Inhibítory proteázy. Inhibítory proteolýzy: mechanizmus účinku, liečivá

Inhibítory HIV proteázy zahŕňajú saquinavir, indinavir, ritonavir, nelfinavir a amprenavir.

Mechanizmus akcie

HIV proteáza je enzým potrebný na proteolytické štiepenie polyproteínových prekurzorov vírusu na jednotlivé proteíny, ktoré tvoria HIV. Štiepenie vírusových polyproteínov je nevyhnutné na to, aby sa vírus stal infekčným. PI blokujú aktívne miesto enzýmu a narúšajú tvorbu vírusových kapsidových proteínov. Lieky v tejto skupine potláčajú replikáciu HIV vrátane rezistencie na inhibítory reverznej transkriptázy. V dôsledku inhibície aktivity HIV proteázy sa vytvárajú nezrelé vírusové častice, ktoré nie sú schopné infikovať iné bunky.

Spektrum činnosti

Aktivita PI proti HIV-1 a HIV-2 má klinický význam.

Indikácie

Liečba infekcie HIV ako súčasť kombinovanej liečby.

Chemoprofylaxia parenterálnej infekcie HIV.

saquinavir (INV, FTV)

Prvý liek skupiny PI, uvedený do klinickej praxe v roku 1995. Od tohto momentu sa začala éra HAART.

Farmakokinetika

Absorbuje sa z gastrointestinálneho traktu o 30 %, ale biologická dostupnosť je iba 4 % v dôsledku účinku „prvého prechodu“ pečeňou. Jedlo (najmä mastné) výrazne zvyšuje biologickú dostupnosť sachinaviru. Čas na dosiahnutie maximálnej koncentrácie v krvi je 4 hodiny.Väzba na plazmatické bielkoviny je 98%. Je dobre distribuovaný, ale prakticky neprechádza cez BBB. Metabolizuje sa v pečeni, vylučuje sa hlavne stolicou. Polčas rozpadu je 1–2 hodiny, pri systematickom užívaní sa hromadí.

Nežiaduce reakcie

Gastrointestinálny trakt: hnačka, bolesť brucha, nevoľnosť.

Ústna dutina: ulcerácia sliznice, faryngitída.

Hematologické reakcie: hemolytická anémia.

Metabolické poruchy: redistribúcia podkožného tuku, zvýšená hladina cholesterolu (vrátane lipoproteínov s nízkou hustotou), triglyceridov, hyperglykémia (niekedy vzniká diabetes mellitus 2. typu).

Nervový systém: bolesť hlavy, zmätenosť, ataxia, slabosť, závrat, astenický syndróm, kŕče, periférne neuropatie, necitlivosť končatín.

Koža: vyrážka, svrbenie, Stevensov-Johnsonov syndróm, dermatitída.

Muskuloskeletálny systém: bolesti svalov a kĺbov, osteoporóza.

Iné: avaskulárna nekróza (zriedkavé).

V kombinácii so zalcitabínom: parestézia, nespavosť, vracanie, stomatitída, strata chuti do jedla.

V kombinácii so zidovudínom: návaly horúčavy, zmeny pigmentácie, zmätenosť, hypermotilita čriev, sucho v ústach, eufória, nespavosť, podráždenosť, zmena farby stolice, glositída, laryngitída, retencia moču, anorexia, xeroftalmia, neutropénia, myeloidná leukémia (2 mesiace po ukončení liečby).

Kontraindikácie

Absolútna

Precitlivenosť na saquinavir.

Zlyhanie pečene.

Relatívna

Vek do 16 rokov a nad 60 rokov.

Tehotenstvo.

Laktácia.

Zlyhanie obličiek.

Varovania

Tehotenstvo. Neexistujú žiadne údaje o prechode saquinaviru cez placentu a znížení rizika transplacentárneho prenosu vírusu.

Laktácia. Neexistujú žiadne údaje o penetrácii sachinaviru do materského mlieka. Matkám s HIV infekciou sa dojčenie neodporúča.

Pediatria.Účinnosť a bezpečnosť sachinaviru u detí mladších ako 16 rokov sa neskúmali.

Geriatria.Účinnosť a bezpečnosť sachinaviru u ľudí starších ako 60 rokov sa neskúmali.

