Метод за моделиране на атеросклероза. Експериментални модели Експериментални модели на атеросклероза in vivo

Диференциален ефект на екстракти от Pistacia vera върху експериментална атеросклероза при животински модел на зайци: експериментално проучване
Източник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2917426/

Диетите, богати на липиди, и оксидативният стрес са рискови фактори за атеросклероза. Ефектите на метанол (ME) и циклохексан (CHE) Екстракти от ядки от шам -фъстък, често включени в средиземноморската диета, са изследвани в модел на атеросклероза при зайци.

Двадесет и четири новозеландски бели зайци са получили атерогенна диета (контролна група), допълнена с ME (ME група) или CHE (CHE група) в продължение на 3 месеца. Преди това бяха разработени GC-MS и UHPLC LC-DAD-ESI (-)-HRMS / MS за изследване на химичните профили на екстрактите. Кръвни проби при изходни и месечни нива на липиден профил, липидна пероксидация и чернодробна функция. Аортата, миокардът и черният дроб бяха хистологично изследвани след 3 месеца.

Групите ME и CHE имат значително по -високи нива на HDL и не значително по -нисък среден LDL холестерол% от изходното ниво от контролната група. Триацилглицеролът е значително по -висок в групата на CHE спрямо контролата. Стойностите на MDA са значително по -ниски в групата на ME в сравнение с контролата и CHE. ALT и AST са значително по -високи в CHE спрямо контролната група. γ-GT е по-нисък в ME групата в сравнение с контролата. Дебелината на аортната интима е значително по -малка в групите ME и CHE спрямо контролата; Атеросклеротичните лезии в групата на ME бяха значително по -малко обширни в сравнение с контролните групи и CHE. Само CHE групата е имала значителна мастна чернодробна инфилтрация.

По време на краткосрочно приложение, заедно с атерогенна диета, и двата екстракта от P. vera са полезни за HDL-, LDL-холестерол и дебелина на интимата на аортата. ME допълнително представи антиоксидантен ефект и значително намаляване на повърхностните увреждания на аортата. Тези резултати показват, че включването на P. vera в диетата, по -специално неговия ME, е потенциално полезно при лечението на атеросклероза.

Сърдечно -съдовите заболявания са водещата причина за смърт в индустриализираната част на света, като атеросклерозата е основното състояние. Развитието и прогресията на атеросклеротичните лезии е широко проучено. Има много клинични проучвания върху диетичните протоколи, като например изследването на седемте страни за средиземноморската диета, което включва зехтин. Други клинични изпитвания включват фармацевтични и хирургични интервенции самостоятелно или в комбинация. Научните доказателства за патогенезата и терапията на атеросклерозата през миналия век са до голяма степен извлечени от протоколи от изследвания в животински модели.

Заекът, един от най -важните модели за изследване на атеросклерозата, реагира бързо на стимулиране на атеросклеротични лезии с диета с висок холестерол. Няколко диетични проучвания са използвали този модел, включително въвеждането на зехтин или рибено масло и различни екстракти от семена или масла, получени от слънчогледово семе, фъстъци, ленено семе или лешници. Хранителният орех, консумиран самостоятелно или като съставка в традиционните рецепти, е шам фъстък от дървото Pistacia vera, което принадлежи към семейство Anacardiaceae и е разпространено в цяла Централна и Югоизточна Гърция, както и в други средиземноморски и близкоизточни страни. Доколкото ни е известно, са публикувани само in vitro проучвания относно биологично активния му ефект върху развитието на атеросклероза. Следователно, ние имахме за цел да изследваме ефекта от прилагането на P. vera циклохексан (CHE) и метанолов екстракт (ME) в експериментален заешки модел на атеросклероза върху серумната биохимия, както и увреждане на аортата, сърцето и черния дроб.

Таблица 1 показва описателна статистика на измерените параметри на трите групи. Таблица 2 показва средните процентни промени спрямо изходното ниво в биомасата на тялото, липидния профил и антиоксидантния статус, както и общите статистически стойности. Таблица 3 показва средните процентни промени от изходната активност на чернодробните ензими и общите статистически стойности. Таблица 4 показва морфометричния анализ на аортата на заека.

Описателна статистика: означава ± стандартно отклонение на телесното тегло и биохимичните параметри

Средни стойности на телесно тегло, липиден профил и оксидативен стрес по време на периода на наблюдение в три групи: контролна (атерогенна диета), ME (атерогенна диета плюс ME), CHE (атерогенна диета плюс CHE).

Всички променливи са представени като средно ± SD

Процентна промяна в телесното тегло, липидния профил и оксидативния стрес в заешки серум

Средно% промени от изходното телесно тегло, липидния профил и стойностите на оксидативен стрес по време на периода на наблюдение в три групи: контролна (атерогенна диета), ME (атерогенна диета плюс ME), CHE (атерогенна диета плюс CHE).

Значителна разлика на стр

b Значителна разлика на стр

Процентът на промени в активността на чернодробните ензими в серума на зайци

Средната активност на чернодробните ензими% се променя от изходното ниво по време на периода на наблюдение в три групи. Контролна група: атерогенна диета, ME група: атерогенна диета плюс ME, CHE група: атерогенна диета плюс CHE

Значителна разлика на стр

b Значителна разлика на стр

Общ знак: Обща значимост, NS: Малък

Морфометричен анализ на аорта на заек

Резултатите са изразени като медиана ± SD.

Контролна група: атерогенна диета, ME група: атерогенна диета плюс ME, CHE група: атерогенна диета плюс CHE

Значителна разлика на стр

b Значителна разлика на стр

Крайната средна промяна в% от изходното ниво в контролните, ME и CHE групите не е статистически значима (Таблица 2), въпреки че има умерено увеличение на абсолютните средни стойности (Таблица 1).

Нивата на плазмените липиди и в трите групи са сходни в началото. Средната% промяна от изходното ниво за периода на наблюдение, описан по -долу, е показан в Таблица 2.

Средната% промяна от изходното ниво до 1 месец за групите на ME и CHE е статистически значимо по -висока в сравнение с контролната група (р = 0,01 и 0,05, съответно).

Средната промяна в CHE групата е статистически значимо по -висока в сравнение с контролните групи и ME през 1 -ви и 2 -ри месец, докато ME и CHE групите имат статистически значими по -високи стойности от контролната група през 2 -ри (p = 0,001 и стр

Средната промяна в групата на CHE е статистически значимо по -ниска в сравнение с контролната група на 1 и 2 месец (стр

Средната% промяна в ME групата е статистически значимо по -висока в сравнение с контролната група на 1 и 2 месец (стр

Средната промяна в CHE групата е статистически значимо по -висока в сравнение с ME групата на 2 и 3 месеца (р = 0,032 и 0,012, съответно). Освен това средната промяна в групата на ME е статистически значимо различна в сравнение с контролната група на 1 и 3 месец (стр

Средната% промяна в групата на ME е статистически значимо по -висока в сравнение с контролната група на 2 -ри месец (р = 0,05), докато средната промяна в групата на CHE в сравнение с контролната група е значително по -висока по време на проучването (p

Средната% промяна в плазмените стойности на всички групи не показва статистически значимо увеличение през целия експериментален период, когато CHE групата има по -високи стойности само на 3 месеца (р = 0,007).

Средната промяна в стойностите на ME групата според статистиката е статистически значимо по -ниска в сравнение с контролните групи и CHE през третия месец от експеримента (p

Макроскопските аортни проби от контролната и CHE групите показват обширни атеросклеротични плаки, покриващи почти цялата горна част на изрязаната аорта (Таблица 4 и Фигури 1А и 1Е). Резултатите от ME групата показват по -малко обширни лезии в сравнение с A групата, както и в сравнение с CHE групата (Таблица 4 и Фигура 1С).

Макро- и микроскопични изображения на представители на аортата при зайци от три групи. 1А, 1С, 1Е са представителни изображения от груби аортни проби, принадлежащи съответно към контролните, ME и CHE групите. Стрелките показват образуване на атеросклеротична плака. Както е показано, контролната група показва обширни атеросклеротични плаки, покриващи почти цялата горна част на изрязаната аорта. Групите ME и CHE показват по -малко обширни лезии в сравнение с контролната група, а между двете групи, ME групата има най -малко образуване на лезии. 1B, 1D, 1F - фотомикрографии съответно с 1A, 1C, 1E (еозин - хематоксилин, първоначално увеличение × 100). Фигура 1В (контролна група) показва уязвима плака с много пяна клетки, възпаление и забележимо удебеляване на интимата. Фигура 1D (група ME) показва лезията, описана по -горе, но по -малко обширна (дебелината на интима / среда е по -малка от тази в 1В. 1 В. Стрелките показват ширината на ендотела.

Хистопатологичните находки от контролната и CHE групите показват уязвими плаки с много клетки от пяна, възпаление и забележимо удебеляване на интимата (фигури 1В и 1F). В групата на ME бяха открити описаните по -горе лезии, но по -малко обширни (Фигура 1D).

Хистологичното изследване на сърцето не открива значителни промени между групите.

Хистологичното изследване на черния дроб не разкрива значителни промени между контрола на групата и МЕ. Групата CHE показва статистически значима мастна инфилтрация в сравнение с контролната група.

Негенетичният хиперлипидемичен заек е животински модел, широко използван в изследванията на атеросклерозата. Различни нива на холестерол в храната (0,2-1,3%) бяха използвани за експериментален експеримент и едновременното приложение на други потенциално полезни вещества беше изследвано в периоди от 8 до 14 седмици.

Растенията от шам фъстък са дървета или храсти, принадлежащи на Гърция и други страни в Средиземноморието и Близкия изток. Показано е, че сред тях е установено, че в P. lentiscus антиоксидантни, антибактериални, чернодробно-защитни и цитостатични ефекти и за предотвратяване на окисляването на LDL холестерола in vitro. Доказано е, че P. terebinthus има благоприятен ефект върху брадавиците на матката и кожните меланоми. Малко изследвания са правени върху P. vera. Съобщава се, че има противогъбични ефекти върху растенията. P. vera ME съдържа малки количества катехин, полифенолен флавоноид, който е показал потенциално по-висока антиоксидантна активност от аскорбиновата киселина и α-токоферола в in vitro проучвания. Доказано е също, че катехинът и неговите продукти намаляват риска от сърдечно -съдови заболявания чрез понижаване нивата на серумния холестерол, намаляване на агрегацията на тромбоцитите и понижаване на кръвното налягане.

В настоящото изследване ние изследвахме ефекта от едновременното приложение на P. vera върху прогресията на холестероло-индуцираната атеросклероза при животински модел на заек в продължение на 12 седмици. Решихме да управляваме P. vera ME или CHE отделно в различни групи животни, за да можем да идентифицираме кои компоненти биха били отговорни за потенциално различни резултати. GC-MS CHE анализът показва, че основните му съединения са b-ситостерол, сквален, стигмастерол, олеинова и палмитинова киселини. Клиничните изпитвания вече са показали защитните ефекти на такива растителни стероли при развитието на коронарна болест на сърцето. В допълнение, ME анализът с помощта на LC-HRMS / MS методи разкри наличието на метил галов естер, протокатехинова киселина и галова киселина. Доказано е, че галовата киселина има антиатерогенна активност.

Резултатите от настоящото изследване показват благоприятния ефект от едновременното приложение на P. vera ME и CHE в диета, обогатена с холестерол, върху промените в HDL-C. ME също показа по -малка промяна в MDA спрямо изходното ниво, като по този начин показа лек антиоксидантен ефект. Благоприятният ефект на LDL-C не е статистически значим. Другите изследвани биохимични параметри (TC, TAG и чернодробни ензими) не показват благоприятен ефект на ME, когато се анализират с помощта на средни средни стойности. Анализът на нашите данни с помощта на средните абсолютни стойности показа статистически значим защитен ефект на МЕ според горните параметри (Таблица 1). Поради липсата на нормално разпределение на стойностите, се счита за необходимо използването на непараметричен анализ (тестове на Kruskal-Wallis и Mann-Whitney).

Няколко растителни вещества имат благоприятен ефект върху биохимията на кръвта при зайци, хранени с холестерол. Полифенол от зехтин, известен като хидрокситирозол, повишава нивата на HDL-C при атерогенни диетични зайци. Сусамовото брашно има благоприятен ефект върху нивата на общия холестерол и триглицеридите при зайци, хранени с холестерол. В допълнение, сециолаларицирезин диглюкозид (SDG), растителен лигнин, изолиран от ленено семе, когато се прилага на зайци в продължение на 8 седмици, доведе до намаляване на LDL-C и повишаване на HDL-C и антиоксидантна активност, подобно на нашето проучване. В допълнение, друго проучване на зайци, използващо етанолов екстракт от Hypericum Boiss var lysimachioides (Guttifera), показва статистически значимо намаляване на нивата на MDA, както и повишаване на нивата на HDL-C, което е в съответствие с нашето проучване.

Нашите резултати показват, че лечението с двата екстракта на P. vera причинява умерено повишаване на стойностите на ТС, въпреки че това не се различава много от контролната група през втория и третия месец от приложението.

Средните стойности на HDL-C в контролната група са по-ниски в края на експеримента, докато едновременното приложение на екстракти от P. vera (групи ME и CHE) значително инхибира това намаление. Като се има предвид, че ниските нива на HDL-C са свързани с по-висок риск от сърдечно-съдови заболявания, се потвърждава, че повишаването на нивата на HDL-C ще доведе до защитен ефект срещу атеросклероза след продължително приложение на екстракти от P. vera.

Нашите резултати показват значителни разлики в плазмените нива на MDA между ME и контролните групи. Това предполага, че благоприятният ефект на P. vera ME върху определени липиди и аортата може да се дължи на лек антиоксидантен ефект.

В нашето проучване нивата на чернодробните ензими се повишиха, достигайки максимални нива на третия месец във всички групи. По -конкретно, промените в ALT и AST се увеличават в групите ME и CHE в сравнение с контролите. Както клиничните, така и експерименталните проучвания показват, че повишените ALT и AST могат да предсказват развитието на атеросклероза. В допълнение, промените в γGT на ME групата бяха статистически значимо по -ниски през третия месец в сравнение с контролната група. Това показва положителен ефект на P. vera ME и CHE във функцията на жлъчната система при атеросклеротични животни. В проучване на Hakimoglu et al. чернодробната хидропична и липидна дегенерация е намалена в етанолов екстракт от Hypericum lysimachoids в сравнение с зайци, хранени само с обогатена с холестерол диета. Тази констатация е подобна на нашата, където хистологията на черния дроб, която хранех със зайци, беше по -слабо засегната от групата на холестерола (контролна група), въпреки че нямаше статистически значима разлика. По -специално, зайците в контролната група страдат от увреждане на черния дроб, характеризиращо се със стеатоза и фиброза, което е още по -очевидно в групата на CHE.

