани на случаен принцип от ежедневната изследователска програма на лабораторията с референтния анализатор. Кръвта трябва да се събира във вакуумни епруветки с K 2 EDTA антикоагулант. След анализ на референтен анализатор кръвните епруветки се доставят в лабораторията за анализ на калибриран уред. Времето между измерванията на еталонния и калибриран анализатор не трябва да надвишава 4 часа. Анализът на калибриращите проби на калибрирания инструмент трябва да се извършва по същия начин като анализа на проби от пациенти. Получените резултати се въвеждат в таблица във формата, дадена в Приложение 1. Тези резултати се използват за определяне на съответните калибрационни фактори, които са числено равни на коефициентите на наклон на калибровъчните прави линии, минаващи през началото на графиката.
Коефициентите на калибриране се изчисляват на компютър с помощта на програмата EXCEL, включена в пакета Microsoft OFFICE на всяка версия. За да се изчислят коефициентите на калибриране в тази програма, се изгражда диаграма на разсейване, където измерените стойности се нанасят по оста X, референтните стойности се нанасят по оста Y, регресионна линия се задава през началото на координати. Програмата чертае линия за калибриране и определя нейния наклон, който е необходимият коефициент на калибриране. Ако се открият груби грешки - точки, които са значително отдалечени на графиката от калибриращата права линия, те трябва да бъдат премахнати от изчислението (изтрийте целия ред в таблицата EXCEL). Полученият коефициент на калибриране се въвежда в таблицата в Приложение 1 и се използва за ръчно регулиране на калибрирането на устройството в съответствие с неговите инструкции за експлоатация.
^ Калибриране със стабилизирани кръвни проби със сертифицирани стойности
Когато е възможно, трябва да се използват калибратори, които са специално проектирани от производителя за калибриране на специфичния тип анализатор. Несигурността на зададените стойности в съвременните хематологични калибратори обикновено съответстват на медицинските изисквания. Не всички видове анализатори обаче имат такива калибратори. Освен това, поради ограничения срок на годност (обикновено не повече от 45 дни), не винаги е възможно да се получат проби с изтекъл срок на годност.
Контролните материали не са предназначени от производителя за целите на калибриране: толерансите за стойностите са много по-широки, методите за квалификация и контрол на производството не са толкова строги, колкото при калибраторите. При извършване на калибриране контролните материали могат да се използват само като един от източниците на информация за метрологичните свойства на устройството.
Трябва обаче да се има предвид, че когато за целите на калибрирането се използват както контролни материали, така и калибратори, спецификата на подготовката на пробата и работата на анализаторите оказват значително влияние върху компонентите на систематичната грешка. Тези влияещи фактори не могат да се вземат предвид при калибриране с търговски материали. В резултат на това във всички случаи извършеното калибриране трябва да бъде проверено чрез анализиране на статистическите данни на резултатите, получени в проби от пациенти (индекси на еритроцитите, интервали на нормални стойности).
5.2.1 Честота на калибриране на хематологични анализатори
Изискванията за интервалите на калибриране обикновено се намират в инструкциите за употреба на анализатора. Калибрирането обикновено се изисква след ремонт или когато се открие значително отклонение във вътрешните лабораторни процедури за контрол на качеството.
5.2.2 Процедура за калибриране
Процедурата по калибриране се извършва в съответствие с инструкцията за употреба на анализатора.
5.2.3 Проверка на резултата от калибрирането
Този контрол се състои в анализиране на калибриращата проба веднага след извършване на калибрирането. Извършено калибриране се приема, ако резултатите от анализа съответстват на стойностите на калибриране, като се вземат предвид аналитичните вариации на анализатора.
5.2.4 Проверка на калибрирането с помощта на еритроцитни индекси
Този метод за проверка и прецизиране на калибрирането се възползва от факта, че средните стойности на еритроцитните индекси - MCHS, MCH и MCV за пациентите имат доста малка вариация и следователно могат ефективно да се използват за контрол на калибрирането и по-нататъшен контрол на качеството. Препоръчителният брой проби за осредняване е 20. Всички проби от пациенти могат да се използват за определяне на средната MCHS, докато пациентите с анемия трябва да бъдат изключени, за да се определят средните MCH и MCV.
