Metóda na modelovanie aterosklerózy. Experimentálne modely Experimentálne modely aterosklerózy in vivo

Diferenciálny účinok extraktov z Pistacia vera na experimentálnu aterosklerózu na zvieracom modeli králika: experimentálna štúdia
Zdroj: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2917426/

Strava bohatá na lipidy a oxidačný stres sú rizikovými faktormi aterosklerózy. Účinky metanolových (ME) a ​​cyklohexánových (CHE) extraktov z orecha Pistacia vera, ktoré sú často súčasťou stredomorskej stravy, boli študované na králičom modeli aterosklerózy.

Dvadsaťštyri novozélandských bielych králikov dostávalo aterogénnu stravu (kontrolná skupina) doplnenú o ME (skupina ME) alebo CHE (skupina CHE) počas 3 mesiacov. Predtým boli vyvinuté GC-MS a UHPLC LC-DAD-ESI (-) - HRMS / MS na štúdium chemických profilov extraktov. Krvné vzorky pri východiskových a mesačných hladinách lipidového profilu, peroxidácie lipidov a funkcie pečene. Aorta, myokard a pečeň boli histologicky vyšetrené po 3 mesiacoch.

Skupiny ME a CHE mali signifikantne vyššie hladiny HDL a nie signifikantne nižšie priemerné % LDL cholesterolu oproti východiskovej hodnote ako kontrolná skupina. Triacylglycerol bol významne vyšší v skupine CHE oproti kontrole. Hodnoty MDA boli významne nižšie v skupine ME v porovnaní s kontrolou a CHE. ALT a AST boli signifikantne vyššie v CHE oproti kontrolnej skupine. γ-GT bol nižší v skupine ME v porovnaní s kontrolou. Hrúbka aortálnej intimy bola významne menšia v skupinách ME a CHE oproti kontrole; Aterosklerotické lézie v skupine ME boli významne menej rozsiahle v porovnaní s kontrolnými skupinami a CHE. Iba skupina CHE mala významnú tukovú infiltráciu pečene.

Počas krátkodobého podávania spolu s aterogénnou diétou boli oba extrakty P. vera prospešné pre HDL-, LDL-cholesterol a hrúbku intimy aorty. ME navyše prezentovalo antioxidačný účinok a významné zníženie povrchového poškodenia aorty. Tieto výsledky naznačujú, že zahrnutie P. vera do stravy, najmä jej ME, je potenciálne prospešné pri liečbe aterosklerózy.

Kardiovaskulárne ochorenia sú hlavnou príčinou úmrtí v industrializovanej časti sveta, pričom hlavným stavom je ateroskleróza. Vývoj a progresia aterosklerotických lézií sa intenzívne študoval. Uskutočnilo sa mnoho klinických štúdií o stravovacích protokoloch, ako napríklad Štúdia siedmich krajín stredomorskej stravy, ktorá zahŕňa olivový olej. Ďalšie klinické štúdie zahŕňali farmaceutické a chirurgické zákroky samotné alebo v kombinácii. Vedecké dôkazy o patogenéze a liečbe aterosklerózy v minulom storočí boli z veľkej časti odvodené z výskumných protokolov na zvieracích modeloch.

Králik, jeden z najdôležitejších modelov na štúdium aterosklerózy, rýchlo reaguje na stimuláciu aterosklerotických lézií diétou s vysokým obsahom cholesterolu. Niekoľko dietetických štúdií použilo tento model, vrátane zavedenia olivového alebo rybieho oleja a rôznych výťažkov zo semien alebo olejov získaných zo slnečnicových semien, arašidov, ľanových semien alebo lieskových orechov. Potravinársky orech, konzumovaný buď samostatne, alebo ako prísada do tradičných receptúr, je pistáciový orech zo stromu Pistacia vera, ktorý patrí do čeľade Anacardiaceae a je rozšírený v celom strednom a juhovýchodnom Grécku, ako aj v ďalších krajinách Stredomoria a Blízkeho východu. Pokiaľ je nám známe, o jeho biologicky aktívnom účinku na rozvoj aterosklerózy boli publikované len štúdie in vitro. Preto sme sa zamerali na skúmanie vplyvu podávania cyklohexánu (CHE) a metanolového extraktu (ME) P. vera na experimentálnom králičom modeli aterosklerózy na biochémiu séra, ako aj poškodenie aorty, srdca a pečene.

Tabuľka 1 ukazuje popisnú štatistiku meraných parametrov 3 skupín. Tabuľka 2 ukazuje priemerné percentuálne zmeny oproti východiskovej hodnote v telesnej biomase, lipidovom profile a antioxidačnom stave, ako aj celkové štatistické hodnoty. Tabuľka 3 ukazuje priemerné percentuálne zmeny od základnej aktivity pečeňových enzýmov a celkové štatistické hodnoty. Tabuľka 4 ukazuje morfometrickú analýzu králičej aorty.

Opisná štatistika: priemer ± štandardná odchýlka telesnej hmotnosti a biochemických parametrov

Priemerné hodnoty telesnej hmotnosti, lipidového profilu a oxidačného stresu počas sledovaného obdobia v troch skupinách: kontrola (aterogénna diéta), ME (aterogénna diéta plus ME), CHE (aterogénna diéta plus CHE).

Všetky premenné sú prezentované ako priemer ± SD

Percentuálna zmena telesnej hmotnosti, lipidového profilu a oxidačného stresu v králičom sére

Medián % zmien od základnej telesnej hmotnosti, lipidového profilu a hodnôt oxidačného stresu počas obdobia pozorovania v troch skupinách: kontrola (aterogénna diéta), ME (aterogénna diéta plus ME), CHE (aterogénna diéta plus CHE).

Výrazný rozdiel na str

b Výrazný rozdiel na str

Percento zmien aktivity pečeňových enzýmov v sére králikov

Stredná hodnota aktivity pečeňových enzýmov v % sa zmenila oproti východiskovej hodnote počas obdobia pozorovania v troch skupinách. Kontrolná skupina: aterogénna diéta, ME skupina: aterogénna diéta plus ME, CHE skupina: aterogénna diéta plus CHE

Výrazný rozdiel na str

b Výrazný rozdiel na str

Celkový Sig: Celkový význam, NS: Malý

Morfometrická analýza králičej aorty

Výsledky sú vyjadrené ako medián ± SD.