Образуването на макроскопска плака в ME групата е по -малко широко, отколкото в контролната и CHE групите. Както в нашето проучване, други изследователи отбелязват, че въпреки повишаването на серумния холестерол след прилагане на екстракта, резултатите от анормални аортни проби могат да покажат подобрение при атеросклерозата. Aguilera et al. установено, че девственият зехтин и рибеното масло намаляват развитието на атеросклеротични плаки. Доказано е също, че ореховото масло намалява атеросклеротичните лезии в аортата на холестерола, захранван от зайци. В допълнение, ефектът от прилагането на съединения, съдържащи зелен чай, получени от епикатехин при зайци, има благоприятен ефект върху артериалните атеросклеротични плаки. Това е в съответствие с нашите резултати, което показва значителен положителен ефект на P. vera ME върху развитието на аортна атеросклероза. По -специално, ME групата демонстрира значително инхибиране на атеросклеротичните плаки както в тяхната дебелина, така и в ширината в аортния лумен. Това може да се дължи на основните компоненти на МЕ, като галова киселина и катехин, които могат да бъдат отговорни за този процес на инхибиране, както вече е посочено. От друга страна, CHE групата показва по-леко инхибиране на атеросклерозата спрямо дебелината на плаката, което може да се обясни с наличието на b-ситостерол, сквален, стигмастерол, олеинова и палмитинова киселини, както е показано по подобен начин.

CHE групата показва най -ниска антиоксидантна активност. Този ефект може да бъде свързан с обширни, но по -малко сложни атеросклеротични лезии, наблюдавани при аортни проби от CHE, в сравнение с тези в контролната и ME групите. Въпреки това, групата ME проявява много по -силна антиоксидантна активност. Статистически значимият наблюдаван антиоксидантен ефект на ME, очевиден от MDA анализ, също значително намалява отлагането на аортна плака. От друга страна, CHE не повлиява степента на атеросклеротични лезии. Тези данни могат да бъдат приписани на антиоксидантните компоненти на P. vera ME.

В заключение, когато се прилагат за кратко заедно с атерогенна диета, двата екстракта от P. vera са полезни за HDL-, LDL-холестерол и дебелина на интимата на аортата. ME допълнително представи антиоксидантен ефект и значително намаляване на повърхностните увреждания на аортата. Тези резултати показват, че диетичното включване на P. vera, по -специално нейната ME, има потенциал да бъде от полза при лечението на атеросклероза. P. vera ME и CHE се използват in vivo за първи път в нашите познания при изследването на атеросклерозата и показват обещаващ ефект върху процеса на инхибиране. Необходими са повече изследвания, преди P. vera да бъде клинично препоръчана за включване в диетата за лечение на атеросклероза.

Двадесет и четири обикновени новозеландски бели зайци (2,7 ± 0,2 кг), закупени от гръцки сертифициран търговски селекционер, бяха разделени на случаен принцип в три равни групи (контролни, ME и CHE) и поместени отделно в клетки от неръждаема стомана със свободен достъп до храна и чешмяна вода . Условията на обитаване на животните бяха 20 ± 2 ° C, относителна влажност 60 ± 5%, в 12:12 часа, цикъл светлина: тъмно. Животните са третирани в съответствие със стандартите, определени от Европейска директива 86/609 / ЕИО. Местните ветеринарни власти и комитетът по етика на животните одобриха (лиценз № K / 950) проучването. Контролната група получава стандартна балансирана диета със заек (химичен състав: обща мастна киселина 2,5%, целулоза 18,5%, общ протеин 16,5%, вода 13%, пепел 11%, калций 1,4%, лизин - 0,6%, метионин -цистин - 0,55%, фосфор 0,55%, натрий 0,25%), обогатен с 1%холестерол (Dolder, Швейцария) (атерогенна диета), групата на МЕ е получила атерогенна диета плюс ME (1%тегловни) и атерогенна диета от групата CHE плюс CHE (5% тегловни). Диетите се приготвят прясно на всеки три дни преди консумация.

Количеството на прах от шам -фъстък на 15 кг, събрано на гръцкия остров Егина, се екстрахира при стайна температура, първо се обезмаслява с циклохексан, получавайки 7,5 кг зелен маслен остатък след изпаряване на разтворителя. CHE се осапунява чрез конвенционална процедура, водеща до естерифицирани мастни киселини. Метилови естери на мастни киселини и неутаен остатък бяха анализирани чрез GC и GC / MS за осигуряване на b-ситостерол, сквален, стигмастерол, олеинова киселина и палмитинова киселина като основни съединения (вж. Допълнителен файл 1)
,

След извличане на прахообразните шам -фъстъци с циклохексан, растителният материал се екстрахира допълнително с дихлорометан за получаване на 1,5 кг зелен маслен екстракт и след това с метанол за получаване на остатък от 500 g след изпаряване на разтворителя. Количество от 400 g от остатъка се подлага на смола XAD-4 за отстраняване на захарта за получаване на ME, обогатен с фенолни съединения. Методът LC-DAD-ESI (-)-HRMS / MS е разработен за описание на химичния профил на обогатения екстракт. Анализът беше извършен с помощта на UHPLC устройство, свързано към високопроизводителен хибриден спектрометър LTQ-Orbitrap Discovery. Фенолни съединения, метил халогенид (1), галова киселина (2), протокатехинова киселина (3) катехин (4) и епикатехин (5) бяха използвани като стандарти за анализа и тяхното идентифициране беше извършено чрез сравняване на времето на задържане, UV- Vis и високоточни масови спектри на пикове в пробата с проби от стандартни съединения.

Приложеният допълнителен файл 1 предоставя подробен анализ на компонентите на екстрактите.

Всички животни са гладни 12 часа преди вземане на кръвни проби. Те бяха леко успокоени (кетамин хидрохлорид 12 mg / kg, ксилазин 2,5 mg / kg tm, im) за процедурата, за да се избегне стрес. Кръвни проби от ушната артерия на животни бяха поставени в епруветки на Wasserman, съдържащи антикоагулант за 0, 1, 2 и 3 месеца от експерименталната процедура. Плазмата се отделя чрез центрофугиране при 3500 об / мин в продължение на 15 минути. Общ плазмен холестерол (TC), липопротеинов холестерол с висока плътност (HDL-C), липопротеинов холестерол с ниска плътност (LDL-C), концентрация на триацилглицерол (TAG), серумна аланин аминотрансфераза (ALT), аспартат аминотрансфераза (AST) и гама серум активността на глутамил трансфераза (γGT) се измерва с комплекти за търговски ензимни тестове съгласно инструкциите на производителя (Biomerieux, Lyon, Франция) с помощта на автоматичен анализатор (тип 7170A, Hitachi, Токио, Япония). MDA се изчислява по ръчен метод на реактивни вещества с тиобарбитурова киселина (TBARS), както е описано от Yagi. В края на експерименталното изследване и след последното вземане на кръвни проби по време на седация, зайците бяха евтаназирани с натриев тиопентал (30 mg / kg интравенозно).

Аортата е отстранена от аортната артерия в илиачната бифуркация. Прилепналата към адвентицията тъкан се отстранява и аортата се разрязва надлъжно по средната вентрална стена. След това аортата се фиксира в 10% буфериран с формалин фосфат физиологичен разтвор. Луминалната повърхност на всяка проба от аортата се отстранява и изображението се съхранява по електронен път. Секции от всички проби са получени от три стандартни места (непосредствено дистално от клона на лявата субклавиална артерия, в седмата междуребрена артерия и непосредствено отзад на цьолиакия). Тези проби бяха вградени в парафинови блокове и оцветени с хематоксилин-еозин. Хистопатологичните аортни атеросклеротични лезии бяха класифицирани според класификацията на Стари, а дебелината и повърхността на атеросклеротичните лезии в аортната стена бяха полуквантовани с помощта на автоматизирана система за анализ на изображения. Накратко, оценяваните параметри са: удебеляване на интимата, натрупване на пяна, мононуклеарни инфилтрати, липидна сърцевина и образуване на влакнеста капачка. Цифровите изображения бяха получени от слайдове с помощта на фотомикроскоп (Nikon Eclipse 80i, Nikon Corp, Токио, Япония), оборудван с цифров фотоапарат (Nikon DS - 2 MW). Всички изображения бяха прехвърлени на компютър със съответния софтуер (Image ProPlus v. 5.1, Media Cybernetics, MD, САЩ).

Сърцето и черният дроб се претеглят и фиксират в 10% буфериран с фосфат физиологичен разтвор. Бяха взети стандартни срезове, вградени в парафинови блокове за хематоксилин-еозин и пробите от миокарда бяха допълнително оцветени с трихромно петно ​​на Масън.

Увреждането на миокарда е оценено от 0 до 3 във връзка с интерстициален оток, фиброза и инфилтрати от пяна. Увреждането на черния дроб е класифицирано в четири степени, както е описано по -горе, за архитектурни промени, мастна инфилтрация и фиброза.

Данните бяха изразени като средно ± стандартно отклонение (SD), както и средни стойности поради аномалия. За да се анализира нормалността на параметрите, беше използван тестът на Колмогоров-Смирнов.

За да се посочи тенденцията през първите 3 месеца от лечението, се изчислява средният процент на промените след 1, 2 и 3 месеца на променливите. Сравнението на процентната промяна от изходното ниво за променливи през периода на наблюдение и хистопатологичните променливи между трите групи беше анализирано с помощта на теста на Kruskal-Wallis и теста Mann-Whitney (сдвоени сравнения).

Всички тестове са двустранни, статистическа значимост е установена на стр

P.vera: Pistacia vera; ME: метанолов екстракт от Pistacia vera; CHE: Екстракт от цистахексан от шам -фъстък; GC: газова хроматография; MS: масспектрометрия; UHPLC: ултра високо течна хроматография; LC: течна хроматография; DAD: детектор за диодни масиви; ESI: електронна йонизация чрез пръскане; HRMS: мас -спектрометрия с висока разделителна способност; ТС: общ холестерол; LDL-C: липопротеинов холестерол с ниска плътност; HDL-C: липопротеинов холестерол с висока плътност; TAG: триацилглицерол: MDA: ниско носещ алдехид; ALT: аланин аминотрансфераза; AST: аспартат аминотрансфераза; y-GT: гама глутамил трансфераза; TBARS: реагиращи на тиобарбитурова киселина вещества; SD: стандартно отклонение; SPSS: Статистически пакет за социалните науки; SDG: сециолаларицирцинол диглюкозид.

CM проведе пилотно проучване, включващо преглед на животни, подготовка на диета, вземане на кръвни проби, евтаназия и изготвяне на ръкописи. KG и MH подготвят циклохексанов и метанолов екстракт и съответните диети и ги анализират. GA и EP извършиха и координираха всички етапи на патология на тъканна проба. TK и DI участваха в отстраняване на тъкани и подготовка на ръкопис. AP и AC допринесоха за дизайна на изследването. Министър -председателят е изпълнил проект за производство на екстракти от пистаци. NT допринесе за подготовката на диетите и ръкописите. LAS и ID разработиха дизайна на изследването, координираха експериментите и подготвиха ръкописа. Всички автори прочетоха и одобриха окончателния ръкопис.

Методи за получаване на екстракти от циклохексан и метанол. Подробна информация за методологията за получаване на екстракти от циклохексан и метанол, включително 2 фигури.

Щракнете тук за файла

Д -р К. Марино е благодарен на гръцкото Министерство на развитието на селските райони и храните за подкрепата и образователния отпуск, и на професор D. N. Perrea за ценни съвети и подкрепа в изследването. Д -р Дантас признава Специалната сметка за грантове за научни изследвания (№ 70/4/2591) на Националния и Каподистрийския университет в Атина за финансова подкрепа. Авторите признават биостатистиката на д -р А. Галанос за експертния статистически анализ на изследването и признават експертната помощ на К. Переа, К. Пападаки, Е. Дуси, Г. Пантелис, П. Рапос и З. Метири експерименти.

През 1912 г. Н. Н. Аничков и С. С. Халатов предлагат метод за моделиране на атеросклероза при зайци чрез въвеждане на холестерол вътре (чрез сонда или чрез смесване с обикновена храна). Тежки атеросклеротични промени се развиват след няколко месеца при ежедневна употреба на 0,5 - 0,1 g холестерол на 1 kg телесно тегло.

Като правило те са придружени от повишаване на нивото на холестерола в кръвния серум (3 - 5 пъти в сравнение с първоначалното ниво), което е основа за допускането на водещата патогенетична роля в развитието на атеросклероза и хиперхолестеролемия . Този модел е лесно възпроизводим не само при зайци, но и при пилета, гълъби, маймуни и прасета.

При резистентни на холестерол кучета и плъхове атеросклерозата се възпроизвежда чрез комбинирания ефект на холестерола и метилтиоурацила, който потиска функцията на щитовидната жлеза. Тази комбинация от два фактора (екзогенен и ендогенен) води до продължителна и тежка хиперхолестеролемия (над 26 mmol / l - 100 mg%). Добавянето на масло и жлъчни соли към храната също допринася за развитието на атеросклероза.

При пилета (петли) експерименталната атеросклероза на аортата се развива след продължително (4 - 5 месеца) излагане на диетилстилбестрол. В този случай атеросклеротичните промени се появяват на фона на ендогенна хиперхолестеролемия, в резултат на нарушение на хормоналната регулация на метаболизма.

Още по темата Експериментални модели.:

1. 4.2. Основните разпоредби на кислород-пероксидния модел на "спонтанна" злокачественост
2. Десимпатизация на сърцето в модели на късен клиничен стадий на болестта на Паркинсон
3. Експериментални модели. Остър (дифузен) гломерулонефрит.
4. Модел на невропатична болка с въвеждане на туморни клетки в костните структури
5. Глава 3. ЕКСПЕРИМЕНТАЛНА ОЦЕНКА НА ОСНОВНИТЕ ВРЪЗКИ НА ПАТОГЕНЕЗАТА НА ХЕМИ-ИЗЛЪЧЕНИ ОРАЛНИ МУКОЗИТИ В ТЕХНОТО МОДЕЛИРАНЕ НА МАЛКИ ЛАБОРАТОРНИ ЖИВОТНИ

1

В експерименти върху зайци (n = 16) е разработен модел на хиперлипидемия, причинена от интравенозно приложение на 10% емулсия на липофундин в доза от 0,5 ml / kg за 30 дни. Експерименталният модел се характеризира с повишаване на нивото на триглицеридите и VLDL с 1,4 пъти, LDL с 1,2 пъти, намаляване на съдържанието на HDL с 1,4 пъти в кръвта на опитни животни. Едновременно с промените в липидния спектър на кръвта при опитни зайци се установява повишаване нивото на лактат и С-реактивен протеин съответно с 2,1 пъти и 13,4 пъти.