Pri súčasnom užívaní saquinaviru a indinaviru sa koncentrácia saquinaviru a indinaviru zvyšuje 4-7 krát, zatiaľ čo obsah indinaviru sa nemení.

Keď sa saquinavir používa v kombinácii s ritonavirom, koncentrácia saquinaviru sa zvýši 20-násobne, ale obsah ritonaviru sa nemení.

Keď sa saquinavir používa v kombinácii s nelfinavirom, koncentrácia saquinaviru sa zvýši 3–5-krát, nelfinaviru o 20 %.

Pri súčasnom užívaní saquinaviru a amprenaviru sa koncentrácia saquinaviru zníži o 19%, amprenaviru - o 32%.

Nevirapín znižuje koncentrácie sachinaviru o 25 %.

Saquinavir môže zvýšiť plazmatické koncentrácie mnohých liekov, inhibovať ich metabolizmus v pečeni (nifedipín, verapamil, diltiazem, klindamycín, chinidín, námeľové lieky, cyklosporín, fentanyl, alfentanil, alprazolam, triazolam, dizopyramid, lovastatín, simvastatín).

Saquinavir sa nemá kombinovať s terfenadínom, astemizolom alebo cisapridom kvôli vysokému riziku potenciálne smrteľnej srdcovej arytmie.

Ketokonazol, flukonazol a itrakonazol zvyšujú plazmatické koncentrácie sachinaviru.

Induktory cytochrómu P-450 (rifampicín, rifabutín, fenytoín atď.) znižujú plazmatickú koncentráciu sachinaviru, čím znižujú jeho účinnosť.

Musí sa užívať v jednohodinových intervaloch. Vedľajšie účinky: bolesť hlavy, nevoľnosť, bolesť brucha, hnačka, urolitiáza.

Ritonavir (Horvir). Vedľajšie účinky: pocit únavy, kovová chuť v ústach, hnačka, nevoľnosť, vracanie. Jedlo zohráva dôležitú úlohu pri znižovaní vedľajších účinkov, preto sa odporúča experimentovať s potravinami na zmiernenie vedľajších účinkov lieku. Ak napriek tomu začne vracanie (liek je v črevách po dvoch hodinách), lekári neodporúčajú užívať ďalšiu dávku. Aby sa znížili vedľajšie účinky, je potrebné užívať ritonavir vo zvyšujúcej sa schéme počas dvoch týždňov.

Amprenavir (Agenerase). Vedľajšie účinky: vyrážka (u 20 % užívateľov), nevoľnosť, vracanie, hnačka, kŕče alebo brnenie v ústach. Užívanie inhibítorov proteáz môže spôsobiť zmeny hladín cukru v krvi (v zriedkavých prípadoch diabetes mellitus), zvýšenie hladín tukov v krvi a lipodystrofiu (prerozdelenie tukových zásob). Pri hemofílii boli pozorované prípady krvácania.

Atazanavir (Reyataz). Vedľajšie účinky: zvýšená hladina bilirubínu, bolesti hlavy, bolesť alebo brnenie končatín, nevoľnosť, hnačka, vyrážka. V zriedkavých prípadoch arytmia (nepravidelný srdcový rytmus). Užívanie inhibítorov proteáz môže spôsobiť zmeny hladín cukru v krvi (v zriedkavých prípadoch diabetes mellitus), zvýšenie hladín tukov v krvi a lipodystrofiu (prerozdelenie tukových zásob). Pri hemofílii boli pozorované prípady krvácania.

Bunka infikovaná HIV obsahuje vo svojom genóme provírus, ktorý je schopný produkovať materiál pre nové vírusy. Spočiatku sa na vírusovej RNA syntetizuje dlhý proteínový reťazec. Aby sa vytvorili nové plnohodnotné vírusy, musí byť tento reťazec rozdelený na časti – budúce jednotlivé prvky štruktúry nových vírusov – pomocou špeciálneho enzýmu kódovaného vírusovým genómom, nazývaného proteáza. Bez tohto enzýmu nie je vírus schopný rozrezať dlhú molekulu prekurzorového proteínu a vytvoriť kompletné vírusové proteíny. Prirodzene, vedci začali hľadať chemické zlúčeniny, ktoré narúšajú prácu proteázy. Lieky, ktoré sa objavili na tomto základe, boli klasifikované ako inhibítory proteázy (PI). PI sa špecificky viažu na miesto enzýmu proteázy, ktorý „reže“ vírusový prekurzorový proteín v infikovanej bunke. V dôsledku toho enzým prestane fungovať a konštrukcia nových vírusových častíc sa stane nemožným.