Много съвременни хематологични анализатори имат вградени програми за изчисляване на текущата средна стойност, което значително опростява обработката на данните.
Целевите стойности на еритроцитните индекси, осреднени за 20 проби от пациенти на възраст от 18 до 60 години, независимо от пола, са показани в Таблица 4.
Таблица 4
Целеви стойности на еритроцитните индекси
Ако получените средни стойности са извън контролния толеранс, това означава, че калибрирането на MCV или Hgb или RBC трябва да бъде коригирано.
При определяне на причините за незадоволително калибриране въз основа на резултатите от изследването на параметрите на еритроцитите с използване на търговски материали за калибриране / контрол, трябва да се вземе предвид следната оценка на надеждността на сертифицираните стойности на материалите:
Най-точният и стабилен параметър във времето е концентрацията на еритроцитите;
Hgb е стабилен параметър, но може да зависи от използваните реагенти (например цианидни или без цианиди);
Най-нестабилният параметър е MCV. Стойността на MCV има тенденция да се променя през целия срок на годност на материала в доста широк диапазон от стойности. При прецизиране на калибрирането на MCV данните, получени от анализа на средните еритроцитни индекси, имат приоритет пред сертифицираните стойности в стабилизирани кръвни проби.
Ако приемем, че калибрирането на RBC е правилно, таблица 5 показва възможните причини средните стойности на индексите да надхвърлят контролния толеранс.
Таблица 5
Причини за надхвърляне на средните стойности на еритроцитните индекси
| Еритроцитни индекси | Средна стойност на индекса | Средна стойност на индекса | Средна стойност на индекса | Средна стойност на индекса |
| MCHC | Под границата | Над границата | Над границата | Под границата |
| MCH | В границите на толеранса | В границите на толеранса | Над границата | Под границата |
| MCV | Над границата | Под границата | В границите на толеранса | В границите на толеранса |
| Причина | Надценен MCV | Занижен MCV | Надценен Hgb | Понижен Hgb |
Пример за стандартна оперативна процедура за приемане на биоматериал в медицинска лаборатория.
|
ИМЕ НА ИНСТИТУЦИЯ |
||
|
Вид на документа |
Стандартна оперативна процедура (SOP) |
|
|
Вписване в Единния регистър на лабораторната документация |
СОП-ПА-01-2014г |
|
|
Инстанция |
||
|
Общ брой страници |
||
|
Въведени |
||
|
Валидност |
||
|
Име на документа |
Правила за приемане и регистрация на биоматериал в лабораторията. |
|
|
Позиция |
||||
|
Разработено от: |
||||
|
Проверено: |
||||
|
договорено: |
Текущо заглавие:
|
име |
||
|
Област на приложение |
||
|
Организиране на процеса на транспортиране на биоматериал с куриер |
||
|
Приемане на биоматериал в лабораторията |
||
|
Трансфер на биоматериал и насочване към съответните отдели лаборатории |
||
|
Регистрация на формуляри за поръчки от оператори. |
||
|
Приложение No 1 Блокова схема |
||
|
Приложение No 2 Видове несъответствия и тяхното отстраняване |
||
|
Приложение No3 Температурен датчик на хладилната машина |
||
|
Приложение No 4 Формуляр-направление |
||
|
Приложение № 5 Лист за запознаване на служителите със СОП |
||
1 област на употреба
Тази стандартна оперативна процедура (наричана по-долу SOP) определя процедурата за приемане, регистриране на биоматериал, пристигащ в лабораторията от лечебната зала ИМЕ НА ИНСТИТУЦИЯТА и други институции, обслужвани от лабораторията, както и идентифициране на несъответствията и тяхното отстраняване .
Тази СОП е предназначена за лаборантите и лаборантите.
- Методически препоръки "Организация на преданалитичния етап в централизирането на лабораторните кръвни изследвания" (одобрени на Всеруската научно-практическа конференция "Реални клинични и диагностични лабораторни услуги: степента на съответствие със стандартите за лабораторна медицина, качество, цена и цена" (Москва, 2-4 октомври 2012 г.)