хиперлипидемия

експериментален модел

1. Калинкин М.Н., Волков В.С., Заварин В.В. Атеросклероза: патофизиология, лечение, първична профилактика. - Твер: RITs TGMA, 2009.- 215 стр.: Ил.

2. Косарев В.В., Бабанов С.А. Странични ефекти от лекарствената терапия: оценка и прогнозиране // Медицина при спешни състояния. - 2010. - No 6 [Електронен ресурс]. URL: http://urgent.mif-ua.com/archive/issue-15105/article-15118/ (дата на достъп: 8.07.2011).

3. Кухарчук В.В. Лечението на дислипидемия като важен фактор за превенция на атеросклерозата и нейните усложнения // Системна хипертония. - 2007. - No 2. - С. 35–43.

4. Нечаева Г.И., Терещенко Ю.В. Профилактика на липидни нарушения // Лекуващ лекар. - 2010. - No 2 [Електронен ресурс]. URL: http://www.lvrach.ru/2010/07/15081579/ (дата на достъп: 8.07.2011).

Въведение

Сърдечно-съдовата патология (исхемична болест на сърцето, мозъчно-съдови нарушения, оклузивна периферна артериална болест) доведе Русия до първите позиции сред индустриално развитите страни по света по честота на заболеваемост, смъртност и инвалидност сред населението в трудоспособна възраст. В Русия повече от 1 милион души умират годишно от сърдечно -съдови заболявания, половината от тях от исхемична болест на сърцето и още 40% от мозъчно -съдова болест. Съгласно препоръките на VNOK от 2009 г., първичната и вторичната профилактика на сърдечно -съдови заболявания се основава на мерки, насочени към коригиране на основните рискови фактори: ниска физическа активност, тютюнопушене, високо кръвно налягане, затлъстяване и липидни нарушения.

Нарушенията на липидния метаболизъм са един от най -важните рискови фактори за развитието на атеросклероза. Многобройни клинични и епидемиологични научни изследвания убедително показват, че не само хиперхолестеролемията, но и всяка хиперлипидемия може да допринесе за появата и по -нататъшното развитие на атеросклерозата. В момента има няколко вида хиперлипидемия. Така например, в съответствие с общоприетата систематизация на хиперлипидемията, те са разделени на 6 типа, включително разпределението на подтипове IIa и IIb. Различните видове хиперлипидемии имат различен атерогенен потенциал, като най -голям атерогенен ефект оказват хиперлипидемиите, характеризиращи се с повишаване на нивото на общия и свободния холестерол.

Поради факта, че съвременните лекарствени методи за лечение трябва да бъдат разработени, като се вземе предвид естеството на дислипидемията, е необходимо да се създадат нови модели, които най -пълно да отговарят на различни варианти на нарушения на липидния спектър на кръвта.

При оценката на ефективността на нови лекарства за понижаване на липидите се използват различни експериментални модели на хиперлипидемия. Сред тях са холестеролни, генетични, пероксидни модели на атеросклероза; модел A.N. Климова и др. (1966, 1969), на базата на получаване на атеросклеротични плаки върху аортата на зайци чрез парентерално приложение на хомоложен серум от животни с експериментална хиперхолестеролемия и др. Тези модели, заедно с редица предимства, имат и значителни недостатъци, свързани с трудоемкостта и продължителността на възпроизвеждането на модела (моделът на холестерола се възпроизвежда в рамките на 3-4 месеца). Недостатъкът на експерименталните модели, използващи малки лабораторни животни (плъхове, морски свинчета) е невъзможността да се вземе достатъчно количество кръв за задълбочени биохимични изследвания за дълго време без вреда за експерименталните животни. В тази връзка зайците са по -обещаващи за изучаване на хода на експерименталната атеросклероза. Кръвните спектри на липиди и липопротеини на експериментални животни от различни видове се различават; следователно, за по-обективна оценка на хиполипидемичния ефект на нови вещества, се препоръчва да се извършват експерименти с използване на животни от 2-3 вида.

Целта на това изследване е да се разработи модел на атерогенна хиперлипидемия при зайци.

Материали и методи

Експериментите са проведени върху 16 безплодни зайци от двата пола, с тегло 3,8 ± 0,1 kg. Хиперлипидемията се индуцира чрез интравенозно инжектиране на 10% емулсия на липофундин (състав: соево масло - 50 g, средноверижни триглицериди - 50 g, фосфатиди от яйчен жълтък - 12 g, глицерол - 25 g, вода за инжекции - 1000 ml) при доза от 0,5 ml / kg дневно в продължение на 30 дни.

Развитието на хиперлипидемия се следи от съдържанието на липопротеини в кръвната плазма на опитни животни. Биохимичните изследвания се провеждат седмично по време на експеримента; кръвта се взема от маргиналната ушна вена в обем от 3-4 ml.

Липидният спектър на кръвния серум (общ холестерол, триглицериди, HDL) се изследва с помощта на реактиви, произведени от Biocon® (Германия). Концентрацията на LDL, VLDL и коефициентът на атерогенност се определят чрез метода на изчисление.

LDL холестерол

VLDL холестерол

Атерогенният коефициент се изчислява по формулата:

Нивото на лактат се определя по ензимен метод, като се използват реактиви, произведени от Biocon® (Германия).

Биохимични изследвания (анализ на липидния спектър и нивото на лактат) бяха проведени на автоматичен биохимичен анализатор Flexor E (Vital Scientific, Холандия).

Концентрацията на С-реактивен протеин се определя чрез ензимен имуноанализ, използвайки тестови системи, произведени от OOO Hema (Русия) с аналитична чувствителност 0,05 mg / l. Резултатите от ензимния имуноанализ бяха взети предвид с помощта на мултидетектор с микроплаки Zenyth 1100 (Anthos, Австрия).

Липофундин е избран за моделиране на хиперлипидемия при зайци въз основа на наличната информация, че мастните емулсии за парентерално хранене могат да причинят повишаване на липидите в кръвта.

Резултатите от изследването бяха обработени статистически с помощта на стандартния софтуерен пакет MS Excel 2007. Размерът на извадката за сравнителното проучване при ниво на значимост 5% беше изчислен с помощта на софтуера COMPARE 2 Версия 2.57 WinPEPI 11.0.

Резултати и дискусия

В резултат на проучването е установено, че след интравенозно приложение на 10% емулсия от липофундин (0,5 ml / kg) в продължение на 30 дни, опитни зайци развиват тежка дислипопротеинемия, която се характеризира с повишаване на триглицеридите, LDL и VLDL и намаляване на HDL. Не са установени значителни промени в общото съдържание на холестерол в кръвта на зайци, лекувани с липофундин през целия период на наблюдение (Таблица 1).

Таблица 1 - Промени в съдържанието на общ холестерол, триглицериди и липопротеини в кръвната плазма на зайци след интравенозно приложение на липофундин (0,5 ml / kg)

	Изследвани показатели
	Общ холестерол
	Триглицериди

Беше отбелязано, че нивото на триглицеридите в кръвта на зайци с въвеждането на липофундин постепенно се увеличава и след 4 седмици наблюдение е средно 1,4 пъти (p<0,05) выше, чем у интактных животных. Содержание ЛПНП и ЛПОНП в крови подопытных животных возросло на 4-й неделе исследования соответственно в 1,2 (p<0,05) и 1,4 раза (p<0,05) по сравнению с исходным уровнем. Обращает на себя внимание тот факт, что уровень ЛПВП в крови подопытных кроликов снизился уже на 2-й неделе эксперимента и через 4 недели исследования был в среднем в 1,4 раза (p<0,05) ниже, чем у интактных животных.

Трябва да се отбележи, че изразената дислипопротеинемия, развила се под въздействието на липофундин, има атерогенен характер, което се доказва от увеличаване на атерогенния коефициент при опитни животни с експериментална хиперлипидемия средно 1,8 пъти (p<0,05) по сравнению с интактными животными (таблица 2).

Таблица 2 - Промени в стойността на атерогенния коефициент, съдържанието на лактат и С -реактивен протеин в кръвната плазма на зайци след интравенозно приложение на липофундин (0,5 ml / kg)

	Разследван индекс
	Лактат, E / L
	С-реактивен протеин, mg / l

* - разликите от контролата (преди началото на приложението на липофундин) са значителни.

Едновременно с промените в липидния спектър на кръвта при опитни зайци, лекувани с Lipofundin, е установено повишение на нивото на лактат и С-реактивен протеин съответно с коефициент 2,1 (р<0,05) и в 13,4 раза (p<0,05) по сравнению с их содержанием у интактных животных. Возрастание уровня молочной кислоты в крови кроликов с экспериментальной гиперлипидемией, вероятно, свидетельствует о развитии тканевой гипоксии. С-реактивный белок, получивший свое название из-за способности вступать в реакцию преципитации с С-полисахаридом пневмококков, стимулирует иммунные реакции, в т. ч. фагоцитоз, участвует во взаимодействии Т- и В-лимфоцитов, активирует классическую систему комплемента, является высокочувствительным и быстрым индикатором повреждения тканей при воспалении, некрозе, травме. Увеличение его содержания при экспериментальной гиперлипидемии, возможно, является отражением повреждения сосудистой стенки у подопытных животных.

По този начин ние разработихме експериментален модел на атерогенна хиперлипидемия при зайци. Този модел на хиперлипидемия се характеризира с повишени нива на триглицериди, LDL и VLDL. Известно е, че най -голям атерогенен ефект оказват хиперлипидемии, принадлежащи към подтипове IIa, IIb и III тип. В съответствие с фенотипната систематизация на хиперлипидемии (D. Fredrekson, 1967), разработеният модел съответства на тип IIb.

Този модел на хиперлипидемия при зайци принадлежи към най -атерогенните модели, което също потвърждава повишаване на атерогенния коефициент.

Разработеният модел е удобен за търсене на ефективни антиатерогенни агенти, тъй като се характеризира с простота, надеждност и бързина на изпълнение. Тежка хиперлипидемия се развива в рамките на 1 месец след началото на приложението на Lipofundin, докато други експериментални модели на хиперлипидемия при зайци, свързани с употребата на холестерол, изискват 3-4 месеца за моделиране.

изводи

1. След интравенозно приложение на липофундин (0,5 ml / kg) в продължение на 30 дни, експерименталните зайци развиват изразени промени в липидния спектър на кръвта, които се характеризират с повишаване на нивото на триглицеридите и VLDL с 1,4 пъти (p<0,05), ЛПНП в 1,2 раза (p<0,05), снижением содержания ЛПВП в 1,4 раза (p<0,05). Коэффициент атерогенности увеличился в среднем в 1,8 раза (p<0,05).
2. Разработеният модел на хиперлипидемия при зайци е силно атерогенен, според фенотипната систематизация на хиперлипидемиите той съответства на тип IIb.

Рецензенти:

• Митрохин Н. М., доктор на биологичните науки, професор, зам. Директор на ОАО „Всеруски научен център за безопасност на биологично активни вещества“, Московска област, Стара Купавна.
• Слюсар Н. Н., доктор на медицинските науки, професор, директор на ИП „Лаборатория на професор Н. Н. Слюсар“, Твер.

Работата е получена на 22 август 2011 г.

Библиографска справка

Демидова М.А., Волкова О.В., Егорова Е.Н., Савчук И.А. МОДЕЛИРАНЕ НА АТЕРОГЕННА ХИПЕРЛИПИДЕМИЯ ПРИ ЗАЙЦИ // Съвременни проблеми на науката и образованието. - 2011. - No3.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=4689 (дата на достъп: 02/01/2020). Предлагаме на вашето внимание списанията, публикувани от "Природонаучната академия"

Притежатели на патента RU 2500041:

Изобретението се отнася до експерименталната медицина, патофизиологията и се отнася до моделирането на атеросклероза, което може да се използва за изследване на диагностиката, профилактиката и лечението на това заболяване. За тази цел лабораторни животни - плъхове се добавят към фуражния холестерол на прах в количество 1%, маргарин 10%, мерказолил 10 mg / kg и витамин D - 2,5 ME на kg телесно тегло. Освен това, животните се подлагат на операция, състояща се от лигиране на бъбречния педикул на левия бъбрек с неусвояващ се конден материал и зашиване на горния полюс на десния бъбрек, оставяйки 2/3 от органа. Методът е лесен за изпълнение, не причинява смърт на животни, е адекватен модел на ендотелни увреждания и развитие на атеросклеротичен процес. 12 dwg, 4 tbl, 1 екс

Изобретението се отнася до експерименталната медицина, патофизиологията, може да се използва за диагностика, профилактика и лечение на атеросклеротичен процес.

Атеросклерозата и нейните усложнения продължават да водят в структурата на заболеваемостта и смъртността в западните страни и Русия. Смъртността при сърдечно -съдови патологии в света е два пъти по -висока, отколкото при онкологични заболявания, и 10 пъти по -висока, отколкото при злополуки [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В. и др. // Сърдечно -съдова терапия и профилактика. - 2006, No 5 (6). - С. 129-136; Лупач Н. М., Хлудеева Е. А., Лукянов П. А. и др. // Руско медицинско списание. - 2010, No4. S. 71-74; Титов В.Н. // Клинична лабораторна диагностика. 2006, №4. P.310].

Един от основните рискови фактори (RF) за развитието на атеросклероза е нарушение на липидния метаболизъм в организма. Дислипидемията, състояща се в намаляване на липопротеините с висока плътност (HDL), с увеличаване на β-липопротеините или липопротеините с ниска плътност (LDL), пре-β липопротеини или липопротеини с много ниска плътност (VLDL), допринася за развитието на атеросклероза. Освен това атерогенните свойства се притежават от модифицирани, подложени най-често на пероксидиране, окислени (окси-LPN). Те допринасят за увеличаване на синтеза на кавеолин-1, което води до намаляване на образуването на NO от ендотела [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова IV. и др. // Сърдечно -съдова терапия и профилактика. - 2006, No 5 (6). - С. 129-136; Зотова И.В., Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. // Кардиология. - 2002, No4. - С. 57-67; Титов В.Н. // Клинична лабораторна диагностика. 2006, № 4. P.310]. Окислените липопротеини са активни дразнители за моноцитите, които проникват в субендотелиалното пространство, трансформирайки се в макрофаги, а след това, когато модифицираният LDL се натрупва в тях, в пянасти клетки. Активираните макрофаги и клетките с пяна отделят биологично активни вещества - растежни фактори, противовъзпалителни цитокини, молекули на клетъчна адхезия, които насърчават агрегацията на тромбоцитите, вазоконстрикцията и адхезията на левкоцитите и, следователно, развитието на възпалителен процес в артериалната стена и прогресията на атеросклероза. Също така, окси-LDL индуцира пролиферацията на съдови гладкомускулни клетки (SMC), HDL, напротив, осъществява обратния транспорт на холестерол (CS) от съдовата стена и макрофагите към черния дроб [Titov V.N. // Клинична лабораторна диагностика. 2006, № 4. P.310].