Táto trieda drog sa objavila v polovici 90. rokov. Na rozdiel od inhibítorov reverznej transkriptázy sú inhibítory proteázy vo svojom pôsobení oveľa špecifickejšie a nemajú prakticky žiadny vplyv na fungovanie vlastného enzýmového systému bunky. Navyše, keďže inhibítory proteáz pôsobia na vírus vo veľmi malých množstvách, ich vedľajšie účinky na organizmus sú minimálne.

Prvý liek zo skupiny inhibítorov HIV proteázy dostal liečivý názov saquinavir a obchodný názov Invirase. Následne sa objavila celá séria takýchto liekov: ritonavir (Norvir), indinavir (Crixivan), nelfinavir (Viracept), amprenavir (Agenerase), lopinavir (Kaletra - v kombinácii s ritonavirom), atazanavir (Reyataz).

Lieky na báze inhibítorov proteázy majú svoje nevýhody. Liečebný režim zahŕňa použitie veľkého množstva tabliet a jasné pokyny na ich použitie. Inhibítory proteáz nie sú bez vedľajších účinkov, najmä zmeny, ktoré spôsobujú v metabolickom procese, vedú k srdcovým ochoreniam.

Jeden z najnovších liekov, atazanavir (Reyataz), sa stal prvým inhibítorom proteázy, ktorý je potrebné užívať iba raz denne. Všetky predchádzajúce protetické inhibítory sa musia užívať niekoľko tabliet niekoľkokrát denne. Reyataz sa odporúča užívať dve tablety raz denne spolu s ďalšími

V roku 2013 v USA a EÚ po dlhých klinických štúdiách FDA schválila prvé nové perorálne lieky na liečbu chronickej hepatitídy C - inhibítory proteázy a polymerázy– lieky, ktorých účinok je namierený priamo na vírus hepatitídy C. Majú takzvaný priamy antivírusový účinok, pričom inhibujú (blokujú) kľúčové intracelulárne štádiá rozmnožovania vírusu.

Výhodou tejto triedy liekov, na rozdiel od antivírusovej terapie peginterferónom a ribavirínom, je forma podávania (tablety alebo kapsuly), vysoká účinnosť a dobrá znášanlivosť. Napriek tomu, že náklady na originálne lieky (spoločnosti Gilead Sciences, Bristol-Myers Squibb a ďalší) dosahuje desiatky tisíc dolárov za kurz, sú k dispozícii relatívne lacné analógy (generiká) vyrobené v Indii, Egypte atď., ktoré spravidla nie sú horšie ako originál a ktorých cena nepresahuje 1 000 dolárov na štandardný 12-týždňový kurz.

Tu je zoznam nových registrovaných liekov a ich analógov v poradí podľa obľúbenosti. Zoznam sa pravidelne aktualizuje.

Sofosbuvir (originálny liek - Sovaldi)

Inhibítor RNA polymerázy NS5B sofosbuvir, ktorý môže potlačiť replikáciu vírusu hepatitídy C. Používa sa ako základ všetkých schém na liečbu pacientov s genotypmi 1, 2, 3 a 4 vírusu.

Použitie sofosbuviru s interferónom a/alebo ribavirínom

U pacientov s prvým a štvrtým genotypom sa sofosbuvir užíva spolu s peginterferónom a ribavirínom počas 12 týždňov, pre druhý a tretí genotyp vírusu - iba s ribavirínom počas 12, respektíve 24 týždňov.

Liečebný režim sa môže zmeniť v prípade cirhózy pečene a nereagovania na predchádzajúcu liečbu. Pravdepodobnosť vyliečenia u pacientov s genotypom 2 a 3 a u predtým neliečených pacientov s genotypom 1 je až 90 %.