Kontrolná skupina: aterogénna diéta, ME skupina: aterogénna diéta plus ME, CHE skupina: aterogénna diéta plus CHE

Výrazný rozdiel na str

b Výrazný rozdiel na str

Konečná priemerná % zmena oproti východiskovej hodnote v kontrolnej skupine, skupine ME a CHE nebola štatisticky významná (tabuľka 2), hoci došlo k miernemu zvýšeniu absolútnych priemerov (tabuľka 1).

Hladiny lipidov v plazme všetkých troch skupín boli na začiatku podobné. Priemerná percentuálna zmena oproti základnej hodnote počas obdobia pozorovania opísaného nižšie je uvedená v tabuľke 2.

Priemerná % zmena oproti východiskovej hodnote do 1 mesiaca pre skupiny ME a CHE bola štatisticky významne vyššia v porovnaní s kontrolnou skupinou (p = 0,01, resp. 0,05).

Priemerná zmena v skupine CHE bola štatisticky významne vyššia v porovnaní s kontrolnými skupinami a ME v 1. a 2. mesiaci, kým skupiny ME a CHE mali štatisticky významne vyššie hodnoty ako kontrolná skupina v 2. mesiaci (p = 0,001 resp. p

Priemerná zmena v skupine CHE bola štatisticky významne nižšia v porovnaní s kontrolnou skupinou v 1. a 2. mesiaci (str

Medián % zmeny v skupine ME bol štatisticky významne vyšší v porovnaní s kontrolnou skupinou v 1. a 2. mesiaci (p

Priemerná zmena v skupine CHE bola štatisticky významne vyššia v porovnaní so skupinou ME po 2 a 3 mesiacoch (p = 0,032, resp. 0,012). Navyše priemerná zmena v skupine ME bola štatisticky významne odlišná v porovnaní s kontrolnou skupinou v 1. a 3. mesiaci (p

Medián % zmeny v skupine ME bola štatisticky významne vyššia v porovnaní s kontrolnou skupinou po 2 mesiacoch (p = 0,05), zatiaľ čo priemerná zmena v skupine CHE v porovnaní s kontrolnou skupinou bola počas štúdie významne vyššia (p

Medián % zmeny plazmatických hodnôt všetkých skupín nepreukázal štatisticky významný nárast počas celého experimentálneho obdobia, keď skupina CHE mala vyššie hodnoty až v 3. mesiaci (p = 0,007).

Priemerná zmena hodnôt skupiny ME podľa štatistík bola štatisticky významne nižšia v porovnaní s kontrolnými skupinami a CHE počas tretieho mesiaca experimentu (p

Makroskopické aortálne vzorky z kontrolnej a CHE skupiny vykazovali rozsiahle aterosklerotické plaky pokrývajúce takmer celú hornú časť vyrezanej aorty (tabuľka 4 a obr. 1A a 1E). Ukazovatele skupiny ME vykazovali menej rozsiahle lézie v porovnaní so skupinou A, ako aj v porovnaní so skupinou CHE (tabuľka 4 a obrázok 1C).

Makro- a mikroskopické snímky predstaviteľov aorty u králikov troch skupín. 1A, 1C, 1E sú reprezentatívne obrázky zo vzoriek drsnej aorty patriacich do kontrolnej skupiny, skupiny ME a skupiny CHE. Šípky označujú tvorbu aterosklerotického plátu. Ako je znázornené, kontrolná skupina vykazovala rozsiahle aterosklerotické plaky pokrývajúce takmer celú hornú časť vyrezanej aorty. Skupiny ME a CHE vykazovali menej rozsiahle lézie v porovnaní s kontrolnou skupinou a medzi týmito dvoma skupinami mala skupina ME najmenšiu tvorbu lézií. 1B, 1D, 1F - mikrofotografie s 1A, 1C, 1E, v tomto poradí (eozín - hematoxylín, počiatočné zväčšenie × 100). Obrázok 1B (kontrolná skupina) ukazuje zraniteľný plak s mnohými penovými bunkami, zápalom a pozoruhodným zhrubnutím intimy. Obrázok 1D (skupina ME) ukazuje léziu opísanú vyššie, ale menej rozsiahlu (intima/stredná hrúbka je menšia ako na obrázku 1B. 1B. Šípky označujú šírku endotelu.

Histopatologické nálezy z kontrolnej skupiny a skupiny CHE ukázali zraniteľné plaky s mnohými penovými bunkami, zápalom a pozoruhodným zhrubnutím intimy (obrázky 1B a 1F). V skupine ME sa našli lézie opísané vyššie, ale menej rozsiahle (obrázok 1D).

Histologické vyšetrenie srdca neodhalilo významné zmeny medzi skupinami.

Histologické vyšetrenie pečene neodhalilo významné zmeny medzi skupinovou kontrolou a ME. Skupina CHE vykazovala štatisticky významnú tukovú infiltráciu v porovnaní s kontrolnou skupinou.

Negenetický hyperlipidemický králik je zvierací model široko používaný vo výskume aterosklerózy. Na experimentálne vytvorenie experimentu boli použité rôzne hladiny cholesterolu v potrave (0,2-1,3 %) a bolo študované súčasné podávanie iných potenciálne prospešných látok v intervaloch od 8 do 14 týždňov.

Rastliny pistácie sú stromy alebo kríky patriace Grécku a iným krajinám Stredomoria a Stredného východu. Ukázalo sa, že medzi nimi sa zistilo, že P. lentiscus má antioxidačné, antibakteriálne, pečeňovo-ochranné a cytostatické účinky a zabraňuje oxidácii LDL cholesterolu in vitro. Ukázalo sa, že P. terebinthus má priaznivé účinky na maternicové bradavice a kožné melanómy. O P. vera sa robilo málo výskumov. Uvádza sa, že má protiplesňové účinky na rastliny. P. vera ME obsahuje malé množstvá katechínu, polyfenolového flavonoidu, ktorý v štúdiách in vitro preukázal potenciálne vyššiu antioxidačnú aktivitu ako kyselina askorbová a α-tokoferol. Ukázalo sa tiež, že katechín a jeho produkty znižujú riziko kardiovaskulárnych ochorení znížením hladín cholesterolu v sére, znížením agregácie krvných doštičiek a znížením krvného tlaku.