Артериалната хипертония (АХ) е вторият важен рисков фактор за развитието на атеросклероза. Доказано е, че лекарственият контрол на налягането при пациенти с хипертония намалява риска от инсулти с 40%, инфаркт на миокарда с 8%и общата смъртност от сърдечни заболявания с 10%[Чичерина Е.Н., Милютина О.В. // Клинична медицина. 2009. - No2. - S.18-21]. При изолирана хипертония при мъже на възраст 47,5 ± 8,4 g, липидният спектър се измества към увеличаване на общия холестерол (TC), триглицеридите (TG), LDL холестерола, намаляване на HDL холестерола, увеличаване на атерогенния коефициент (CA) [ Овчинникова Л К., Ягудина Р.И., Овчинникова Е.А. // Руски аптеки. - 2007. - No 14. - С.26-31]. Хипертонията допринася за увеличаване на ендотелната пропускливост и натрупване на липопротеини в интимата [Шляхто Е.В., Гавришева Н.А., Овчинникова О.А. и др. Ефект на индуцирано възпаление върху метаболизма на колаген в атеросклеротични плаки при мишки // Медицинска имунология. 2008, № 6. S. 507-512]. Доказано е, че причината за активирането на протеиновата и липидната пероксидация (PO) при плъхове със спонтанна хипертония е увеличаване на производството на кислородни радикали и неефективността на ендогенните системи за тяхното инактивиране. Известно е също, че развитието на спонтанна хипертония при плъхове придружава синдрома на системен възпалителен отговор: началният му стадий е активиране (прайминг) на полиморфонуклеарни левкоцити (неутрофили), повишено производство и секреция на активни форми на О 2 - и Н 2 О 2 и усилване на протеина PO и в същото време мастни киселини (FA). Реакцията на О 2 - с азотен оксид (NO) с форми ONOO - и лишава NO от биологичното му действие като релаксиращ фактор. Намаляването на NO води до повишаване на кръвното налягане от типа развитие на порочен кръг [И. В. Зотов, Д. А. Затейшиков, Б. А. Сидоренко. // Кардиология. - 2002, No4. - P.57-67].

От съвременните позиции ключовото звено в патогенезата на атеросклерозата е ендотелната дисфункция (ЕД), която представлява дисбаланс между основните функции на ендотела: вазодилатация и вазоконстрикция, инхибиране и насърчаване на пролиферацията, антитромботично и протромботично, антиоксидантно и прооксидативно [Lupach Н. М., Хлудеева Н. М., Лукянов П. А. и др. // Руско медицинско списание. - 2010, No4. S. 71-74; Алисън Б. Рейс, Ейми Д. // Списание за разследваща медицина. 2006. Т. 54, Н. 3. С.123-131; Huber S. A., Sakkinen P., David C. // Тираж. 2001. - Н. 103. - С. 2610-2616]. Азотният оксид е важен регулатор в сърдечно-съдовата система, посланик, който медиира авто- и паракринните ефекти. В организма реакцията на синтез на NO се катализира от семейството на NO синтази (NOS). NOS използва L-аргинин като субстрат и NADPH диафораза като кофактор. NADPH-диафоразата участва в транспорта на електрони до протезната група на ензима. Определянето на NADPH-диафораза се основава на образуването на диформазан в присъствието на ендогенни β-NADPH и тетразолиеви соли [IV Зотова, Д. А. Затейщиков., Б. А. Сидоренко. // Кардиология. 2002, № 4. Стр. 57-67; Шуматова Т.А., Приходченко Н.Г., Григорян Л.А. и др. // Pacific Medical Journal. 2010 г., № 3. S. 59-61; Алисън Б. Райс, Ейми Д. Глас // Вестник за разследваща медицина. 2006. Т. 54, Н. 3. С.123-131].

Данните от клинични и епидемиологични проучвания доказват патогенетичния ефект на хипертонията и хиперлипидемията върху съдовата стена, но периодът на образуване на ЕД с комбинираното действие на тези фактори при експериментални условия не е ясно установен [Овчинникова Л.К., Ягудина Р.И., Овчинникова EA // Руски аптеки. - 2007. - No 14. - С.26-31; Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В., Хорева М.А. и др. // Сърдечно -съдова терапия и профилактика. - 2006. - No 5 (6). - 129-136; Нагорнев В.А., Воскаянц А.Н. // Вестн. РАМН, 2006. - No 9-10. S.66-74; Davignon J. Ganz P. // Тираж. - 2004 г .; 109: 27-32].

Експерименталните животински модели играят важна роля в изследването на заболявания, включително атеросклероза. Плъховете често се използват при моделиране на хиперлипидемия като рисков фактор за атеросклероза [Meshcherskaya K.A., Borodina G.P., Koroleva N.P. За метода на подбор на агенти, влияещи върху метаболизма на холестерола. // Елеутерокок и други адаптогени от далекоизточни растения. / Ред. К. А. Мещерская. - Владивосток, 1966. - с. 289-294; Санникова А.А., Н. Н. Чучкова, Гайсина Е. Ш. Имуномодулиращ ефект на глюкозаминилмурамил дипептид при променен липиден метаболизъм и атеросклероза. // Бюлетин на Уралската медицинска икономическа наука. - 2008. - No1. - S.64-66. десет; Юдина Т. П., Чаревач Е. И., Цибулко Е. И., Масленникова Е. В., Плаксен Н. В. Хиполипидемичният ефект на сложен емулгатор, съдържащ ламинални водорасли и воден екстракт от корените на сапунката Sa ponaria officinalis L., в експеримент върху плъхове. // Хранене. - 2008. - Т. 77, No 2. - С.76-79]. Придобиването и поддръжката им са сравнително евтини, животните са лесни за работа и се размножават добре в плен. От всички опитни животни при плъхове метаболизмът е най -добре проучен [Куликов В.А., Чиркин А.А. Характеристики на липопротеиновия метаболизъм при плъхове // Патологична физиология и експериментална терапия. - 2004. - No1. - С.26-27].

Въпреки това, гореспоменатите изследователи оценяват промяната само в липидния състав на кръвта за кратък период на наблюдение (от 16 дни до 3 месеца), моделите нямат данни за морфологични и функционални промени в съдовата стена и не вземат предвид включването на дългосрочни компенсаторни механизми, които предотвратяват образуването на съдови лезии.

Известни методи за моделиране на атеросклероза (позиция RU № 2033646; клас G09В 23/28, 1995; позиция RU № 2327228, клас G09В 23/28, 2008, бюлетин № 17; артикул RU № 2127113, клас A61K 31/70 , A61K 31/505, 1999).

Гореспоменатите методи обаче включват въвеждане на медикаменти (обзидан - 1 mg на 100 g телесно тегло, суспензия на хидрокортизонов ацетат - 1,5 mg на 100 g животинско тегло, уридин в доза 50 mg на 1 kg телесно тегло веднъж дневно в продължение на 6-8 дни) на фона на диета, обогатена с мазнини, изкуствено променя метаболизма на животното и неадекватно отразява образуването на естествени патогенетични механизми, които играят ключова роля в развитието на атеросклерозата.

Прототипът е взет за симулиране на хиперлипидемия при плъхове за дълго време [Кропотов А.В. Влияние на дахурската цимифуга и горския невен върху някои показатели за липидния метаболизъм и репродуктивната система (експериментално проучване). Резюме на дипломната работа. дисертация за степента на кандидат мед. науки, Владивосток - 1975, стр. 5]. Известният метод придава на диетата изразени атерогенни свойства. Плъховете са на диета с високо съдържание на мазнини в продължение на 7 месеца. Към храната за животни се добавя холестерол на прах в количество 1%, маргарин 10%, мерказолил 10 mg / kg и витамин D в количество 2,5 ME на kg телесно тегло на плъх.

Прототипът обаче не оценява промяната във функционалните и морфологичните свойства на съдовия ендотел; изследователите наблюдават само промени в липидния спектър в кръвта и в чернодробните биопсии на плъхове.

Като се вземат предвид особеностите на метаболитните процеси при плъхове, допринасящи за формирането на тяхната резистентност към натоварване с мазнини, авторите на изобретението използват комбинация от хиперлипидемия с артериална хипертония за най -изразеното увреждане на ендотела. ЕФЕКТ: методът засилва нарушаването на холестеролните метаболитни процеси, образуването на устойчиви признаци на атеросклеротично съдово увреждане, като се отчита включването на спешни и дългосрочни компенсаторни механизми.

Целта на заявеното изобретение е да се разработи експериментален модел на ендотелна дисфункция, основан на изследване на комбинирания ефект на хиперлипидемия и артериална хипертония върху морфологичната структура на кръвоносните съдове при плъхове.

Посочената цел на заявения метод се постига чрез комбинация от хранене на лабораторни животни с атерогенна диета, състояща се от добавяне на холестерол на прах в количество 1%, 10% маргарин, 10 mg / kg мерказолил и витамин D - 2,5 IU на kg от телесното тегло на плъх към фуража и извършване на операция, която включва лигиране на бъбречния педикул на левия бъбрек с неусвояващ се материал за зашиване и зашиване на горния полюс на десния бъбрек, като същевременно напуска 2/3 от органа, което допринася за развитието на персистираща реноваскуларна артериална хипертония. По време на експеримента бяха извършени следните стъпки:

Мониторингът на състоянието на липидния метаболизъм в кръвния серум се извършва при изолирана експериментална хиперлипидемия (EH) и в комплексния ефект на атерогенната диета и артериалната хипертония (D + AH).

Мониторинг на нивото на кръвното налягане в моделите EG и D + AH.

Определяне на активността на NADPH-диафораза в ендотела на аортата, бедрените артерии и микросъдовете на предната коремна стена (PBS) в два експериментални модела.

Оценка на състоянието на лумена на кръвоносните съдове при опитни животни по метода на компютърно -магнитен резонанс (ЯМР).

Техническият резултат от предложения метод се състои в получаване на устойчиви структурни нарушения на съдовата стена, в сравнение с изолирана атерогенна диета, за да се създаде модел на атеросклероза при лабораторни животни за диагностика, профилактика и лечение на атеросклероза.

Същността на заявеното изобретение е комбинация от хиперлипидемия и реноваскуларна хипертония при лабораторни плъхове.

Хиперлипидемията се постига чрез добавяне на 1% холестерол на прах, 10% маргарин, 10 mg / kg мерказолил и витамин D - 2,5 IU на kg телесно тегло на плъх към храната.

Реноваскуларната хипертония се провежда чрез лигиране на бъбречния педикул на левия бъбрек с неусвояващ се конден материал и зашиване на горния полюс на десния бъбрек (оставяйки 2/3 от органа).

Тази техника дава възможност да се получат устойчиви структурни нарушения на съдовата стена, в сравнение с изолирана експериментална хиперлипидемия.

Същността на предложения метод е илюстрирана с чертежи, където Фиг. 1 a-1c показва увеличаване на ширината на общата каротидна артерия, брахиоцефалния ствол и гръдната част на аортата при опитни плъхове съответно на 2 месеца от изследване, фиг. 2 показва дефиницията в модела D + AG неравномерно контрастиране на артериите, което предполага локални атерогенни промени в артериалната стена, на фиг. 3 - в аортата на експериментални плъхове, когато са оцветени с хематоксилин и еозин, промени в са показани архитектониката на еластичните влакна, изместването на ядрата на миоцитите към периферията, тяхното уплътняване, инфилтрация на клетъчната стена, удебеляване на ендотела.400 (камера A × Cam MRc, Германия), оцветяване с хематоксилин и еозин, фиг. 4 визуализира перинуклеарни оптически празни образувания, увеличение × 400 (камера A × Cam MRc, Германия), оцветяване с хематоксилин и еозин; фигура 5 - оцветяване с хематоксилин и еозин на аортата (контрола), увеличение × 100 (камера A × Cam MRc, Германия), оцветяване с хематоксилин и еозин; на фиг.6 в бедрените артерии визуализирани перинуклеарни оптически празни образувания увеличение × 400, оцветяване хематоксилин и еозин; Фиг. 7 - оцветяване на бедрената артерия с хематоксилин и еозин (контрола), увеличение × 400 (камера A × Cam MRc, Германия) оцветяване с хематоксилин и еозин; Фиг. 8 - в групата на плъхове с D + AH при оцветяване на аортата със Судан 4 (по метода Окамото), показва инфилтрацията на съда с мастни включвания, цвета на съдовете според метода Окамото, увеличение × 100; Фиг.9 в групата на плъхове с D + AH при оцветяване на бедрената артерия със Sudan 4 (съгласно метода на Окамото) показва инфилтрацията на съда с мастни включвания, увеличение × 400; Фиг. 10 показва графика на дебелината на стената и интимата на аортата и бедрените артерии на плъхове в модела на хиперлипидемия (група I) и в сложния модел: хиперлипидемия и артериална хипертония (група II).

Пример за конкретно изпълнение

Материалът за експерименталните изследвания бяха плъхове Wistar - 45 мъжки с тегло 200-250 г. Животните бяха разделени на 2 групи:

Група 1 - 15 мъжки плъхове са били на диета с холестерол в продължение на 6 месеца (прототип). Диетата се състои от добавяне на холестерол на прах в количество 1%, 10% маргарин, 10 mg / kg мерказолил и витамин D - 2,5 IU на kg телесно тегло на плъх към храната.

2 група от 15 мъжки плъхове 15 дни преди започване на хранене с подобна атерогенна диета (добавяне на холестерол на прах в количество 1%, 10% маргарин, 10 mg / kg мерказолил и витамин D - 2,5 IU на kg телесно тегло на плъхове ) операцията е извършена - налагане на лигатура върху бъбречния педикул на левия бъбрек с неусвояващ се конден материал и зашиване на горния полюс на десния бъбрек, оставяйки 2/3 от органа (заявения метод). Тази операция развива персистираща реноваскуларна артериална хипертония до 8-10 седмици от експеримента.

Група III - контролна - 15 здрави мъжки плъхове се хранеха с обичайната диета. След 6 месеца от изследването, животните от всяка група бяха изтеглени от експеримента под етерна анестезия чрез обезглавяване. Събират се кръвен серум, фрагменти от аортата, бедрени артерии и PBS. Експериментът е проведен при стриктно спазване на изискванията на Европейската конвенция (Страсбург, 1986 г.) за поддръжка, хранене и грижи за опитни животни, както и за оттеглянето им от експеримента и последващото изхвърляне. Експериментите са проведени в съответствие с изискванията на Световното дружество за защита на животните (WSPA) и Европейската конвенция за защита на опитни животни. Изследването е одобрено от интердисциплинарната етична комисия (протокол № 4, дело № 21 от 24.01.2011 г.).

Определяне на съдържанието на OX; TG; LDL холестерол, HDL холестерол се извършва с помощта на стандартен колориметричен метод с помощта на реагенти Olvex diagnosticum (Русия).