Použitie sofosbuviru s inými inhibítormi bez interferónu

Sofosbuvir v kombinácii s ledipasvirom (tieto zložky sú súčasťou lieku Harvoni) poskytuje viac ako 90% účinnosť u pacientov s genotypom 1 vrátane cirhózy, ktorí predtým nereagovali na liečbu. Dnes je to hlavný liečebný režim pre pacientov s genotypom 1

Sofosbuvir v kombinácii s daklatasvirom sa odporúča pre genotyp 1 počas 12-24 týždňov v závislosti od predchádzajúcej liečby a pre genotyp 3 počas 12 týždňov (s možným pridaním ribavirínu). Účinnosť tohto režimu dosahuje 90 % u pacientov bez cirhózy. Dnes je to hlavný liečebný režim pre pacientov s genotypmi 1, 2 a 3 .

Použitie sofosbuviru v kombinácii so simeprevirom ukázalo dobré výsledky u pacientov s genotypom 1 a cirhózou pečene, vr. dekompenzovaný. Percento vyliečených dosahuje 90 %.

Sovaldi cena

Cena 12-týždňového kurzu s originálom Sovaldi je približne 84 000 dolárov. Dnes je k dispozícii široká škála analógov (generík) Sovaldi s účinnou látkou sofosbuvir 400 mg, ktorých cena za 12-týždňový kurz nepresiahne 1000 USD:

Hepcvir (Cipla Inc.)

Hepcinat (Natco Pharma Limited)

Gratisovir (Pharco Pharmaceuticals)

Grateziano (Pharco Pharmaceuticals)

MyHep (Natco Pharma Ltd a Mylan)

MPI Viropack (Marcyrl Pharmaceutical Industries)

Resof (Natco Pharma Ltd a Dr Reddy's Laboratories)

Sofolanork (Vimeo)

Sofocivir (ZetaPhar)

SoviHep (Cadila Healthcare Ltd)

Virso (Natco Pharma Ltd a Strides Arcolab)

Hepcee (Julphar Bangladesh Ltd.)

Sofovir (Hetero Corporate Industrial Estates)

Cimivir (Hetero labs & Biocon Ltd.)

Hopforhep (Global Napi Pharmaceuticals)

Viroclear (Abbott India Limited)

Sofab (Ranbaxy Laboratories)

Spegra (Emcure Pharmaceuticals Limited)

Sofosbuvir + ledipasvir (pôvodný liek Harvoni (sofosbuvir + ledipasvir))

Jedným z najsľubnejších liekov na liečbu CHC, ktorý vyvinula spoločnosť Gilead Sciences a ktorý bol schválený v roku 2014, bol kombinovaný liek (Harvoni) s obsahom 90 mg ledipasviru a 400 mg sofosbuviru v jednej tablete. Účinnosť lieku u pacientov s prvým a štvrtým genotypom vírusu presahuje 90%.

Sofosbuvir s ledipasvirom sa užíva 12 týždňov bez interferónu. Jeho použitie preukázalo dobrú bezpečnosť a účinnosť u pacientov s genotypom 1 bez cirhózy a s cirhózou pečene, ako aj nedostatočnou odpoveďou na predchádzajúcu liečbu. V závislosti od prítomnosti cirhózy a neúspešnej predchádzajúcej liečby sa dĺžka liečby môže pohybovať od 8 do 24 týždňov.

Použitie pri dekompenzovanej cirhóze pečene je povolené, ale bezpečnosť a účinnosť nebola klinicky preukázaná.

Cena sofosbuvir + ledipasvir

Originálny liek sa ponúka za cenu 1 125 USD za tabletu, takže náklady na 12-týždňový kurz môžu stáť viac ako 100 000 USD, existujú však analógy (generiká), vrátane. licencovaný, ktorého náklady na štandardný 12-týždňový kurz nepresahujú 1000 USD (t. j. 100-krát lacnejšie ako originál). Ich neúplný zoznam:

Hepcinat LP (Natco Pharma Limited)

Lesovir-C (Beximco Pharmaceuticals)

Twinvir (Incepta Pharmaceuticals)

Ledifos (Hetero Healthcare Limited)

Ledvir (Mylan Pharmaceuticals)

MyHep-LVIR (Natco Pharma Limited & Mylan Pharmaceuticals Private Limited)

Ledviclear (Hetero Labs Limited & Abbott India Limited)

Lisof (Hetero Healthcare Limited)

Resof-L (Hetero Labs Limited & Dr Reddy's Laboratories)