- GOST R 53079.4─2008. „Медицински лабораторни технологии. Осигуряване на качеството на клиничните лабораторни изследвания. Част 4. Правила за провеждане на преданалитичния етап”. Влязъл в сила на 1.01.2010г.
- ISO 15189: 2012 Медицински лаборатории. Изисквания за качество и компетентност"
3. Организация на процеса на транспортиране на биоматериал с куриер и отговорност на куриера.
3.1. Температурата в хладилника, която е посочена на дисплея в кабината на автомобила, се записва от куриера в списанието "Дневник на температурния режим в хладилниците на автомобили", като в това списание куриерът посочва пълното си име, регистрационна табела на автомобила и времето на тръгване на автомобила за биоматериал точно преди пътуването до институциите ... Това списание се намира в офис номер ___. (Снимка на температурния сензор и снимка на бланка на списанието са дадени в Приложение № 3).
3.2. Куриерът, пристигащ в здравното заведение, отива в регистратурата на тази институция, където взема контейнери с различни биоматериали. Всеки контейнер съдържа името на институцията и вида на биоматериала (кръв, урина, изпражнения, слайдове с намазки, остъргвания). Куриерът поставя контейнерите хоризонтално в хладилника на машината, както е показано на снимката.
3.3. Куриерът отговаря за целостта на контейнерите, тяхната безопасност, за осигуряване на правилния температурен режим в хладилника на машината (+4 - +8 o C), както и за безопасността на биоматериала, доставен от институциите в лабораторията . По време на пътуването куриерът следи температурата в хладилника на автомобила, която се показва на дисплея, инсталиран в автомобила.
4. Приемане на биоматериал в лабораторията.
4.1 Температурата, която се показва на дисплея в хладилника на автомобила в момента на изтегляне на контейнерите, се отбелязва от куриера в списание „Дневник за записване на температурния режим в хладилници на автомобили“ в съответната колона към държавния номер на автомобила. И също така в същото списание водачът посочва часа на пристигане на автомобила с биоматериал от институциите.
4.2. Куриерът предава етикетирани контейнери с кръвни проби, намазки и остъргвания на фелдшер-лаборант в стая ___.
4.3. Куриерът предава етикетираните контейнери с урина и изпражнения на фелдшера-лаборант в стая ___.
4.4. В стая ___ фелдшер-лаборантът отваря капака на съда и изважда епруветки за кръв, предметни стъкла с намазки и остъргвания, папки с указания за изследване.
4.5. Лаборантът сортира епруветките с кръв поотделно в стелажи, според вида на епруветките (биохимични, хематологични и коагулологични) и наименованията на институциите, които са посочени на стелажите.
4.6. В стая ____ фелдшерът лаборант взема проби от контейнера с урина, изпражнения и указания.
5. Прехвърляне на биоматериал и насочване към съответните подразделения на лабораторията.
5.1 В стая ____ фелдшер лаборант поставя стелажи с епруветки за биохимични, имунологични, коагулологични изследвания в контейнери с надпис „за пренасяне на биоматериали“ и ги отвежда в стая ___ за центрофугиране.
5.2 Фелдшер-лаборантът се обажда в отделенията по хематология и PCR, за да могат фелдшер-лаборантите от съответните отделения да вземат биоматериала от стая № ___
5.3. Фелдшер-лаборант предава направленията за изследвания от кабинет No ___ на операторите в кабинет No ____ за регистрация.
5.4 В кабинет № ___ фелдшер-лаборантът дава указания на операторите, които регистрират формулярите в същия кабинет.
6. Регистрация на формуляри за поръчки от оператори.
6.1. Операторите в кабинет № ___, след като са получили формуляри за направление от фелдшер-лаборант от кабинет № ___, ги регистрират в лабораторната информационна система.
Процедура за регистрация:
Операторът чете баркода от скенера, залепен в празната посока;
След това операторът въвежда паспортните данни на пациента в LIS: пълно име, дата на раждане, адрес на пребиваване и други данни: източник на поръчка (задължителна медицинска застраховка, доброволно медицинско осигуряване, пари в брой, медицински преглед), номер на институция, отдел, пълно име на лекаря, наредил изследването, диагноза, MES код (медико-икономически стандарт).