Кръвното налягане се измерва в опашната артерия с помощта на анализатор MLU / 4C 501 (MedLab, Китай). По време на експеримента животните бяха под упойка, което ги освободи от безпокойството и свързаните с тях скокове на налягането.

Методът за ядрено -магнитен резонанс е следният.

Преди сканирането, животните бяха евтаназирани с разтвори на рометар (Xylazinum, SPORA, PRAHA) в концентрация 1 mg / ml и реланий в концентрация 2 mg / ml, интраперитонеално. ЯМР диагностиката е извършена на томограф PharmaScan US 70/16 за експериментални изследвания (Bruker, Германия) с магнитно поле със сила 7.0 Tesla, честота 300 MHz и намотка BGA 09P. За ангиография беше използван протокола Head_Angio със следните параметри: TR / TE = 50.0 / 5.6; ъгъл на наклон 25,0; поле за изображение 3.0 / 3.0 / 3.0; ефективна дебелина на рязане 30 мм; припокриване 30,0 мм; матрица 256/256/64 елементи; усредняване на един сигнал, време за сканиране 14 минути

Хистологичните препарати се фиксират в 10% неутрален формалин и се вграждат в парафин. Секциите се оцветяват с хематоксилин и еозин, Van Gieson, Mallory и Sudan-4 (метод Okamoto). Описанието на диапозитивите е извършено на микроскоп Olympus BX 41. Снимките са направени с електронна камера Olympus DP 12, при постоянно увеличение 100 и 400. Морфометрията е извършена с помощта на микрометър за окуляр MOB - 1-16 × .

В експеримента беше използван хистохимичният метод за NADPH-диафораза съгласно стандартната рецепта Hope and Vincent (1989): фрагменти от животински съдове бяха изолирани с помощта на острие и потопени в 4% параформалдехид, охладени в 0.1 М фосфатен буфер (рН 7.4), който от целия клас диафорази, само NADPH-диафоразата запазва своята активност. Материалът се фиксира в продължение на 2 часа при температура 4 ° С, промива се в продължение на един ден при същата температура в 15% разтвор на захароза, като разтворът се сменя 7-8 пъти. Тъканните проби, замразени в криостат, се нарязват на 10 μm секции, монтират се върху стъклени стъкла и се поставят в инкубационна среда. Съставът и крайната концентрация на средата бяха както следва: 50 тМ Трис буфер (рН 8,0), 1 тМ NADPH (Sigma), 0,5 тМ нитро син тетразолий (Sigma) и 0,2% Тритон Х-100 ("Serva"). Инкубацията се провежда в продължение на 60 минути в термостат при 37 ° С. След това срезовете се изплакват в дестилирана вода, дехидратират се и се вграждат в балсам съгласно метода, общоприет в хистологията.

Ензимната активност се измерва в ендотела и гладките миоцити на аортата, бедрените артерии и микросъдовете на PBS на плъхове.

Ензимната активност се определя с помощта на програмата "ImageJ1.37 v" и се изразява в единици оптична плътност. Има доказателства за пряка връзка между концентрацията на изследвания ензим и оптичната плътност на утайката, образувана в резултат на хистохимичната реакция.

За математическа обработка на получените данни, SPSS v. 16. Сравнението на средните стойности в пробите беше проведено с помощта на непараметричния U-тест на Wilcoxon-Mann-Whitney.

Мониторингът на кръвното налягане показва, че в експериментална група II (D + AH) кръвното налягане е по -високо от това в група I и в групата на здрави плъхове през целия експеримент (2, 4, 6 месеца), което потвърждава образуването на реноваскуларно и ренопривативно механизми на артериална хипертония (таблица 1).

маса 1
Индекси на кръвното налягане при плъхове в модели на експериментална атеросклероза
Групи плъхове	Експериментирайте 2 месеца	Експериментирайте 4 месеца	Експериментирайте 6 месеца
Систоличен. BP (mm Hg)	Диастоличен. BP (mm Hg)	Систоличен. BP (mm Hg)	Диастоличен. BP (mm Hg)	Систоличен. BP (mm Hg)	Диастоличен. BP (mm Hg)
Група I (IG)	113,8 ± 3,6	68,8 ± 1,22	122,06 ± 1,05	66,18 ± 7,08	141.70 ± 4.41	90,89 ± 1,83
Група II (D + AG)	131,3 ± 1,5; *	83,4 ± 3,2; *	140,12 ± 3,25; *	90,24 ± 4,44; *	161,70 ± 1,66; *	99,33 ± 3,41; *
Група III (контрол)	115,1 ± 0,7	73,4 ± 0,53	116,25 ± 0,84	70,20 ± 2,18	116,01 ± 3,05	71,44 ± 1,70
* - надеждност на разликите между I и II група (рu<0,05);
- надеждност между експерименталните групи и контролната група (р u<0,05).

При изследването на липидния спектър в експерименталните групи плъхове след 2 месеца от експеримента е установено повишаване на нивото на TC, TG, LDL, HDL и CA в сравнение с контролната група (р u<0,05) (таблица 2). При этом в группе крыс с артериальной гипертензией значения ОХ, ЛПНП, ЛПВП и КА были достоверно выше (р u <0,05), а уровень ТГ - несколько ниже (p u >0,05), отколкото в групата на плъхове с изолирана хиперлипидемия (Таблица 2). На 4 -ия месец от експеримента, при плъхове от група I, нарушенията на липидния профил продължават, нивото на LDL значително се увеличава (р u<0,05). Во II группе значения ЛПВП и ЛПНП снизились и стали ниже, чем в I группе животных, при этом происходило увеличение уровня ТГ и КА. К 6 месяцу эксперимента в обеих опытных группах животных достоверно нарастал уровень ОХ и ТГ. У крыс с атерогенной диетой к этому периоду эксперимента отмечалось увеличение содержания липопротеинов высокой плотности по сравнению с их уровнем на 4 месяце исследования, при этом значения ЛПНП и КА не повышались (р u <0,05), тогда как во II группе крыс (Д+АГ) продолжалась тенденция снижения показателей ЛПНП и ЛПВП. При этом уровень ЛПВП у крыс данной группы стал ниже, чем у здоровых крыс (р u <0,05), произошло увеличение КА - в 2,5 раза по сравнению с I группой и в 4,8 раза по сравнению с контрольной группой крыс (таблица 2). Выявленные изменения подтверждают более выраженные нарушения липидного спектра у крыс II группы (Д+АГ). Снижение сывороточного содержания ЛПНП и ЛПВП у крыс с артериальной гипертензией и гиперлипидемией, вероятно, указывает на усиление их рецепции эндотелием сосудов.

При оценката на NADPH-диафоразата на съдовете е установено, че в бедрените артерии на експерименталната и контролната група животни съдържанието на NADPH-диафораза е по-ниско, отколкото в аортата, което може да се обясни с анатомичните особености на структурата на стените на тези съдове (мускулният компонент е по -силно изразен в бедрените артерии) (р u<0,05). В бедренных артериях II группы крыс значения NADPH-диафоразы были несколько ниже, чем в аорте, однако показатели не имели достоверной разницы, что может свидетельствовать о более выраженном нарушении синтеза этого кофермента в аорте при моделировании реноваскулярной гиперетензии. При мониторинге NADPH-диафоразы зарегистрировано снижение ее уровня во фрагментах аорты и бедренных артерий I и II опытных групп крыс с достоверностью различий с контролем (р u <0,05) (табл.3).

Не са открити значителни разлики в съдържанието на съдов коензим в зависимост от времето на експеримента (2, 4, 6 месеца) във всички експериментални групи. Най-голямото намаление на нивото на NADPH-диафораза се определя на 2-ия месец от проучването с относително стабилизиране на нивата на коензима на ниско ниво по време на последващо наблюдение.

При плъхове с хиперлипидемия и артериална хипертония стойността на NADPH-диафоразата в динамиката на целия експеримент е по-ниска, отколкото в прототипа (p u<0,05), что свидетельствует о более глубоком нарушении функциональных свойств эндотелия. У крыс II группы уровень NADPH-диафоразы в сосудах микроциркуляторного русла снижался ко 2 месяцу исследования, тогда как в группе крыс I группы (ЭГ) достоверное снижение его уровня происходило только к 6 месяцу эксперимента.

При наблюдение на състоянието на артериалното легло чрез ядрено -магнитен резонанс (ЯМР) е установено, че след 2 месеца от изследването при опитни плъхове се е увеличила ширината на общата каротидна артерия, брахиоцефалния ствол и гръдната част на аортата (таблица 4 , фигура 1, фигура 2). Тази съдова реакция се дължи на включването на защитни и адаптивни механизми за поддържане на централната хемодинамика.

Въпреки това, към 6 -ия месец от експеримента, имаше стесняване на лумена на изброените съдове (Таблица 4), което беше най -силно изразено при група II на плъхове (надеждността на разликите с група I (р u<0,05). У крыс II группы регистрировалось уменьшение ширины просвета подвздошных артерий, что свидетельствует о мультифокальности поражения артериального русла при комплексном действии гиперлипидемии и артериальной гипертензии. Определялось неравномерное контрастирование артерий в моделе Д+АГ, что предполагает локальные атерогенные изменения стенки артерий (фиг.2).

Таблица 4
Диаметърът на лумена на съдовете на плъхове (mm), установен по метода на ЯМР.
Съдове	Аз (диета)	II група (диета + операция)	Контрол (размер в мм)
2 месеца	6 месеца	2 месеца	6 месеца	2 месеца	6 месеца
Общо сънлив	1,57(1,49-1,63)!	1,41(1,38-1,54)	1,34;(1,26-1,47)	1,14;(1,10-1,19)	1,27(1,19-1,32)	1,23(1,20-1,31)
Вътрешно сънливо	0,79(0,76-0,81)	0,72(0,70-0,73)	0,78(0,76-0,84)	0,44(0,42-0,50) !	0,8(0,78-0,89)	0,77(0,75-0,91)
Брахиоцефален ствол	1,54(1,51-1,58)!	1,38(1,43-1,50)	1,47(1,60-1,65)!	1,23(1,21-1,25)	1,31(1,28-1,33)	1,30(1,27-1,32)
Церебрални артерии	0,49(0,46-0,56)	0,40(0,38-0,41)	0,49(0,45-0,52)	0,44(0,42-0,50)	0,40(0,37-0,47)	0,41(0,39-0,44)
Гр. част от аортата	2,13(2,05-2,16)!	1,78 (1,76-1,79) ×	2,32(2,26-2,33)!	1,51; (1,47-1,53)! ×	1,95(1,83-1,97)	1,86(1,80-1,93)
Бр. част от аортата	1,61	1,41	1,66		1,64	1,62(1,54-1,63)
	(1,59-1,63)	(1,40-1,44)	(1,60-1,68)	1,53(1,43-1,56)	(1,60-1,66)
Общи илиачни артерии	1,1(0,94-1,05)	0,82(0,80-0,87)	0,94(0,92-0,96)	0,74 (0,71-0,75)! ×	0,98(0,96-1,2)	0,93(0,90-0,99)
Забележка: данните са представени като медиана (NK-VK).
! - надеждност между експерименталните групи и контролната група (р u<0,05).
- надеждност на разликите между групи I и II (p u<0,05);
× - надеждност на разликите между показателите на 2 и 6 месеца от експеримента.

Оценката на хистологичната структура на артериалната стена показа, че най -изразените промени в съдовете са регистрирани до 6 -ия месец от експеримента. В аортата и бедрените артерии на опитни плъхове, когато се оцветяват с хематоксилин и еозин, се наблюдават промени в архитектониката на еластичните влакна, перинуклеарни оптично празни образувания, изместване на ядрата на миоцитите към периферията, тяхното уплътняване, клетъчна инфилтрация на стената, удебеляване на ендотела се визуализират (фиг. 3, фиг. 4, фиг. 6в) в сравнение с интактните плъхове (фиг. 5, фиг. 7). В този случай най -изразените промени в морфологията на артериите се записват във втората експериментална група (D + AG) (фигура 4, фигура 6). При оцветяване на артерии със Судан 4 по метода на Окамото при опитни плъхове с D + AH е установена инфилтрация на съда с мастни включвания. В този случай отлагането на мазнини се запълва в кухините, разкрити чрез оцветяване с хематоксилин и еозин (фиг. 8, фиг. 9).

В PBS при опитни плъхове се наблюдава намаляване на броя на микросъдовете (при плъхове от група I се откриват 5-7 микросъда, при група II-3-4 микросъда в зрителното поле, докато при контролни плъхове-8-10 микросъдове). Съдовете на микроваскулатурата при плъхове от II експериментална група са под формата на ивици с пролиферация на ендотелни клетки, докато при контролните плъхове са овални или кръгли. Дебелината на микросъдовете на предната коремна стена се увеличи в експерименталните групи плъхове. В същото време максималното удебеляване на стената на микросъдовете се наблюдава в експериментална група II (M = 4,62 (4,36-4,72) μm във втората група, M = 2,31 (2,12-2,36) μm в група I и 1,54 ( 1,50-1,62) микрона - при контролни плъхове). Увеличение на дебелината на стената на аортата и бедрените артерии е регистрирано при опитни плъхове. При плъхове с артериална хипертония е регистрирано увеличение на дебелината на стената и интимата на съдовете, в сравнение с модела на изолирана експериментална хиперлипидемия (фиг. 10).

Сравнителният анализ на предложеното решение с прототипа показва, че в метода съгласно изобретението, който комбинира артериална хипертония и хиперлипидемия, до 6 -ия месец от експеримента се наблюдават промени в липидния спектър на кръвния серум (повишаване на OX, TG, намаляване на HDL, увеличение на СА) са установени в сравнение с прототипа. Изобретателният метод ви позволява да установите постоянно повишаване на систоличното и диастоличното кръвно налягане от 2 до 6 месеца от изследването. В сравнение с прототипа, намалението на активността на NADPH-диафораза в съдовия ендотел е регистрирано до 6-ия месец от експеримента. Наблюдавано е съдово увреждане: деформация на еластични влакна, увеличаване на дебелината на стената и интимата, клетъчна инфилтрация, отлагане на мастни включвания в стената, стесняване на съдовия лумен, намаляване на броя на PBS микросъдовете.

Метод за моделиране на атеросклероза, включващ хранене на изследваните животни с атерогенна диета, състояща се от добавяне на холестерол на прах в количество 1%, маргарин 10%, мерказолил 10 mg / kg и витамин D - 2,5 IU на кг телесно тегло плъх към фуража, характеризиращ се с това, че заедно с храненето на атерогенната диета на животните, се извършва операция, състояща се от лигиране на бъбречния педикул на левия бъбрек с неусвояващ се конден материал и зашиване на горния полюс на десния бъбрек, докато се оставя 2/3 от органа.