LediHep (Natco Pharma Limited & Zydus Heptiza)

daklatasvir

daklatasvir(daclatasvir), registrovaný v Ruskej federácii pod obchodným názvom Daklinza™ (Daklinza™) (LP-003088) je silný pangenotypový inhibítor replikačného komplexu NS5A na liečbu pacientov s chronickou vírusovou hepatitídou C v kombinácii s inými liekmi (nepoužívané v monoterapii) na liečbu vírusovej hepatitídy C genotypov 1, 2, 3 a 4 u dospelých. V súčasnosti sa daklatasvir používa v kombinácii so sofosbuvirom (s ribavirínom a bez neho), s asunaprevirom a s peginterferónom-alfa + ribavirínom. U pacientov s genotypom 3 vírusu sa podáva 12-týždňový cyklus daklatasviru v kombinácii so sofosbuvirom a ribavirínom. Tento režim umožňuje dosiahnuť SVR u 90 % pacientov. Na liečbu prvého genotypu sa používa aj kombinácia so sofosbuvirom počas 12-24 týždňov bez ribavirínu.

Dnes je sofosbuvir + daklatasvir hlavným liečebným režimom pre pacientov s genotypmi 1, 2 a 3 .

Ceny Ducklins začínajú na 45 000 dolároch na 12 týždňov. Dostupné sú však relatívne lacné prípravky daklatasviru (generický Daklinza) za cenu nepresahujúcu 300 USD za 12-týždňový kurz. Čiastočný zoznam generík:

Daclacee (Julphar Bangladesh Ltd)

Daclavir (Beacon Pharmaceuticals Limited)

Natdac (Natco Pharma)

Dacihep (Cadila Pharmaceuticals)

Daclahep (Hetero Healthcare Limited)

MyDacla (Mylan Pharmaceuticals)

Simeprevir

Ďalším liekom zo skupiny inhibítorov proteáz, ktorý blokuje kľúčový enzým reprodukcie HCV je simeprevir, ktorý sa vyrába pod ochrannými známkamiSovriad, Olisio, Olysio. Registrované v Rusku pod TM Sovriad(LP-002384). Spoločnosť Janssen-Cilag International N.V.

Simeprevir používa sa na liečbu pacientov s CHC a genotypom 1c, predtým liečených a neliečených pacientov, s cirhózou pečene aj bez nej. Tento liek sa používa buď ako súčasť štandardnej antivírusovej liečby peginterferónom a ribavirínom, alebo v kombinácii s inými inhibítormi proteázy/polymerázy, ako je sofosbuvir.

Pre pacientov s prvým genotypom bez cirhózy pečene, ktorí sa predtým neliečili

Pre pacientov s prvým genotypom s cirhózou pečene, ktorí sa predtým neliečili

Pre pacientov s prvým genotypom bez cirhózy, ktorí nereagovali na predchádzajúcu liečbu

U pacientov s genotypom 1 s cirhózou pečene, ktorí neodpovedali na predchádzajúcu liečbu

Pre pacientov s druhým genotypom bez cirhózy pečene, ktorí nepodstúpili predchádzajúcu liečbu

Pre pacientov s druhým genotypom, ktorí predtým nereagovali na liečbu a/alebo s cirhózou pečene

Pre pacientov s tretím genotypom, ktorí nepodstúpili predchádzajúcu liečbu bez cirhózy pečene

Pre pacientov s tretím genotypom, ktorí predtým nereagovali na liečbu a/alebo s cirhózou pečene

Pre všetkých pacientov so štvrtým genotypom

Pre pacientov s hepatitídou C a súbežnou infekciou HIV

Všetky vyššie uvedené režimy sa môžu použiť u pacientov s HIV a HCV.

Proteázové inhibítory

Bunka infikovaná HIV obsahuje vo svojom genóme provírus, ktorý je schopný produkovať materiál pre nové vírusy. Spočiatku sa na vírusovej RNA syntetizuje dlhý proteínový reťazec. Aby sa vytvorili nové plnohodnotné vírusy, musí byť tento reťazec rozdelený na časti - budúce jednotlivé prvky štruktúry nových vírusov - pomocou špeciálneho enzýmu kódovaného vírusovým genómom, nazývaného „proteáza“. Bez tohto enzýmu nie je vírus schopný rozrezať dlhú molekulu prekurzorového proteínu a vytvoriť kompletné vírusové proteíny. Vedci si to samozrejme všimli a začali hľadať chemické zlúčeniny, ktoré interferujú s prácou proteázy. Lieky, ktoré sa objavili na tomto základe, boli klasifikované ako inhibítory proteázy (PI). PI sa špecificky viažu na miesto enzýmu proteázy, ktorý „reže“ vírusový prekurzorový proteín v infikovanej bunke. Výsledkom je, že enzým prestane fungovať a vytvorenie nových vírusových častíc je nemožné.