След това операторът въвежда в LIS онези показатели, които са предписани от лекуващия лекар, и запазва генерираната поръчка в LIS. Формулярът за сезиране е представен в Приложение No4.
Приложение No2
V идеи за несъответствия и тяхното отстраняване
|
Вид несъответствие |
Описание на действията |
Изпълнител |
Отговорен |
|
Нарушаване на целостта на контейнера |
Докладвайте това на старши лаборант |
лаборант |
Старши асистент |
|
Липса на указания за изследване в контейнер |
За това фелдшер-лаборант уведомява старшия лаборант, който трябва да се свърже със старши медицинския служител по телефона. Сестра на тази институция |
лаборант |
Старши асистент |
|
Разливане на биологичен материал в контейнер |
1. Докладвайте това на старши лаборант 2. Внимателно извадете цялото съдържание от контейнера 3. Дезинфекцирайте самия контейнер и цялото съдържание на контейнера, което е влязло в контакт с разлятия биоматериал. |
лаборант |
Старши асистент |
|
Счупен формуляр за препоръка (скъсан, разлят контейнер и др.) |
1. Фелдшер-лаборант, ако посоката е четлива, прехвърля цялата информация в нов формуляр. 2. При нечетливост на указанията фелдшер-лаборант уведомява старшия лаборант, който се свързва със стария мед. Сестра на институцията. |
лаборант |
Старши асистент |
|
Счупени стъклени пързалки в контейнер |
За това фелдшер-лаборант уведомява старшия лаборант, който трябва да се свърже със старши медицинския служител по телефона. Медицинската сестра на институцията и докладвайте за несъответствието |
лаборант |
Старши асистент |
|
Няма баркод на тръбата |
1. За това фелдшер-лаборант уведомява старшия лаборант, който трябва да се свърже със старши медицинския помощник по телефона. Медицинската сестра на институцията и докладвайте за несъответствието. 2. Фелдшер-лаборант вписва това несъответствие в сп. „Регистрация на брака”. |
лаборант |
Старши асистент |
|
Неадекватна форма за препоръка |
1. За това фелдшер-лаборант уведомява старшия лаборант, който трябва да се свърже със старши медицинския помощник по телефона. Сестра на тази институция 2. Фелдшер-лаборантът вписва това несъответствие в дневник "Брачна регистрация". 3. На следващия ден фелдшер-лаборант изпраща това направление до институцията, от която е дошло, за да пренапише формуляра за направление в четим вид. |
лаборант |
Старши асистент |
Приложение No3
Сензор за температура на хладилника на машината
Също така е полезно в това приложение да предоставите формуляр за дневник, който водачът трябва да попълни.
Следните приложения предоставят формуляр за сезиране и др.
Правила за вземане, съхранение и транспортиране на биоматериал
За идентифициране на патогени чрез PCR
1.1.1. Биоматериалът се взема от предполагаемото местообитание на микроорганизми и развитието на инфекция.
1.1.2. Количеството събрани материали трябва да е малко. Излишните секрети, слуз и гной влияят негативно на качеството на извличане на ДНК и допринасят за разграждането на ДНК по време на съхранение и транспорт.
1.1.3. При въвеждане на биоматериал, взет от пациент със сонда с памучен тампон или четка в епруветка на Eppendorf с буферен разтвор, е необходимо:
Спазвайте стерилитет;
Преди да потопите биоматериала, събран на тампон (четка), в разтвора, намажете го върху сухата стена на епруветката, след това навлажнете тампона (четката) в разтвора и, като завъртите сондата, обилно отмийте целия материал от стената на епруветката и тампона (четката);
Ако е възможно, притиснете тампона към стената на епруветката, извадете сондата с тампона (четката) и затворете тръбата.
Методи за вземане на биоматериал за PCR изследвания
1.2.1. Остъргвания.За изстъргване се използват стерилни сонди за еднократна употреба, които имат памучен тампон с повишена адсорбция или "четки", по-рядко - лъжички на Фолкман, малки лъжички за уши или подобни инструменти с леко затъпени ръбове. Съберете материала с изстъргващи движения. Изследваният материал трябва да съдържа възможно най-много епителни клетки и минимално количество слуз, кръвни примеси и ексудат. Добавете материала към стерилна епендорфова епруветка с буферен разтвор (вижте раздел 1.1.).