V tejto štúdii sme skúmali účinok spoločného podávania P. vera na progresiu cholesterolom indukovanej aterosklerózy na zvieracom modeli králika počas 12 týždňov. Rozhodli sme sa manažovať P. vera ME alebo CHE oddelene v rôznych skupinách zvierat, aby sme dokázali identifikovať, ktoré zložky by boli zodpovedné za potenciálne odlišné výsledky. Analýza GC-MS CHE ukázala, že jeho hlavnými zlúčeninami sú b-sitosterol, skvalén, stigmasterol, olejová a palmitová kyselina. Klinické štúdie už preukázali ochranné účinky takýchto rastlinných sterolov pri rozvoji ischemickej choroby srdca. Okrem toho analýza ME pomocou metód LC-HRMS/MS odhalila prítomnosť metylesteru kyseliny galovej, kyseliny protokatechovej a kyseliny galovej. Ukázalo sa, že kyselina galová má antiaterogénnu aktivitu.

Výsledky predkladanej štúdie ukazujú priaznivý vplyv súčasného podávania P. vera ME a CHE v cholesterolom obohatenej diéte na zmeny HDL-C. ME tiež vykazovala menšiu zmenu v MDA oproti východiskovej hodnote, čím vykazovala mierny antioxidačný účinok. Priaznivý účinok LDL-C nebol štatisticky významný. Ostatné skúmané biochemické parametre (TC, TAG a pečeňové enzýmy) nepreukázali priaznivý účinok ME, keď sa analyzovali pomocou priemerných priemerov. Analýza našich údajov pomocou priemerných absolútnych hodnôt ukázala štatisticky významný ochranný účinok ME podľa vyššie uvedených parametrov (tabuľka 1). Vzhľadom na chýbajúce normálne rozloženie hodnôt sa však považovalo za nevyhnutné použitie neparametrickej analýzy (Kruskal-Wallisov a Mann-Whitneyov test).

Niekoľko rastlinných látok má priaznivý vplyv na biochémiu krvi u králikov kŕmených cholesterolom. Polyfenol z olivového oleja známy ako hydroxytyrozol zvýšil hladiny HDL-C u králikov s aterogénnou diétou. Sezamová múka mala priaznivé účinky na hladinu celkového cholesterolu a triglyceridov u králikov kŕmených cholesterolom. Okrem toho, seciolalariciresín diglukozid (SDG), rastlinný lignín izolovaný z ľanového semena pri podávaní králikom počas 8 týždňov, viedol k zníženiu LDL-C a zvýšeniu HDL-C a antioxidačnej aktivity, podobne ako v našej štúdii. Okrem toho ďalšia štúdia na králikoch s použitím etanolového extraktu z Hypericum Boiss var lysimachioides (Guttifera) ukázala štatisticky významný pokles hladín MDA, ako aj zvýšenie hladín HDL-C, čo je v súlade s našou štúdiou.

Naše výsledky ukázali, že liečba oboma extraktmi P. vera spôsobila mierny nárast hodnôt TC, aj keď sa to veľmi nelíšilo od kontrolnej skupiny v druhom a treťom mesiaci podávania.

Priemerné hodnoty HDL-C v kontrolnej skupine boli na konci experimentu nižšie, pričom súbežné podávanie extraktov P. vera (skupiny ME a CHE) tento pokles výrazne inhibovalo. Vzhľadom na to, že nízke hladiny HDL-C sú spojené s vyšším rizikom kardiovaskulárnych ochorení, je potvrdené, že zvýšenie hladín HDL-C povedie k ochrannému účinku proti ateroskleróze po dlhodobom podávaní extraktov P. vera.

Naše výsledky ukázali významné rozdiely v hladinách MDA v plazme medzi ME a kontrolnými skupinami. To naznačuje, že priaznivý účinok P. vera ME na určité lipidy a aortu môže byť spôsobený miernym antioxidačným účinkom.

V našej štúdii sa hladiny pečeňových enzýmov zvýšili a dosiahli maximálne hladiny v treťom mesiaci vo všetkých skupinách. Konkrétne, zmeny ALT a AST boli zvýšené v skupinách ME a CHE v porovnaní s kontrolami. Klinické aj experimentálne štúdie ukázali, že zvýšená hladina ALT a AST môže predpovedať rozvoj aterosklerózy. Okrem toho boli zmeny γGT v skupine ME štatisticky významne nižšie v treťom mesiaci v porovnaní s kontrolnou skupinou. To poukazuje na pozitívny vplyv P. vera ME a CHE na funkciu žlčového systému u aterosklerotických zvierat. V štúdii Hakimoglu et al. hydropická a lipidová degenerácia pečene bola znížená v etanolovom extrakte z Hypericum lysimachoids v porovnaní s králikmi kŕmenými iba diétou obohatenou o cholesterol. Toto zistenie je podobné ako u nás, kde histológia pečene, ktorú som kŕmil králiky, bola ovplyvnená menej ako v skupine s cholesterolom (kontrolná skupina), hoci tam nebol žiadny štatisticky významný rozdiel. Najmä králiky v kontrolnej skupine trpeli poškodením pečene charakterizovaným steatózou a fibrózou, čo bolo ešte zreteľnejšie v skupine CHE.