Táto trieda drog sa prvýkrát objavila v polovici 90. rokov. a spôsobili revolúciu v chápaní liečby HIV. Na rozdiel od inhibítorov reverznej transkriptázy sú inhibítory proteázy vo svojom účinku oveľa špecifickejšie a čo je najdôležitejšie, nemajú prakticky žiadny vplyv na fungovanie vlastného enzýmového systému bunky. Navyše, keďže inhibítory proteáz pôsobia na vírus vo veľmi malých množstvách, ich vedľajšie účinky na organizmus sú minimálne. Prvý liek zo skupiny inhibítorov HIV proteázy dostal liečivý názov „sachinavir“ a obchodný názov „Invirase“. Po ňom sa objavila celá séria takýchto liekov: ritona-vir (Norvir), indinavir (Crixivan), nelfinavir ira-sept), amprenavir (Agenerase), lopinavir (Kaletra - v kombinácii s ritonavirom), atazanavir (Reyataz). Je ľahké si všimnúť, že názvy všetkých týchto látok končia na „navir“ (pozri prílohu 3).

Napriek skutočnosti, že v súčasnosti sa vyrába veľa liekov na báze inhibítorov proteáz a zameraných na liečbu choroby, takmer všetky majú svoje nevýhody. Liečebné režimy často zahŕňajú použitie veľkého množstva tabliet a jasné pokyny na ich použitie. Inhibítory proteáz nie sú bez vedľajších účinkov, najmä zmeny, ktoré spôsobujú v metabolickom procese, niekedy vedú k srdcovým ochoreniam.

Jeden z najnovších liekov, atazanavir (Reyataz), sa stal prvým inhibítorom proteázy, ktorý je potrebné užívať iba raz denne. Všetky predchádzajúce inhibítory proteáz sa musia užívať niekoľko tabliet až niekoľkokrát denne. Reyataz sa odporúča užívať dve tablety raz denne spolu s inými antivírusovými liekmi.

V prílohe 3 sa čitateľ môže oboznámiť so stručnými informáciami o rôznych liekoch, ktoré sa v súčasnosti v praxi používajú pri liečbe HIV. Ako však ukázala prax, žiadne z týchto liekov samotné, t.j. v monoterapii, neposkytuje výrazný a trvalý účinok.

Inhibítory proteolýzy sú lieky používané na liečbu akútnej pankreatitídy. Akútna pankreatitída je charakterizovaná skutočnosťou, že za patologických podmienok je narušená celistvosť pankreatických vývodov.

mliečna žľaza.

Proteolytické enzýmy začnú vychádzať a tráviť vlastné tkanivo žľazy. Preto je terapia akútnej pankreatitídy primárne zameraná na inaktiváciu proteolytických enzýmov. Na tento účel sa syntetizovalo množstvo liekov, nazývaných inhibítory proteolýzy (tabuľka 11).

Mechanizmus účinku týchto liekov spočíva v tom, že inhibujú aktivitu proteolytických enzýmov pankreasu, čím bránia jeho vlastnému tráveniu.

Aby sme to zhrnuli, ešte raz poznamenávame, že lieky, ktoré ovplyvňujú tráviaci systém, majú obrovský praktický význam. V tejto prednáške sme sa pokúsili predstaviť najmodernejšie lieky používané na úpravu dysfunkcií tráviaceho systému.

Nemali sme v úmysle vymenovať všetky existujúce drogy, to nie je možné urobiť, pretože počet týchto liekov je obrovský a nemá zmysel učiť sa ich naspamäť. Oveľa dôležitejšie je pochopiť základné znaky každej skupiny liekov, t.j. ich mechanizmy účinku, hlavné indikácie na použitie, vedľajšie účinky atď. Dúfame, že táto prednáška pomôže lekárom a farmaceutom naplniť súčasnú úroveň vedomostí vyžadovanú v každodennej praxi.