Изстъргване от цервикалния канал:преди да вземете изстъргване, е необходимо да отстраните излишната слуз със стерилен памучен тампон, да третирате шийката на матката със стерилен физиологичен разтвор. Вкарайте сондата в цервикалния канал на дълбочина 0,5-1,5 cm, като избягвате контакт със стените на влагалището и използвайте остъргващо движение (не до кръв), за да съберете материала. Малко количество червени кръвни клетки в пробата не оказва влияние върху резултата от анализа. При наличие на ерозия на шийката на матката материалът се взема от границата на здрава и променена тъкан.
Изстъргване от уретрата:вкарайте сондата в уретрата (при мъжете - на дълбочина 2-4 см) и съберете материала с няколко ротационни движения. В навечерието, преди вземането на материала, е разрешена провокация (пикантна храна, алкохол и др.). Препоръчително е да се въздържате от уриниране за 1-2 часа преди вземане на проба. При наличие на обилно гнойно течение, изстъргването трябва да се вземе не по-късно от 15 минути след уриниране.
Остъргване на конюнктиватаприемайте след предварителна анестезия на окото с 0,5% разтвор на дикаин. След усукване на клепача, съберете епителните клетки от конюнктивата със сонда с памучен тампон (или очен скалпел).
Изстъргване от ректума:вкарайте сондата в ануса на дълбочина 3-4 см и съберете материала с въртеливо движение.
1.2.2. Инсулти.С стерилна сонда за еднократна употреба с памучен тампон или четка вземете малко количество секрет (от форникса на влагалището, от фаринкса, назофаринкса и др.) и го прехвърлете в стерилна епруветка на Eppendorf с буферен разтвор (вж. 1.1.).
1.2.3. кръв.За PCR изследвания кръвта трябва да бъде местен(не се свива).
Вземете кръвта асептично, чрез венопункция, в маркова епруветка (2-3 ml) с антикоагулант EDTA ( хепарин не трябва да се използва като антикоагулант!), разбъркайте внимателно, като внимателно обърнете епруветката.
Кръвта с EDTA е биоматериал за следните групи изследвания:
- генетични изследвания(моментът на вземане на кръвна проба няма значение).
- идентифициране на инфекциозни агенти(най-информативни са пробите, взети при втрисане, повишена температура, т.е. вероятно по време на виремия или бактериемия).
1.2.4. урина.В празен стерилен контейнер с плътно завинтен капак се събира сутрешната първа или средна порция урина в количество от най-малко 10 ml. Ако урина се взема през деня, тогава преди това пациентът не трябва да уринира в продължение на 1,5-3 часа.
1.2.5. храчки.На сутринта хигиенизирайте устата и гърлото (изплакнете с разтвор на сода за хляб). Съберете храчките в празен стерилен флакон с широко гърло.
1.2.6. Биопсия.Материалът трябва да бъде взет от зоната на предполагаемото местоположение на инфекциозния агент, от увредена тъкан или място, граничещо с увреждане. Поставете биопсичната проба в стерилна епруветка на Eppendorf с буферен разтвор.
1.2.7. Слюнка, стомашен сок, цереброспинална течност, синовиална течност.Слюнка (1-5 ml), стомашен сок (1-5 ml), цереброспинална течност (1-1,5 ml) - поставете в празна стерилна епруветка (контейнер).
1.2.8. Сок от простатата.След масаж на простатната жлеза, сокът се събира в количество от 0,5-1 ml в празна стерилна епруветка (контейнер). Ако е невъзможно да се получи сок, веднага след масажа се събира първата порция урина в количество не повече от 10 ml (тази порция съдържа простатен сок).
1.2.9. Промивки, бронхоалвеоларен лаваж (BAL).Със стерилен памучен тампон и 5-7 ml физиологичен разтвор се промива, например, от върха на ендоскоп или бронхоскоп и 0,5-5 ml промиване се поставя в празна стерилна епруветка (контейнер).
1.2.10. Изпражнения.Сондата с памучен тампон се поставя вътре в изпражнението и леко се завърта, улавяйки малко количество материал. След това материалът се поставя в стерилна епруветка на Eppendorf с буферен разтвор.