Подобни патенти:

Изобретението се отнася до медицината, по -специално към експерименталната кардиофармакология, и може да се използва за коригиране на дефицита на азотен оксид. За да направите това, експериментът симулира дефицита на азотен оксид ежедневно, в продължение на 7 дни, интраперитонеално инжектиране на мъжки плъхове Wistar на N-нитро-L-аргинин-метилов естер в доза 25 mg / kg.

Изобретението се отнася до експерименталната медицина и може да се използва за моделиране на първична билиарна цироза. За да направите това, 0,08-0,12 ml 45-50% алкохолен разтвор на пикрилсулфонова киселина се инжектира в лумена на булбарната част на дванадесетопръстника и крайната част на илеума на плъха на интервали от 5-10 минути.

Изобретението се отнася до експерименталната медицина, по -специално до хирургията, и може да се използва за моделиране на хронична гнойна костна рана. Образуването на костен дефект се извършва по оста на костта, в него се поставя културна смес от музейния щам Staphylococcus Aureus No 5 в количество 40-45 милиона CFU на 1 kg телесно тегло на експериментално животно и 0,1 ml стерилен кварцов пясък.

Изобретението се отнася до експерименталната медицина, а именно до офталмологията, и за моделиране на диабетния макулен оток. За това плъхът се инжектира с алоксан в коремната кухина в доза 15,0 mg / 100 g телесно тегло.

Изобретението се отнася до медицината, по -специално до експерименталната фармакология, и може да се използва за коригиране на исхемия. За тази цел на втория ден от експеримента се моделира кожен клапан за лабораторни животни.

Изобретението се отнася до медицината, по -специално до експерименталната медицина. Стимулираща миография се провежда върху лабораторни животни 9 седмици след прекратяване на експозицията на токсиканта.

Изобретението се отнася до експерименталната медицина и може да се използва за коригиране на исхемията на скелетните мускули. За тази цел се моделира исхемията на мускулите на краката, включително с едновременното допълнително моделиране на дефицита на азотен оксид чрез интраперитонеално приложение в продължение на 7 дни на блокер на синтеза на азотен оксид N-нитро-L-аргинин метилов естер (L-NAME) при доза от 25 mg / kg дневно.

Изобретението се отнася до експерименталната медицина и се отнася до моделирането на енцефалопатия в пренаталния период на развитие на животните. За това женските на малки лабораторни животни се инжектират ежедневно подкожно с разтвор на натриев нитрит в доза 50 mg / kg от 10 -ия до 19 -ия ден от бременността.

Изобретението се отнася до медицината, по -специално към експерименталната фармакология, и може да се използва за изследване на фармакологичната подкрепа за оцеляването на кожен клапан в условия на намалено кръвообращение.

Изобретението се отнася до експериментална фармакология и хирургия и може да се използва за изследване на възможността за коригиране на исхемията на скелетните мускули. За тази цел исхемията на мускулите на краката се симулира при плъхове на втория ден от експеримента.

Изобретението се отнася до медицината, по -специално към експерименталната стоматология, и за моделиране на деминерализацията на зъбния емайл. За да направите това, на извадения зъб е фиксирана скоба. Ограничете фокуса, който се намира на вестибуларната повърхност на зъба около скобата, с восъчно покритие. Зъбът се потапя в отделен контейнер с деминерализиращ гел, състоящ се от (тегл.%): Калциев дихидроген фосфат - 0,04-0,08, млечна киселина - 0,8-1,0, престол 2510 - 3,0-4,5, разтвор на натриев хидроксид - 0,4, дестилирана вода - остатъка. След това контейнерът със зъба се поставя в термостат при рН = 4,5 за 96 часа. Методът осигурява повишаване на яснотата на фокуса на деминерализация. 4 бол., 2 просп.

Изобретението се отнася до експерименталната медицина и фармакологията и е предназначено да изследва принадлежността на изследваните лекарства към субстратите на протеина на транспортера на изтичане Pgp (гликопротеин-Р). За това състоянието на индукция на функционалната активност на този протеин се симулира в експеримент. Финастерид се използва като лекарство -индуктор. Лекарството се прилага вътре в стомаха на зайци под формата на суспензия в зехтин в дневна доза от 0,225 mg / kg телесно тегло на животното в продължение на 14 дни. Методът осигурява създаването на модел, като е безопасен, не изисква скъпо лабораторно специално оборудване и материали. 1 раздел.

Изобретението се отнася до медицината, по -специално до офталмологията, и може да се използва за създаване на модели на очни заболявания. За тази цел 0,1 ml културална течност, съдържаща аденовирус тип 6, адаптирана към трансплантираната линия от ембрионални прасешки бъбречни клетки, в доза от 10 000 TCID50 се инжектира през плоската част на цилиарното тяло в стъкловидното тяло на окото на чинчила заек с игла 33 G. В този случай се извършва хистологично изследване на отстранената очна ябълка, започвайки от 7 дни след инфекцията. Методът осигурява увеличаване на честотата и точността на възпроизвеждане на аденовирусен увеит, усложнен от оптичен неврит. 1 бивш

Изобретението се отнася до медицината, по -специално до офталмологията, и може да се използва за създаване на модели на очни заболявания. За да направите това, 0,1 ml културална течност, съдържаща щам L2 на вируса на херпес симплекс (HSV) тип I, адаптиран към трансплантираната линия от ембрионални прасешки бъбречни клетки, в доза от 100 000 TCID50 ... В този случай се извършва хистологично изследване на отстранената очна ябълка на 21 -ия ден след заразяването. Методът осигурява увеличаване на честотата и точността на възпроизвеждане на изолиран оптичен неврит. 1 бивш

Изобретението се отнася до медицината, а именно до регенеративната медицина и тъканното инженерство и може да се използва за получаване на извънклетъчни матрици на кръвоносни съдове с малък калибър. За това на първия етап от тъканите фрагмент от кръвоносен съд се промива с дестилирана вода за 1 час при температура + 4 ° С. След това фрагментът се поставя в 0,05% трипсинов разтвор и 0,02% EDTA за 1 час при температура + 37 ° С. На третия етап третирането се извършва в 0,075% разтвор на натриев додецил сулфат за 24 часа при температура 26 ° С. След това фрагментът се поставя в 0.25% разтвор на Тритон Х-100 за 24 часа при температура 26 ° С. На четвъртия етап този фрагмент се третира с разтвор, съдържащ РНКаза А 20 μg / ml и DNase I 200 μg / ml за 6 часа при температура + 37 ° С. В този случай, след всеки етап на обработка, фрагмент от кръвоносен съд се промива три пъти във фосфатно-буфериран физиологичен разтвор в продължение на 10 минути. Целият процес на обработка се извършва с постоянно разбъркване на разтворите и едновременна вибрация, генерирана от вибрационен двигател, който се намира на външната стена на контейнера. ЕФЕКТ: методът подобрява качеството на децелуларизация на кръвоносните съдове с малък калибър, запазва тяхната цялост и ултраструктура за последващо обездвижване на клетки-реципиенти. 2 пр., 6 болни

Изобретението се отнася до медицината, а именно към експерименталната офталмология и за моделиране на диабетна макулна неоваскуларизация. Захарният диабет се моделира при плъхове чрез интраперитонеално приложение на алоксан в доза 15,0 mg / 100 g телесно тегло. След 6,5 седмици плъх VEGF 164 се инжектира в стъкловидното тяло по метода на интравитреален достъп на 1 -ви, 3 -ти и 7 -ми ден, 1 μg, в обща доза от 3 μg. Методът осигурява неоваскуларизация на макулната област, характерна за захарен диабет, което позволява по -нататъшно проучване на ефективността и определяне на целесъобразността на терапията за това заболяване. 1 бивш

Изобретението се отнася до експерименталната медицина и се отнася до моделиране на малки фокални мозъчни кръвоизливи при новородени плъхове. За това новородените плъхове на възраст 3 дни се поставят в камера и се излагат на звук със сила 70 dB, честота 110 Hz, в продължение на 60 минути. Методът осигурява развитието на малки фокални мозъчни кръвоизливи в мозъчната кора при 100% от новородените плъхове, без разкъсване на големи съдове, което най-много съответства на клиничната картина на мозъчните кръвоизливи при новородени деца. 7 dwg, 1 супена лъжица

Изобретението се отнася до медицината, по -специално до експерименталната фармакология. За да се идентифицират психотропните свойства на изследваните вещества, се симулира емоционално-физическа стресова ситуация, постигната чрез поставяне на животни в цилиндър със студена вода. Времето за решаване и изпълнение на задачата за напускане на цилиндъра се записва с помощта на предложените спасителни средства (релса, стълба и въже), инсталирани в цилиндъра. Изчислява се процентната вероятност за решаване на проблема. Изчисляването на индекси, характеризиращи психоемоционалните и двигателно-двигателните ефекти на изследваното вещество, се извършва съгласно определени математически формули. Методът е технически прост, финансово евтин, има високо ниво на възпроизводимост, позволява с ниско време и голяма вероятност да се определи психоседативен или психостимулиращ ефект на изследваното вещество. 1 бол., 3 таблици., 2 пр.

Изобретението се отнася до медицината, а именно към експерименталната кардиология и може да се използва за изследване на патогенезата на нефрогенната артериална хипертония и за скрининг и подробни фармакологични изследвания. За да се симулира ренопаренхимна артериална хипертония, възрастните мъжки плъхове, претеглящи, причиняват химическо увреждане на бъбречния паренхим чрез инжектиране на 0,1 ml 4% параформалдехид в горния полюс на двата бъбрека. Методът осигурява за кратко време трайно повишаване на кръвното налягане, висока възпроизводимост на резултата, лекота на извършване на процедурата, ниска инвазивност, кратък период на рехабилитация при формиране на значителни морфологични и биохимични пренареждания в прицелните органи, подобни на клиничните варианти на ренопаренхимна артериална хипертония. 2 супени лъжици, 4 dwg

Изобретението се отнася до медицината, по -специално към експерименталната фармакология, и може да се използва за изследване на механизмите за корекция на ендотелната дисфункция при бременни жени. Методът включва възпроизвеждане на модел на гестоза при плъхове Wistar чрез ежедневно интраперитонеално приложение на N-нитро-L-аргинин метилов естер в доза 25 mg / kg в продължение на 7 дни от 14-ия ден от бременността. Това е последвано от единично възпроизвеждане на 10-минутен отдалечен исхемичен епизод на задния крайник на 21 ден от бременността чрез затягане на бедрената артерия, последвано от реперфузия. След 90 минути се извършват съдови тестове за изчисляване на коефициента на ендотелна дисфункция. ЕФЕКТ: методът позволява да се изследват NO - безусловни механизми на защитен ефект по време на корекция на ендотелната дисфункция при специфични експериментални условия. 1 бивш

Изобретението се отнася до експерименталната медицина, патофизиологията и се отнася до моделирането на атеросклероза, което може да се използва за изследване на диагностиката, профилактиката и лечението на това заболяване. За да направите това, лабораторни животни - плъхове се добавят към фуражния холестерол на прах в количество 1, маргарин 10, мерказолил 10 mg kg и витамин D - 2,5 ME на kg телесно тегло. В допълнение, животните се подлагат на операция, състояща се от лигиране на бъбречния педикул на левия бъбрек с неусвояващ се конден материал и зашиване на горния полюс на десния бъбрек, оставяйки 23 органа. Методът е лесен за изпълнение, не причинява смърт на животни, е адекватен модел на ендотелни увреждания и развитие на атеросклеротичен процес. 12 dwg, 4 tbl, 1 екс

Тема: Експериментална атеросклероза

1. Въведение: Експериментална атеросклероза

2. Съдови лезии, които се развиват по време на хранителни разстройства

3. Промени в аортата с хипервитаминоза D

4. Аортни некрози и аневризми при плъхове

5. Некротизиращ артериит

6. Промени в кръвоносните съдове с недостатъчно количество протеин в храната

7. Дистрофично-склеротични съдови промени, получени с помощта на определени химикали

8. Аортит, получен чрез механично термично и инфекциозно увреждане на съдовата стена

Литература

ВЪВЕДЕНИЕ: ЕКСПЕРИМЕНТАЛНА АТЕРОСКЛЕРОЗА

Експериментално възпроизвеждане на съдови промени, подобни на човешката атеросклероза, се постига чрез хранене на животни с храна, богата на холестерол или чист холестерол, разтворен в растително масло. При разработването на експериментален модел на атеросклероза изследванията на руски автори са от най -голямо значение.

През 1908 г. A.I. Игнатовски е първият, който установява, че когато зайците се хранят с животинска храна, в аортата се развиват промени, които много напомнят човешката атеросклероза. През същата година A.I. Игнатовски заедно с Л.Т. Mooro създаде класически модел на атеросклероза, показващ, че когато зайците се хранят с яйчен жълтък в продължение на 1-2-61 / 2 месеца, се развива атероматоза на аортата, която, започвайки от интимата, преминава към средната мембрана. Тези данни бяха потвърдени от L.M. Старокадомски (1909) и Н.В. Стъки (1910). Н.В. Веселкин, С.С. Халатов и Н. П. Аничков установяват, че основната активна част от жълтъците е холестеролът (А. И. Моисеев, 1925). След това, за да получат атеросклероза, заедно с жълтъците, те започнаха да използват чист ОН холестерол. И. Аничков и С. С. Халатов, 1913).

За да се получат атеросклеротични промени в аортата и големите съдове, възрастните зайци се хранят ежедневно в продължение на 3-4 месеца с холестерол, разтворен в слънчогледово масло. Холестеролът се разтваря в загрято слънчогледово масло, така че се получава 5-10% разтвор, който се инжектира в стомаха, загрят до 35-40 °; дневно животното получава 0,2-0,3 g холестерол на 1 kg телесно тегло. Ако не се изисква точна доза холестерол, той се дава смесен със зеленчуци. Още след 1,5-2 седмици животните развиват хиперхолестеролемия, като постепенно достигат много високи стойности (до 2000 mg% със скорост 150 mg%). В аортата, според Н. Н. Аничков (1947), се развиват следните промени. На вътрешната повърхност на съда 3-4 седмици след началото на експеримента се появяват петна и ивици с овална форма, донякъде издигнати. Постепенно (до 60-70 дни) се образуват доста големи плаки, изпъкнали в лумена на съда. Те се появяват предимно в началната част на аортата над клапите и в свода в устията на големите цервикални артерии; по -нататък тези промени се разпространяват по аортата в каудална посока (фиг. 14). Брой и размер на плаките

увеличават, те се сливат помежду си, за да образуват непрекъснато дифузно удебеляване на аортната стена. Същите плаки се образуват по клапите на лявото сърце, в коронарната, каротидната и белодробната артерии. Отлагане на липоиди се наблюдава както в стените на централните артерии на далака, така и в малките артерии на черния дроб.