Makroskopická tvorba plakov v skupine ME bola menej rozsiahla ako v kontrolnej skupine a skupine CHE. Podobne ako v našej štúdii, aj iní vedci poznamenali, že napriek zvýšeniu sérového cholesterolu po podaní extraktu môžu výsledky patológie vzoriek aorty ukázať zlepšenie aterosklerózy. Aguilera a kol. zistili, že panenský olivový olej a rybí olej znižujú vývoj aterosklerotických plátov. Ukázalo sa tiež, že orechový olej znižuje aterosklerotické lézie v aorte cholesterolu kŕmeného králikmi. Okrem toho účinok podávania zeleného čaju obsahujúceho zlúčeniny odvodené od epikatechínu u králikov mal priaznivý účinok na arteriálne aterosklerotické plaky. To je v súlade s našimi výsledkami, ktoré poukazujú na významný pozitívny vplyv P. vera ME na rozvoj aterosklerózy aorty. Najmä skupina ME preukázala významnú inhibíciu aterosklerotických plakov v ich hrúbke aj šírke v lúmene aorty. Môže to byť spôsobené hlavnými zložkami ME, ako je kyselina galová a katechín, ktoré môžu byť zodpovedné za tento inhibičný proces, ako už bolo uvedené. Na druhej strane skupina CHE vykazovala miernejšiu inhibíciu aterosklerózy v porovnaní s hrúbkou plaku, čo možno vysvetliť prítomnosťou kyseliny b-sitosterolu, skvalénu, stigmasterolu, olejovej a palmitovej kyseliny, ako je ukázané podobne.

Skupina CHE vykazovala najnižšiu antioxidačnú aktivitu. Tento účinok môže súvisieť s rozsiahlymi, ale menej zložitými aterosklerotickými léziami pozorovanými vo vzorkách CHE aorty v porovnaní s kontrolnými a ME skupinami. Avšak skupina ME vykazovala oveľa silnejšiu antioxidačnú aktivitu. Štatisticky významný pozorovaný antioxidačný účinok ME, evidentný z MDA analýzy, tiež významne znížil ukladanie aortálneho plaku. Na druhej strane CHE neovplyvnila stupeň aterosklerotických lézií. Tieto údaje možno pripísať antioxidačným zložkám P. vera ME.

Na záver, pri krátkodobom podávaní spolu s aterogénnou diétou boli oba extrakty P. vera prospešné pre HDL-, LDL-cholesterol a hrúbku aortálnej intimy. ME navyše prezentovalo antioxidačný účinok a významné zníženie povrchového poškodenia aorty. Tieto výsledky naznačujú, že zahrnutie P. vera do stravy, najmä jej ME, má potenciál byť prospešné pri liečbe aterosklerózy. P. vera ME a CHE sa podľa našich vedomostí používajú in vivo po prvýkrát pri štúdiu aterosklerózy a vykazujú sľubný účinok na proces inhibície. Je potrebný ďalší výskum, než bude možné P. vera klinicky odporučiť na začlenenie do stravy pri liečbe aterosklerózy.

Dvadsaťštyri bežných novozélandských bielych králikov (2,7 ± 0,2 kg) zakúpených od gréckeho certifikovaného komerčného chovateľa bolo náhodne rozdelených do troch rovnakých skupín (kontrola, ME a CHE) a chovaní oddelene v klietkach z nehrdzavejúcej ocele s voľným prístupom k potrave a vode z vodovodu. . Podmienky pobytu zvierat boli 20 ± 2 °C, relatívna vlhkosť 60 ± 5 %, o 12:12 cyklus svetlo:tma. Zvieratá boli ošetrené v súlade s normami stanovenými európskou smernicou 86/609/EHS. Miestne veterinárne orgány a etická komisia pre zvieratá schválili (číslo licencie K / 950) štúdiu. Kontrolná skupina dostávala štandardnú vyváženú stravu s králikom (chemické zloženie: celkové mastné kyseliny 2,5%, celulóza 18,5%, celkové bielkoviny 16,5%, voda 13%, popol 11%, vápnik 1,4%, lyzín - 0,6%, metionín-cystín - 0,55 %, fosfor 0,55 %, sodík 0,25 %), obohatené o 1 % cholesterolu (Dolder, Švajčiarsko) (aterogénna diéta), skupina ME dostávala aterogénnu diétu plus ME (1 % hmotnosti) a aterogénnu diétu skupiny CHE plus CHE (5 % hmotnosti) Diéty boli čerstvo pripravené každé tri dni pred konzumáciou.

Množstvo pistáciových orieškov v prášku na 15 kg, zozbieraných na gréckom ostrove Aegina, bolo extrahované pri teplote miestnosti, najskôr odtučnené cyklohexánom, čím sa po odparení rozpúšťadla získalo 7,5 kg zeleného olejovitého zvyšku. CHE bol zmydelnený konvenčným postupom, výsledkom čoho boli esterifikované mastné kyseliny. Metylestery mastných kyselín a nevyzrážaný zvyšok sa analyzovali pomocou GC a GC / MS, aby sa získali b-sitosterol, skvalén, stigmasterol, kyselina olejová a kyselina palmitová ako zásadité zlúčeniny (pozri doplnkový súbor 1)
,

Po získaní práškových pistáciových orieškov cyklohexánom sa rastlinný materiál ďalej extrahoval dichlórmetánom, čím sa získalo 1,5 kg zeleného olejovitého extraktu, a potom metanolom, čím sa po odparení rozpúšťadla získal zvyšok 500 g. Množstvo 400 g zvyšku sa podrobilo živici XAD-4, aby sa odstránil cukor, aby sa získal ME obohatený o fenolové zlúčeniny. Metóda LC-DAD-ESI (-) - HRMS / MS bola vyvinutá na opísanie chemického profilu obohateného extraktu. Analýza sa uskutočnila pomocou zariadenia UHPLC pripojeného k vysokovýkonnému hybridnému spektrometru LTQ-Orbitrap Discovery. Fenolové zlúčeniny, metylhalogenid (1), kyselina galová (2), kyselina protokatechínová (3), katechín (4) a epikatechín (5) sa použili ako štandardy na analýzu a ich identifikácia sa uskutočnila porovnaním retenčného času, UV- Vis a vysoko presné hmotnostné spektrá píkov vo vzorke so vzorkami štandardných zlúčenín.

Priložený doplnkový súbor 1 poskytuje podrobnú analýzu zložiek extraktov.

Všetky zvieratá hladovali 12 hodín pred odberom krvi. Boli mierne sedatívne (ketamín hydrochlorid 12 mg/kg, xylazín 2,5 mg/kg telesnej hmotnosti, im), aby sa vyhli stresu. Vzorky krvi z ušnej tepny zvierat sa umiestnili do Wassermanových skúmaviek obsahujúcich antikoagulant na 0, 1, 2 a 3 mesiace experimentálneho postupu. Plazma bola oddelená centrifugáciou pri 3500 otáčkach za minútu počas 15 minút. Celkový cholesterol v plazme (TC), cholesterol lipoproteínov s vysokou hustotou (HDL-C), cholesterol lipoproteínov s nízkou hustotou (LDL-C), koncentrácia triacylglycerolu (TAG), sérová alanínaminotransferáza (ALT), aspartátaminotransferáza (AST) a gama sérum Aktivita glutamyltransferázy (yGT) sa merala pomocou komerčných súprav na testovanie enzýmov podľa pokynov výrobcu (Biomerieux, Lyon, Francúzsko) s použitím automatického analyzátora (typ 7170A, Hitachi, Tokio, Japonsko). MDA sa vypočítal manuálnou metódou reaktívnej látky s kyselinou tiobarbiturovou (TBARS), ako ju opísal Yagi. Na konci experimentálnej štúdie a po poslednom odbere krvi počas sedácie boli králiky usmrtené tiopentalom sodným (30 mg/kg intravenózne).

Aorta bola odstránená z aortálnej artérie do iliakálnej bifurkácie. Tkanivo priliehajúce k adventícii sa odstránilo a aorta sa pozdĺžne prerezala pozdĺž strednej ventrálnej steny. Potom sa aorta fixovala v 10% fyziologickom roztoku pufrovanom fosfátom formalínu. Luminálny povrch každej vzorky aorty sa odstránil a obraz sa elektronicky uložil. Rezy zo všetkých vzoriek boli získané z troch štandardných miest (okamžite distálne od vetvy ľavej podkľúčovej artérie, v siedmej interkostálnej artérii a bezprostredne za celiakiou). Tieto vzorky boli vložené do parafínových blokov a zafarbené hematoxylínom-eozínom. Histopatologické aterosklerotické lézie aorty boli klasifikované podľa Stariho klasifikácie a hrúbka a povrch aterosklerotických lézií v stene aorty boli semikvantizované pomocou automatizovaného systému analýzy obrazu. Stručne povedané, hodnotené parametre sú: zhrubnutie intimy, akumulácia penových buniek, mononukleárne infiltráty, lipidové jadro a tvorba vláknitého uzáveru. Digitálne snímky boli získané z diapozitívov pomocou fotomikroskopu (Nikon Eclipse 80i, Nikon Corp, Tokio, Japonsko) vybaveného digitálnym fotoaparátom (Nikon DS - 2 MW). Všetky obrázky boli prenesené do PC s príslušným softvérom (Image ProPlus v. 5.1, Media Cybernetics, MD, USA).

Srdce a pečeň boli odvážené a fixované v 10% fosfátom pufrovanom formalíne. Boli odobraté štandardné rezy, vložené do parafínových blokov pre hematoxylín-eozín a vzorky myokardu boli dodatočne zafarbené Massonovou trichrómnou škvrnou.

Poškodenie myokardu bolo hodnotené od 0 do 3 vo vzťahu k intersticiálnemu edému, fibróze a infiltrátom penových buniek. Poškodenie pečene bolo klasifikované do štyroch stupňov, ako už bolo opísané, pre architektonické zmeny, tukovú infiltráciu a fibrózu.

Údaje boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (SD), ako aj stredné hodnoty v dôsledku abnormality. Na analýzu normality parametrov sa použil Kolmogorov-Smirnovov test.

Na označenie trendu v prvých 3 mesiacoch liečby sa vypočítala priemerná percentuálna zmena premenných po 1, 2 a 3 mesiacoch. Porovnanie percentuálnej zmeny od základnej hodnoty pre premenné počas obdobia pozorovania a histopatologické premenné medzi tromi skupinami sa analyzovalo pomocou Kruskal-Wallisovho testu a Mann-Whitneyho testu (párové porovnania).

Všetky testy boli obojstranné, štatistická významnosť bola stanovená u p

P.vera: Pistacia vera; ME: metanolový extrakt z Pistacia vera; CHE: Pistacia vera cyklohexánový extrakt; GC: plynová chromatografia; MS: hmotnostná spektrometria; UHPLC: ultravysoká kvapalinová chromatografia; LC: kvapalinová chromatografia; DAD: detektor diódového poľa; ESI: elektronická sprejová ionizácia; HRMS: hmotnostná spektrometria s vysokým rozlíšením; TC: celkový cholesterol; LDL-C: lipoproteínový cholesterol s nízkou hustotou; HDL-C: lipoproteínový cholesterol s vysokou hustotou; TAG: triacylglycerol: MDA: aldehyd s nízkym obsahom; ALT: alanínaminotransferáza; AST: aspartátaminotransferáza; y-GT: gama glutamyl transferáza; TBARS: látky reaktívne s kyselinou tiobarbiturovou; SD: štandardná odchýlka; SPSS: Štatistický balík pre sociálne vedy; SDG: seciolalaricircinol diglukozid.

CM vykonala pilotnú štúdiu zahŕňajúcu prehľad zvierat, prípravu stravy, odber vzoriek krvi, eutanáziu a vypracovanie rukopisu. KG a MH pripravili cyklohexán a metanolový extrakt a zodpovedajúce diéty a analyzovali ich. GA a EP vykonali a koordinovali všetky štádiá patológie vzorky tkaniva. TK a DI sa podieľali na odstránení tkaniva a príprave rukopisu. AP a AC prispeli k návrhu štúdie. Predseda vlády zrealizoval projekt na výrobu extraktov Pistatsi. NT prispelo k príprave diét a rukopisov. LAS a ID navrhli dizajn štúdie, koordinovali experimenty a pripravili rukopis. Všetci autori prečítali a schválili konečný rukopis.

Spôsoby prípravy cyklohexánových a metanolových extraktov. Podrobné informácie o metodike prípravy cyklohexánových a metanolových extraktov vrátane 2 obrázkov.