Т.А. Синицина (1953), за да получи атеросклероза на основните клони на коронарните артерии на сърцето, хранеше зайци дълго време с жълтъци (0,2 - 0,4 g холестерол), разхлабени в мляко, и в същото време им инжектира с 0,3 g тиоурацил. Всеки заек получава 170-200 жълтъка по време на експеримента. Микроскопското изследване на ранен етап разкрива дифузно натрупване на липоиди в интерстициалното вещество на аортната стена, особено между вътрешната еластична плоча и ендотела. Впоследствие се появяват големи клетки (полибласти и макрофаги), натрупващи липоидни вещества под формата на двойнопречупващи капки холестерол. В същото време на местата на отлагане на липоиди се образува голямо количество еластични влакна, които се отделят от вътрешната еластична плоча и са разположени между клетките, съдържащи липоиди. Скоро на тези места първо се появяват прсколагенови, а след това и колагенови влакна (Н. Н. Аничков, 1947).

В проучванията, проведени под ръководството на Н. Н. Аничков, също беше изследван процесът на обратно развитие на описаните по -горе промени. Ако след 3-4 месеца хранене на животните с холестерол спрете приложението му, тогава има постепенна резорбция на липоиди от плаките, която при зайци продължава повече от две години. На места с големи липоидни натрупвания се образуват влакнести плаки, с липоидни остатъци и кристали на холестерола в центъра. Полак (1947) и Фистбрук (1950) показват, че с увеличаване на теглото на животните тежестта на експерименталната атеросклероза се увеличава.

Дълго време зайците остават единствените животински видове, използвани за получаване на експериментална атеросклероза. Това се дължи на факта, че например при кучета, когато се хранят дори с големи количества холестерол, нивото на последния в кръвта се повишава леко и атеросклерозата не се развива. Steiner et al. (1949) показват, че ако комбинирате храненето на кучета с холестерол с намаляване на функцията на щитовидната жлеза, възниква значителна хиперхолестеролемия и се развива атеросклероза. Кучетата се прилагат тиоурацил дневно в продължение на 4 месеца с храна във все по -големи количества: през първите два месеца, по 0,8 g всяко, през третия месец - по 1 g всяко, и след това по 1,2 g всяко. 10 g холестерол, който преди това е разтворен в етер и се смесва с храна; храната се дава на кучетата след изпаряване на етера. Контролните експерименти показват, че продължителното приложение на тиоурацил самостоятелно или холестерол на кучета не причинява значителна хиперхолестеролемия (4-00 mg% при скорост от 200 mg%) или атеросклероза. В същото време при едновременно приложение на тиоурацил и холестерол на кучета се развива тежка хиперхолестеролемия (до 1200 mg%) и атеросклероза.

Топографията на атеросклерозата при кучета в много по -голяма степен, отколкото при зайци, прилича на човешка атеросклероза: най -изразените промени са в коремната аорта, има значителна атеросклероза на големи клони на коронарните артерии на сърцето със значително стесняване на лумена на съда (Фиг. 15), много плаки са забележими в артериите на мозъка ... Huper (1946) инжектира ежедневно кучета във вратната вена с 50 ml разтвор на хидроксилцелулоза с различен вискозитет (5-6 пъти по-висок от вискозитета на плазмата) и наблюдава развитието на атероматоза и дистрофични промени в средната мембрана в аортата. Когато се оценява тежестта на експерименталната атеросклероза, трябва да се вземат предвид инструкциите на Lindsay et al. (1952, 1955), които установяват, че старите кучета и котки често имат значителна атеросклероза. Липоидните отлагания обикновено са незначителни и в тях не се открива холестерол.

Bregdon и Boyle (1952) получават атеросклероза при плъхове чрез интравенозни инжекции на липопротеини, получени от серум на зайци, хранени с холестерол. Тези лнопротеини се изолират, пречистват и концентрират чрез центрофугиране при 30 хиляди оборота в минута с повишена концентрация на серумна сол до 1063. Излишната сол след това се отстранява чрез диализа. При ежедневни многократни инжекции плъховете развиват значителни липоидни отлагания в стената на аортата и големите съдове. Чайков, Линдзи, Лоренц (1948), Линдзи, Никълс и Чайков (1.955) са получили атеросклероза при птици, като периодично им инжектират подкожно 1-2 таблетки диетилстилбестрол (всяка таблетка съдържа 12-25 mg от лекарството); опитът продължи 10 месеца.

Развиващата се атеросклероза в топографията и морфогенезата не се различава от холестерола. Според тези автори атеросклерозата при птиците може да се получи по обичайния начин - хранене с холестерол.

Възпроизвеждането на атеросклероза при маймуни често завършва с неуспех (Kawamura, цитирано по Mann et al., 1953). Въпреки това, Mann et al. (1953) успяват да получат изразена атеросклероза на аортата, каротидната и бедрената артерия при човекоподобни маймуни, когато те се хранят в продължение на 18-30 месеца с храна, богата на холестерол, но съдържаща недостатъчно количество метионин или цистин. Ежедневното добавяне на 1 g метионин към храната предотвратява развитието на атеросклероза. По -рано Рейнхарт и Грийнберг (1949) са получили атеросклероза при маймуни, когато са били държани в продължение на 6 месеца на диета с висок холестерол и недостатъчен пиридоксин.

Развитието на експериментална атеросклероза може да бъде ускорено или, обратно, забавено. Редица изследователи наблюдават по -интензивно развитие на атеросклероза при хранене на животни с холестерол в комбинация с експериментална хипертония. И така, N.N. Аничков (1914) показва, че когато луменът на коремната аорта се стеснява с V "-2 / 3, развитието на атеросклероза при зайци, получаващи 0,4 g холестерол дневно, се ускорява значително. Според N.I. Аничков, по-интензивни атеросклеротични промени могат да бъдат получени при животни при хранене с холестерол и ежедневни интравенозни инжекции на 1: 1000 разтвор на адреналин в количество от 0,1-0,15 ml за 22 дни. Wheelens (1943) дава на зайци 1 g холестерол дневно (6 дни в седмицата) и ги поставя в изправено положение за 5 часа (също 6 пъти седмично), което води до повишаване на кръвното налягане с 30-40%. Опитът продължи 4 до 12 седмици; при тези животни атеросклерозата беше много по -изразена, отколкото при контролите (които бяха хранени само с холестерол или поставени в изправено положение).

СРЕЩУ. Смоленски (1952) наблюдава по -интензивно развитие на атеросклероза при зайци с експериментална хипертония (стесняване на коремната аорта; обвиване на единия бъбрек с гумена капсула и отстраняване на другия).

Естер, Дейвис и Фридман (1955) наблюдават ускоряване на развитието на атеросклероза при животни, когато се хранят с холестерол в комбинация с многократни инжекции с епинефрин. На зайците се инжектира ежедневно епинефрин интравенозно в размер на 25 mg на kg телесно тегло. Тази доза се увеличава след 3-4 дни до 50 mg на 1 kg телесно тегло. Инжекциите са продължили 15 до 20 дни. През същия период животните получават 0,6-0,7 g холестерол. Експерименталните животни показват по -значителни отлагания на липоиди в аортата, в сравнение с контролните зайци, които получават само холестерол.

Schmidtman (1932) показа значението на повишеното функционално натоварване на сърцето за развитието на атеросклероза на коронарните артерии. Плъховете получават 0,2 г холестерол, разтворен в растително масло дневно с храната. Едновременно с това животните бяха принудени да бягат всеки ден на бягаща пътека. Опитът продължи 8 месеца. Контролните плъхове получават холестерол, но не работят в барабана. При опитни животни сърцето е било около 2 пъти по -голямо, отколкото при контролите (главно поради хипертрофия на стената на лявата камера); те имаха особено изразена атеросклероза на коронарните артерии: на някои места луменът на съда беше почти напълно затворен от атеросклеротична плака. Степента на развитие на атеросклероза в аортата при опитни и контролни животни е приблизително еднаква.

К.К. Maslova (1956) установи, че когато зайците се хранят с холестерол (0,2 mg дневно в продължение на 115 дни) в комбинация с интравенозен никотин (0,2 ml, 1% разтвор дневно), отлагането на липоиди в аортната стена се случва в много по -голяма степен, отколкото в случаите където зайците получават само холестерол. К. К. Маслова обяснява това явление с факта, че дистрофичните промени в съдовете, причинени от никотина, допринасят за по -интензивното натрупване на липоиди в стената им. Kelly, Taylor and Huss (1952), Prior and Hartmap (1956) показват, че в области на дистрофични промени в аортната стена (механично увреждане, краткотрайно замръзване) атеросклеротичните промени са особено изразени. В същото време отлагането на липоиди на тези места забавя и нарушава хода на възстановителните процеси в стената на съда.

Редица проучвания показват забавящия ефект на някои вещества върху развитието на експериментална атеросклероза. Така че, когато се хранят зайци с холестерол и едновременно им се дава тироидин, развитието на атеросклероза е много по -бавно. В. В. Татарски и В. Д. Ziperling (1950) установява, че тироидинът насърчава по -бързо обратно развитие на атероматозни плаки. Зайците се инжектират ежедневно през епруветка в стомаха на 0,5 g холестерол (0,5% разтвор в слънчогледово масло). След 3,5 месеца хранене с холестерол започва да се използва тиреоидин: ежедневно въвеждане в стомаха през епруветка с 0,2 g тироидин под формата на водна емулсия за 1,5-3 месеца. При тези зайци, за разлика от контролните зайци (които не са инжектирани с тиреоидин), се наблюдава по -рязък спад на хиперхолестеролемията и по -изразено обратно развитие на атероматозни плаки (по -малко липоиди в аортната стена, отложени главно под формата на големи капки ). Холинът също има забавящ ефект върху развитието на атеросклероза.

Steiner (1938) дава на зайци 3-4 месеца 3 пъти седмично с храна 1 g холестерол. В допълнение, животните се инжектират ежедневно с 0,5 g холин под формата на воден разтвор

емулсии. Оказа се, че холиите значително забавят развитието на атеросклероза. Показано е също, че под въздействието на холин се наблюдава по-бързо обратно развитие на атероматозни плаки (въвеждането на холин на зайци в рамките на 60 дни след предварително 110-дневно хранене с холестерол). Данните на Staper бяха потвърдени от Bauman и Rush (1938), Morrisop и Rossi (1948). Horlick и Duff (1954) установяват, че развитието на атеросклероза се забавя значително под въздействието на хепарин. Зайците получават 1 г холестерол дневно с храна в продължение на 12 седмици. В същото време животните получават ежедневно интрамускулни инжекции от 50 mg хепарин. При лекуваните зайци атеросклерозата е значително по -слабо изразена, отколкото при контролните зайци, които не са получавали хепарин. Подобни резултати са получени по -рано от Konstanides et al. (1953). Stumpf and Wheelens (1954), Gordon, Kobernik and Gardner (1954) установяват, че кортизонът забавя развитието на атеросклероза при зайци, получаващи холестерол.

Дъф и Мак Милап (1949) показват, че развитието на експериментална атеросклероза значително се забавя при зайци с алоксанов диабет. На зайците се инжектира интравенозно 5% воден разтвор на алоксип (в размер на 200 mg на 1 kg телесно тегло). След 3-4 седмици (когато се разви картината на диабета), на животните се дава холестерол за 60-90 дни (те получават общо 45-65 g холестерол). При тези животни, в сравнение с контролите (без диабет), атеросклерозата е много по -слабо изразена. Някои изследователи са забелязали рязко забавяне на развитието на атеросклероза при зайци, които едновременно с приема на холестерол са били изложени на общо излагане на ултравиолетови лъчи. При тези животни съдържанието на серумния холестерол леко се повишава.

Някои витамини оказват значително влияние върху развитието на атеросклероза. Доказано е (А. Л. Мясников, 1950; Г. И. Лейбман и Е. М. Берковски, 1951), че под въздействието на аскорбинова киселина развитието на атеросклероза се забавя. G.I. Лейбман и Е.М. Берковски дава на зайци дневно в продължение на 3 месеца, 0,2 g холестерол на 1 kg телесно тегло. Едновременно с това животните получават ежедневно аскорбинова киселина (0,1 g на 1 kg телесно тегло). При тези животни атеросклерозата е по -слабо изразена, отколкото при тези, които не получават аскорбинова киселина. При зайци, получаващи холестерол (0,2 g дневно в продължение на 3-4 месеца) в комбинация с витамин D (10 000 единици дневно през целия експеримент), развитието на атеросклеротични промени се засилва и ускорява (А. Л. Мясников, 1950).

Според Brager (1945), витамин Е допринася за по -интензивното развитие на експерименталната холестеролна атеросклероза: зайци 3 пъти седмично в продължение на 12 седмици С просяк се дава 1 g холестерол; в същото време са направени интрамускулни инжекции от 100 mg витамин Е. Всички кореми от HI1IX имат по -висока хиперхолестеролемия и по -тежка атеросклероза, в сравнение с зайци, които не получават витамин Е.

ВЪЗКУЛЯРНИ ЗАБОЛЯВАНИЯ, РАЗВИВАЩИ СЕ НА ХРАНЕНЕ. ПРОМЕНИ В АОРАТАТА ПРИ ХИПЕРВИТАМИНОЗА D

Под въздействието на големи дози витамин D, животните развиват изразени промени във вътрешните органи и големите съдове. Kreitmire и Hintzelman (1928) наблюдават значителни варовикови отлагания в средната мембрана на аортата при котки, които получават 28 mg облъчен ергостерол дневно с храна в продължение на един месец (фиг. 16). Некротични промени в средната обвивка на аортата с последващо калцифициране са открити при плъхове от Dagide (1930), който ежедневно дава на животните 10 mg облъчен ергостерол в 1% разтвор в зехтин. Meessen (1952) дава на зайци 5000 cd за три седмици за получаване на некроза на средната аортна мембрана. витамин Dg. При тези условия са настъпили само микроскопични промени. Гилман и Гилбърт (1956) откриват дистрофия на средната аортна мембрана при плъхове, на които са дадени 100 000 единици за 5 дни. витамин D на 1 кг телесно тегло. Съдовата лезия е по -интензивна при животни, на които са дадени 40 μg тироксин за 21 дни преди приложението на витамин D.

АОРТИЧНА НЕКРОЗА И АНЕУРИЗМИ ПРИ ПЛЪЦИ

При продължително хранене на плъхове с храна, съдържаща голямо количество грах, се развиват дегенеративни промени в аортната стена с постепенно образуване на аневризма. Bechkhyubur и Lelich (1952) хранят бели плъхове с храна, 50% от които са смлян или едър, необработен грах. В допълнение към граха, диетата включваше мая, казеин, зехтин, смес от сол и витамини. Животните са били на диета от 27 до 101 дни. При 20 от 28 -те експериментални плъхове се е развила аортна аневризма в областта на аортната дъга. При някои животни аневризмата се разкъсва с образуването на масивен хемоторакс. Хистологичното изследване установява оток на средната аортна мембрана, разрушаване на еластичните влакна и незначителни кръвоизливи. По -късно се развива фиброза на стената с образуването на аневризматично разширение на съда. Panseti и Baird (1952) в подобни експерименти наблюдават развитието на аневризма в гръдната аорта при 6 от 8 опитни плъхове. Заедно с това, животните развиват кифосколиоза, възникнала в резултат на дистрофични промени в телата на прешлените. Пет животни умират на 5-9 седмици от спукана аневризма и масивен хемоторакс.