Kliknutím sem zobrazíte súbor

Dr. K. Marino je vďačný gréckemu ministerstvu pre rozvoj vidieka a výživy za podporu a študijné voľno a profesorovi D. N. Perreovi za cenné rady a podporu v štúdii. Dr. Dantas uznáva osobitný účet pre výskumné granty (č. 70/4/2591) Národnej a Kapodistrijskej univerzity v Aténach za finančnú podporu. Autori oceňujú bioštatistiku Dr. A. Galanosa za odbornú štatistickú analýzu štúdie a oceňujú odbornú pomoc K. Perrea, K. Papadaki, E. Dusi, G. Pantelis, P. Rapos a Z. Mertiri počas experimenty.

V roku 1912 N. N. Anichkov a S. S. Khalatov navrhli metódu na modelovanie aterosklerózy u králikov zavedením cholesterolu dovnútra (cez sondu alebo zmiešaním s bežným jedlom). Vyjadrené aterosklerotické zmeny sa rozvinuli po niekoľkých mesiacoch pri dennom užívaní 0,5 - 0,1 g cholesterolu na 1 kg telesnej hmotnosti.

Spravidla boli sprevádzané zvýšením hladiny cholesterolu v krvnom sére (3 - 5-násobok oproti východiskovej hladine), čo bolo základom pre predpoklad vedúcej patogenetickej úlohy pri rozvoji aterosklerózy a hypercholesterolémie. . Tento model je ľahko reprodukovateľný nielen u králikov, ale aj u sliepok, holubov, opíc a ošípaných.

U psov a potkanov odolných voči cholesterolu sa ateroskleróza reprodukuje kombinovaným účinkom cholesterolu a metyltiouracilu, ktorý potláča funkciu štítnej žľazy. Táto kombinácia dvoch faktorov (exogénneho a endogénneho) vedie k predĺženej a závažnej hypercholesterolémii (nad 26 mmol/l – 100 mg %). K rozvoju aterosklerózy prispieva aj pridávanie masla a žlčových solí do jedla.

U kurčiat (kohútov) sa po dlhšom (4 - 5 mesiacoch) vystavení dietylstilbestrolu vyvinie experimentálna ateroskleróza aorty. V tomto prípade sa aterosklerotické zmeny objavujú na pozadí endogénnej hypercholesterolémie, ktorá je výsledkom porušenia hormonálnej regulácie metabolizmu.

Viac k téme Experimentálne modely .:

1. 4.2. Hlavné ustanovenia kyslíkovo-peroxidového modelu "spontánnej" malignity
2. Desympatizácia srdca v modeloch neskorého klinického štádia Parkinsonovej choroby
3. Experimentálne modely. Akútna (difúzna) glomerulonefritída.
4. Model neuropatickej bolesti so zavedením nádorových buniek do kostných štruktúr
5. Kapitola 3. EXPERIMENTÁLNY ODHAD HLAVNÝCH VZŤAHOV PATOGENÉZY CHEMICKY VYŽAROVANÝCH ÚSTNYCH MUKOZITOV PRI ICH MODELOVANÍ NA MALÝCH LABORATÓRNYCH ZVIERATÁCH

1

V pokusoch na králikoch (n = 16) bol vyvinutý model hyperlipidémie spôsobenej intravenóznym podávaním 10% emulzie Lipofundinu v dávke 0,5 ml/kg počas 30 dní. Experimentálny model sa vyznačoval zvýšením hladiny triglyceridov a VLDL 1,4-krát, LDL 1,2-krát, znížením obsahu HDL 1,4-krát v krvi pokusných zvierat. Súčasne so zmenami v spektre krvných lipidov u pokusných králikov sa zistilo zvýšenie hladiny laktátu 2,1-krát a C-reaktívneho proteínu 13,4-krát.

hyperlipidémia

experimentálny model

1. Kalinkin M.N., Volkov V.S., Zavarin V.V. Ateroskleróza: patofyziológia, liečba, primárna prevencia. - Tver: RITs TGMA, 2009 .-- 215 s.: chorý.

2. Kosarev V.V., Babanov S.A. Vedľajšie účinky liekovej terapie: hodnotenie a predpoveď // Medicína núdzových stavov. - 2010. - č. 6 [Elektronický zdroj]. URL: http://urgent.mif-ua.com/archive/issue-15105/article-15118/ (dátum prístupu: 8.07.2011).

3. Kukharchuk V.V. Liečba dyslipidémie ako dôležitý faktor v prevencii aterosklerózy a jej komplikácií // Systémová hypertenzia. - 2007. - č. 2. - S. 35–43.

4. Nechaeva G.I., Tereshchenko Yu.V. Prevencia porúch lipidov // Ošetrujúci lekár. - 2010. - č. 2 [Elektronický zdroj]. URL: http://www.lvrach.ru/2010/07/15081579/ (dátum prístupu: 8.07.2011).

Úvod

Kardiovaskulárna patológia (ischemická choroba srdca, cerebrovaskulárne poruchy, okluzívne ochorenie periférnych artérií) vyniesla Rusko na prvé miesta medzi priemyselne vyspelými krajinami sveta z hľadiska výskytu chorobnosti, úmrtnosti a invalidity v produktívnom veku. V Rusku zomiera ročne viac ako 1 milión ľudí na kardiovaskulárne ochorenia, polovica z nich na ischemickú chorobu srdca a ďalších 40 % na cerebrovaskulárne ochorenia. Primárna a sekundárna prevencia kardiovaskulárnych ochorení je podľa odporúčaní VNOK 2009 založená na opatreniach zameraných na nápravu hlavných rizikových faktorov: nízka fyzická aktivita, fajčenie, vysoký krvný tlak, obezita a poruchy lipidov.

Poruchy metabolizmu lipidov sú jedným z najvýznamnejších rizikových faktorov rozvoja aterosklerózy. Početné klinické a epidemiologické vedecké štúdie presvedčivo preukázali, že nielen hypercholesterolémia, ale každá hyperlipidémia môže prispieť k vzniku a ďalšiemu rozvoju aterosklerózy. V súčasnosti existuje niekoľko typov hyperlipidémie. Takže napríklad v súlade so všeobecne akceptovanou systemizáciou hyperlipidémie sú rozdelené do 6 typov vrátane pridelenia podtypov IIa a IIb. Rôzne typy hyperlipidémií majú rôzny aterogénny potenciál, najväčší aterogénny účinok majú hyperlipidémie, charakterizované zvýšením hladiny celkového a voľného cholesterolu.

Vzhľadom na to, že moderné metódy medikamentóznej liečby by sa mali vyvíjať s prihliadnutím na povahu dyslipidémie, je potrebné vytvárať nové modely, ktoré čo najlepšie zodpovedajú rôznym variantom porúch krvného lipidového spektra.

Pri hodnotení účinnosti nových liekov znižujúcich lipidy sa používajú rôzne experimentálne modely hyperlipidémie. Medzi nimi sú cholesterolové, genetické, peroxidové modely aterosklerózy; modelka A.N. Klimová a spol. (1966, 1969) na základe získania aterosklerotických plakov na aorte králikov parenterálnym podaním homológneho séra zo zvierat s experimentálnou hypercholesterolémiou atď. Tieto modely spolu s množstvom výhod majú aj značné nevýhody spojené s prácnosťou a dĺžkou reprodukcie modelu (model cholesterolu sa reprodukuje do 3-4 mesiacov). Nevýhodou experimentálnych modelov na malých laboratórnych zvieratách (potkany, morčatá) je nemožnosť odobrať dostatočné množstvo krvi na dlhodobé vykonávanie rozsiahlych biochemických štúdií bez poškodenia pokusných zvierat. V tomto ohľade sú králiky sľubnejšie na štúdium priebehu experimentálnej aterosklerózy. Lipidové a lipoproteínové krvné spektrá pokusných zvierat rôznych druhov sa v tomto smere líšia, pre objektívnejšie posúdenie hypolipidemického účinku nových látok sa odporúča vykonať experimenty na zvieratách 2-3 druhov.

Cieľom tejto štúdie bolo vyvinúť model aterogénnej hyperlipidémie u králikov.

Materiály a metódy

Pokusy sa uskutočnili na 16 krížených králikoch oboch pohlaví s hmotnosťou 3,8 ± 0,1 kg. Hyperlipidémia bola spôsobená intravenóznym podaním 10% emulzie Lipofundinu (zloženie: sójový olej - 50 g, triglyceridy so stredne dlhým reťazcom - 50 g, fosfatidy vaječného žĺtka - 12 g, glycerol - 25 g, voda na injekciu - 1 000 ml) dávka 0,5 ml / kg denne počas 30 dní.

Vývoj hyperlipidémie bol sledovaný obsahom lipoproteínov v krvnej plazme pokusných zvierat. Biochemické štúdie boli vykonávané týždenne počas celého experimentu, krv bola odoberaná z marginálnej ušnej žily v objeme 3-4 ml.

Lipidové spektrum krvného séra (celkový cholesterol, triglyceridy, HDL) sa skúmalo pomocou činidiel vyrobených spoločnosťou Biocon® (Nemecko). Výpočtovou metódou boli stanovené koncentrácie LDL, VLDL a koeficient aterogenity.

LDL cholesterol

VLDL cholesterol

Aterogénny koeficient sa vypočíta podľa vzorca:

Hladina laktátu bola stanovená enzymatickou metódou s použitím činidiel vyrobených spoločnosťou Biocon® (Nemecko).

Biochemické štúdie (analýza lipidového spektra a hladiny laktátu) sa uskutočnili na automatickom biochemickom analyzátore Flexor E (Vital Scientific, Holandsko).

Koncentrácia C-reaktívneho proteínu bola stanovená enzýmovým imunotestom s použitím testovacích systémov vyrábaných OOO Hema (Rusko) s analytickou citlivosťou 0,05 mg/l. Výsledky enzýmového imunotestu sa vzali do úvahy s použitím multidetektora Zenyth 1100 pre mikrodoštičky (Anthos, Rakúsko).

Lipofundin bol vybraný na modelovanie hyperlipidémie u králikov na základe dostupných informácií, že tukové emulzie na parenterálnu výživu môžu spôsobiť zvýšenie krvných lipidov.

Výsledky výskumu boli spracované štatisticky pomocou štandardného softvérového balíka MS Excel 2007. Veľkosť vzorky pre porovnávaciu štúdiu na 5 % hladine významnosti sa vypočítala pomocou softvéru COMPARE 2 Verzia 2.57 WinPEPI 11.0.

Výsledky a diskusia

Výsledkom štúdie bolo zistenie, že po intravenóznom podávaní 10% emulzie Lipofundinu (0,5 ml / kg) počas 30 dní sa u pokusných králikov vyvinula ťažká dyslipoproteinémia, ktorá bola charakterizovaná zvýšením hladiny triglyceridov, LDL a VLDL a zníženie HDL. Počas celého obdobia pozorovania neboli zistené žiadne významné zmeny v obsahu celkového cholesterolu v krvi králikov liečených lipofundínom (tabuľka 1).

Tabuľka 1 - Zmeny v obsahu celkového cholesterolu, triglyceridov a lipoproteínov v krvnej plazme králikov po intravenóznom podaní Lipofundinu (0,5 ml / kg)

	Skúmané ukazovatele
	Celkový cholesterol
	triglyceridy

Zistilo sa, že hladina triglyceridov v krvi králikov po zavedení Lipofundinu postupne stúpala a po 4 týždňoch pozorovania bola v priemere 1,4-krát (p<0,05) выше, чем у интактных животных. Содержание ЛПНП и ЛПОНП в крови подопытных животных возросло на 4-й неделе исследования соответственно в 1,2 (p<0,05) и 1,4 раза (p<0,05) по сравнению с исходным уровнем. Обращает на себя внимание тот факт, что уровень ЛПВП в крови подопытных кроликов снизился уже на 2-й неделе эксперимента и через 4 недели исследования был в среднем в 1,4 раза (p<0,05) ниже, чем у интактных животных.

Treba poznamenať, že výrazná dyslipoproteinémia, ktorá sa vyvinula pod vplyvom Lipofundinu, mala aterogénny charakter, o čom svedčí zvýšenie aterogénneho koeficientu u pokusných zvierat s experimentálnou hyperlipidémiou v priemere 1,8-násobne (p<0,05) по сравнению с интактными животными (таблица 2).