Walter и Wirtschaftsr (1956) държат млади плъхове (21 дни след раждането) на диета с 50% грах; освен това диетата включваше: царевица, казеин, мляко на прах, сол, витамини. Всичко това беше смесено и дадено на животните. Последните бяха убити 6 седмици след началото на експеримента. За разлика от цитираните по -горе експерименти, в тези експерименти се наблюдава увреждане на пристанищата не само в областта на арката, но и в други отдели, включително коремния. Хистологично съдовите промени настъпват в два паралелни процеса: дистрофия и разпад на еластичната рамка, от една страна, и фиброза, от друга. Обикновено се наблюдават множество интрамурални хематоми. Значителни промени са настъпили и в белодробната артерия и коронарните артерии на сърцето. Някои плъхове са умрели поради спукана аневризма; в редица случаи последният имаше характер на разслояване. Lulich (1956) показа, че описаните промени в аортата се дължат на P-амипопропиопитрит, съдържащ се в граха.

НЕКРОТИЧЕН АРТЕРИТ

Холман (1943, 1946) показа, че при кучета, хранени с диета, богата на мазнини, бъбречната недостатъчност води до развитие на некротизиращ артериит. На животните се дава храна, в която 32 части са от говежди черен дроб, 25 части са от тръстикова захар, 25 части са нишестени зърна, 12 части са масло, 6 части са рибено масло; към тази смес бяха добавени каолин, соли и доматен сок. Експериментът продължи 7-8 седмици (времето, необходимо за появата на съдови лезии при наличие на бъбречна недостатъчност). Бъбречната недостатъчност е постигната по различни начини: двустранна нефректомия, подкожни инжекции с 0,5% воден разтвор на уранов нитрат в размер на 5 mg на 1 kg тегло на животното, или интравенозно приложение на 1% воден разтвор на живачен хлорид в размер на 3 mg на 1 kg тегло на животното. 87% от експерименталните животни развиват некротизиращ артериит. Наблюдава се изразен париетален ендокардит в сърцето. Некротизиращият артериит се развива само при комбинация от хранене на животни с храна, богата на мазнини, с бъбречна недостатъчност. Всеки от тези фактори, взети поотделно, не е причинил значителни щети на стените на съдовете.

ВАСКУЛАЛНИ ПРОМЕНИ, ПРОИЗВОДНИ С НЕДОСТАТЪЧНО КОЛИЧЕСТВО НА ПРОТЕИН В ХРАНАТА

Hanmap (1951) дава на бели мишки храна със следния състав (в проценти): захароза - 86,5, казеин - 4, смес от сол - 4, растително масло - 3, рибено масло - 2, цистин - 0,5; безводна смес от глюкоза - 0,25 (0,25 g от тази смес съдържа 1 mg рибофлавин), пара -аминобензоена киселина - 0,1, инозитол - 0,1. Към 100 g от диетата се добавят 3 mg калциев пантотенат, 1 mg ниацин, 0,5 mg тиамин солна киселина и 0,5 mg пиридоксин солна киселина. Мишките умират в рамките на 4-10 седмици. Наблюдавано е увреждане на аортата, белодробната артерия и кръвоносните съдове на сърцето, черния дроб, панкреаса, белите дробове и далака. На ранен етап в интимата на съдовете се появи базофилно, хомогенно вещество, образуващо донякъде изпъкнали плаки под ендотела: настъпиха фокални лезии на средната мембрана с разрушаване на еластичните влакна. Процесът завършва с развитието на атеросклероза с отлагане на вар в зоните на дистрофия.

ДИСТРОФНО-СКЛЕРОТИЧНИ ПРОМЕНИ В СЪДИТЕ, ПОЛУЧЕНИ С ПОМОЩТА НА ОТДЕЛНИ ХИМИКАЛИ

(адреналин, никотин, тирамин, дифтериен токсин, нитрати, протеини с високо молекулно тегло)

Josue (1903) показва, че след 16-20 интравенозни инжекции на адреналин, зайците развиват значителни дистрофични промени, главно в средната аортна мембрана, завършващи със склероза и, в някои случаи, аневризмална дилатация. Това наблюдение по -късно беше потвърдено от много изследователи. Erb (1905) инжектира зайци в ушна вена на всеки 2-3 дни, 0,1-0,3 mg епинефрин в 1% разтвор; инжекциите продължават седмици и дори месеци. Рженховски (1904), приложен на зайци интравенозно 3 капки разтвор на епинефрин 1: 1000; инжекциите се правят ежедневно, понякога на интервали от 2-3 дни в продължение на 1,5-3 месеца. BD Ivanovsky (1937) за получаване на адреналинова склероза, прилаган на зайци интравенозно дневно или през ден разтвор на адреналин I: 20000 в количество от 1 до 2 ml. Зайците са получили до 98 инжекции. В резултат на продължителни инжекции на адреналин естествено се развиват склеротични промени в аортата и големите съдове. Засяга се предимно средната мембрана, където се развива фокална некроза, последвана от развитие на фиброза и калцификация на некротични участъци.

Циглер (1905) наблюдава в някои случаи удебеляване на интимата, понякога значително. Може да настъпи аневризматично уголемяване на аортата. Областите на склероза и калцификация стават макроскопски видими след 16-20 инжекции. Значителни склеротични промени се развиват и в бъбречните (Erb), илиачните, сънните (Ziegler) артерии и във вътрешноорганичните клони на големите артериални стволове (BD Ivanovsky). Б.Д. Ивановски показа, че под въздействието на многократни инжекции адреналин настъпват значителни промени в малките артерии и дори в капилярите. Стената на последния се удебелява, става склерозирана и капилярите вече не се прилепват, както е нормално, директно към паренхимните елементи на органите, а са отделени от тях с тънък съединителнотъкан слой.

Walter (1950), изучавайки съдови промени след интравенозно приложение на високи дози адреналин на кучета (8 ml 1: 1000 разтвор на всеки 3 дни), показва, че вече в рамките на 10 дни и дори по -рано се наблюдават множество кръвоизливи в средната мембрана на гръдната аорта, а също и в малките артерии на сърцето, стомаха, жлъчния мехур, бъбреците, дебелото черво. Има фибриноидна некроза на средната мембрана и тежък папатерит с периваскуларна клетъчна реакция. Предварителното приложение на диабиамин при животни предотвратява развитието на тези промени.

Davis и Uster (1952) показват, че при комбинация от интравенозни инжекции на зайци от e p и e fri и a (25 mg на 1 kg телесно тегло) и тироксин (подкожно приложение дневно при 0,15 mg на 1 kg телесно тегло) склеротичен промените в аортата са особено изразени. При ежедневни подкожни инжекции от 500 mg аскорбинова киселина на животни, развитието на атеросклероза се забелязва значително. Предварителното отстраняване на щитовидната жлеза инхибира развитието на атеросклероза, причинена от епинефрин (адреналин). Huper (1944) наблюдава дистрофични промени в средната обвивка на аортата и големи съдове с калцификация и образуване на кисти при кучета, оцелели от гистамин. Хистаминът се прилага подкожно в смес с пчелен восък и минерално масло на база 15 mg на 1 kg тегло на животното (вижте получаване на стомашни язви с хистамин).

По -рано Huper и Lapdsberg (1940) показват, че в случай на отравяне на кучета, еритрол тетра нитрат O "m (перорално приложение за 32 седмици дневно, в нарастващи дози от 0,00035 g до 0,064 g) или азот Mnatriem (въвеждане през устата за няколко седмици, 0.4 g дневно), има изразени дегенеративни промени, главно в средната мембрана на белодробната артерия и нейните клони. Значителните варовикови отлагания в някои случаи водят до рязко стесняване Huper (1944) наблюдава развитието на некроза на средата лигавицата на аортата с последваща калцификация и образуване на кисти при кучета, които 5 пъти седмично се инжектират във вената с разтвор на метилцелулоза в увеличаващи се количества (от 40 до 130 ml). Експериментът продължи шест месеца .. .

Промени в аортата, подобни на описаните по -горе, могат да бъдат получени при животни с многократни инжекции на n и котин. А. 3. Kozdoba (1929) инжектира в ушната вена на зайци всеки ден в продължение на 76-250 дни, 1-2 ml никотинов разтвор (средна дневна доза-0,02-1,5 mg). Наблюдавани са сърдечна хипертрофия и дистрофични промени в артерията, придружени от аневризмална дилатация. Всички животни показват значително увеличение на надбъбречните жлези. Е. А. Жебровски (1908) открива некроза на средната аортна мембрана с последваща калцификация и склероза при зайци, които поставя ежедневно в продължение на 6-8 часа под качулка, пълна с тютюнев дим. Експериментите продължават 2-6 месеца. К. К. Маслова (1956) отбелязва дистрофични промени в стената на аортата след ежедневни интравенозни инжекции на 0,2 ml 1% разтвор на никотин на зайци в продължение на 115 дни. Bailey (1917) получава изразени дистрофични промени в средната обвивка на аортата и големите артерии с некроза и множествени аневризми с ежедневни интравенозни инжекции от 0,02-0,03 ml токсин при зайци в продължение на 26 дни.

Duff, Hamilton и Mzgper (1939) наблюдават развитието на некротизиращ артериит при зайци под въздействието на многократни инжекции на тирамин (интравенозно приложение на 50-100 mg от лекарството под формата на 1% разтвор). Експериментът продължи 106 дни. При повечето зайци са настъпили изразени промени в аортата, големите артерии и артериоли на бъбреците, сърцето и мозъка и във всеки отделен случай обикновено са засегнати съдовете не на трите органа, а на един от тях. В аортата е настъпила некроза на средната мембрана, често много значителна; подобни промени са открити в големите съдове на бъбреците. Наблюдава се артериолиекроза в сърцето, бъбреците и мозъка, последвана от хиалиноза на съдовата степ. При някои зайци, във връзка с артериолиекроза, се развива масивен мозъчен кръвоизлив.

Аортит, получен чрез механична термична и инфекциозна лезия на съдовата стена

За да изследват моделите на протичане на възпалителни и репаративни процеси в аортната стена, някои изследователи използват механично увреждане на съда. Prpor и Hartman (1956), след отваряне на коремната кухина, отделят аортата и увреждат стеика, като го пробият с дебела игла с остър, огънат край. Болдуин, Тейлър и Хес (1950) увреждат аортната стена чрез краткотрайно излагане на ниски температури. За това аортата се излага в коремната област и към стената се прилага тясна тръбичка, в която се допуска въглероден диоксид. Аортната стена замръзва в рамките на 10-60 секунди. В края на втората седмица след замръзване, поради некроза на менингите, се развива аневризма на аортата. В половината от случаите има калцификация на увредените участъци. Често се случва метаплаетично образуване на кости и хрущяли. Последният се появява не по -рано от четвъртата седмица след увреждане, а костта - след 8 седмици. А. Соловьев (1929) изгаря стената на аортата и сънните артерии с нажежен термодвойник. Schlichter (1946) За да получи некроза на аортата при кучета, той изгори стената й с горелка. Изразени промени във вътрешната мембрана (кръвоизлив, некроза) в някои случаи причиняват разкъсване на съда. Ако това не се случи, склерозата на стената се развива с калцификация и образуването на малки кухини. Н. Андриевич (1901) наранява стената на артериите, изгаряйки я с разтвор на сребърен нитрат; в някои случаи, след това, засегнатата част е обвита в целоидин, което, като дразни стената на съда, прави увреждането по -значително.

Talke (1902) получава гнойно възпаление на съдовата стена чрез въвеждане на стафилококова култура в околната тъкан. По -рано Kroc (1894) показа, че гнойният артериит възниква, когато култура от микроорганизми се прилага интравенозно на животни само ако стената на съда е повредена предварително. F.M. Халецкая (1937) изучава динамиката на развитието на инфекциозен аортит, който се развива в резултат на прехода на възпалителния процес от плеврата към аортната стена. При зайци, фистулна тръба е вкарана в плевралната кухина между 6 -то и 7 -о ребро. Дупката остава отворена 3-5 дни, а в някои експерименти и три месеца. След 3-5 дни се развива фиброзно-гноен плеврит и плеврален емпием. Често се наблюдава преход на процеса към аортната стена. В последния за първи път се появи некроза на средната мембрана; те се развиват по -рано, отколкото възпалителният процес се разпространява в аортата и според F.M. Khaletskaya, са причинени от вазомоторни нарушения, дължащи се на интоксикация (първична дистрофия и некроза на средната мембрана). Ако нагнояването се разпространи в аортата, външната, средната и вътрешната мембрана последователно бяха включени във възпалителния процес с развитието на вторични некротични промени.

Така процесът завърши със склероза на съдовата стена с образуване на малки и големи белези. Във вътрешната мембрана се наблюдава тромбоартериит, завършващ с удебеляване и склероза на интимата.

Литература:

Аничков Н.Х. Beitr. патол. Анат. ти allg. Патол .. Бел 56, 1913г.

Аничков II.II. Верх. д. deutsch, патол. Ges., 20: 149, 1925.

Аничков II.Х. Новини, хпр. i potrap, регион, т. 16-17 kn 48-49 стр. 105, 1929.

Аничков II.П. Експериментални изследвания на атеросклероза. В книгата: Л. И. Абрикосов. Частен патолог, анатомия t 2 стр. 378, 1947.

Valdes A.O. Арх. патолог., 5, 1951.

Валкер Ф.И. Експериментални данни за флебит, тромбоза и емболия. Сб. работи, селищна торба. Към 40 -годишнината от дейността на В. Н. Шевкуненко, Л., 1937.

Вартапетов Б.Л. Лекар. дело, 1. 4 3. 1941г.

Б. Л. Вартапетов Лекар. бизнес. 11 - 12.848, 1946 г.

Виноградов С.А. Арх. патолог., 2, 1950.

Виноградов С.А. Арх. патолог., 1, 1955.

Виноградов С.А. Бик. опит bpol. и мед., 5, 1956 г.

Вишневская О. II. Vses. conf. патолог. Резюмета, Л. 1954.

Тема на резюмето: Експериментална атеросклероза План: 1. Въведение: Експериментална атеросклероза 2. Съдови лезии, които се развиват с хранителни разстройства 3. Промени в аортата с хипервитаминоза D 4.