Tabuľka 2 - Zmeny hodnoty aterogénneho koeficientu, obsahu laktátu a C-reaktívneho proteínu v krvnej plazme králikov po intravenóznom podaní Lipofundinu (0,5 ml / kg)

	Vyšetrené indikátor
	Laktát, E/L
	C-reaktívny proteín, mg/l

* - rozdiely oproti kontrole (pred začiatkom podávania Lipofundinu) sú významné.

Súčasne so zmenami v lipidovom spektre krvi u pokusných králikov užívajúcich Lipofundin sa zistilo 2,1-násobné zvýšenie hladiny laktátu a C-reaktívneho proteínu (p<0,05) и в 13,4 раза (p<0,05) по сравнению с их содержанием у интактных животных. Возрастание уровня молочной кислоты в крови кроликов с экспериментальной гиперлипидемией, вероятно, свидетельствует о развитии тканевой гипоксии. С-реактивный белок, получивший свое название из-за способности вступать в реакцию преципитации с С-полисахаридом пневмококков, стимулирует иммунные реакции, в т. ч. фагоцитоз, участвует во взаимодействии Т- и В-лимфоцитов, активирует классическую систему комплемента, является высокочувствительным и быстрым индикатором повреждения тканей при воспалении, некрозе, травме. Увеличение его содержания при экспериментальной гиперлипидемии, возможно, является отражением повреждения сосудистой стенки у подопытных животных.

Vyvinuli sme teda experimentálny model aterogénnej hyperlipidémie u králikov. Tento model hyperlipidémie bol charakterizovaný zvýšenými hladinami triglyceridov, LDL a VLDL. Je známe, že najväčší aterogénny účinok majú hyperlipidémie patriace do podtypov IIa, IIb a III typu. V súlade s fenotypovou systematizáciou hyperlipidémií (D. Fredrekson, 1967) vyvinutý model zodpovedal typu IIb.

Tento model hyperlipidémie u králikov patrí k najaterogénnejším modelom, čo potvrdzuje aj zvýšenie aterogénneho koeficientu.

Vyvinutý model je vhodný na hľadanie účinných antiaterogénnych činidiel, keďže sa vyznačuje jednoduchosťou, spoľahlivosťou a rýchlosťou implementácie. Závažná hyperlipidémia sa vyvinie už 1 mesiac po začiatku podávania Lipofundinu, zatiaľ čo iné experimentálne modely hyperlipidémie u králikov spojené s použitím záťaže cholesterolom vyžadujú modelovanie 3-4 mesiace.

závery

1. Pri intravenóznom podávaní Lipofundinu (0,5 ml / kg) počas 30 dní sa u experimentálnych králikov vyvinuli výrazné zmeny v lipidovom spektre krvi, ktoré boli charakterizované zvýšením hladiny triglyceridov a VLDL 1,4-krát (p<0,05), ЛПНП в 1,2 раза (p<0,05), снижением содержания ЛПВП в 1,4 раза (p<0,05). Коэффициент атерогенности увеличился в среднем в 1,8 раза (p<0,05).
2. Vyvinutý model hyperlipidémie u králikov je vysoko aterogénny, podľa fenotypovej systematizácie hyperlipidémií zodpovedá typu IIb.

Recenzenti:

• Mitrochin N.M., doktor biologických vied, profesor, zástupca. Riaditeľ celoruského vedeckého centra OJSC pre bezpečnosť biologicky aktívnych látok, Moskovský región, Staraya Kupavna.
• Slyusar NN, doktor lekárskych vied, profesor, riaditeľ IP "Laboratórium profesora NN Slyusara", Tver.

Dielo prijaté 22. augusta 2011

Bibliografický odkaz

Demidova M.A., Volkova O.V., Egorova E.N., Savchuk I.A. MODELOVANIE ATERÓGÉNNEJ HYPERLIPIDÉMIE U KRÁLIKOV // Moderné problémy vedy a výchovy. - 2011. - č. 3 .;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=4689 (dátum prístupu: 02/01/2020). Dávame do pozornosti časopisy vydávané "Akadémiou prírodných vied"

Držitelia patentu RU 2500041:

Vynález sa týka experimentálnej medicíny, patofyziológie a týka sa modelovania aterosklerózy, ktoré možno použiť na štúdium diagnózy, prevencie a liečby tohto ochorenia. Pre tieto laboratórne zvieratá - potkany sa do krmiva pridáva cholesterolový prášok v množstve 1%, margarín 10%, mercazolil 10 mg / kg a vitamín D - 2,5 ME na kg telesnej hmotnosti. Okrem toho sa zvieratá podrobia operácii pozostávajúcej z podviazania obličkového pediklu ľavej obličky neabsorbovateľným šijacím materiálom a zošitia horného pólu pravej obličky, pričom zostanú 2/3 orgánu. Metóda je ľahko realizovateľná, nespôsobuje smrť zvierat, je primeraným modelom poškodenia endotelu a rozvoja aterosklerotického procesu. 12 dwg, 4 tbl, 1 ex

Vynález sa týka experimentálnej medicíny, patofyziológie, môže byť použitý na diagnostiku, prevenciu a liečbu aterosklerotického procesu.

Ateroskleróza a jej komplikácie naďalej vedú v štruktúre chorobnosti a úmrtnosti v západných krajinách a Rusku. Úmrtnosť na kardiovaskulárne patológie vo svete je dvakrát väčšia ako na onkologické ochorenia a 10-krát vyššia ako na nehody [Vorobieva EN, Schumacher GI, Osipova IV. a kol. // Kardiovaskulárna terapia a prevencia. - 2006, č. 5 (6). - S. 129-136; Lupach N.M., Khludeeva E.A., Lukyanov P.A. a kol. // Ruský lekársky časopis. - 2010, č. 4. S. 71-74; Titov V.N. // Klinická laboratórna diagnostika. 2006, číslo 4. P.310].

Jedným z hlavných rizikových faktorov (RF) pre rozvoj aterosklerózy je porušenie metabolizmu lipidov v tele. Dyslipidémia, spočívajúca v poklese lipoproteínov s vysokou hustotou (HDL), so zvýšením β-lipoproteínov alebo lipoproteínov s nízkou hustotou (LDL), pre-β lipoproteínov alebo lipoproteínov s veľmi nízkou hustotou (VLDL), prispieva k rozvoju aterosklerózy. Navyše aterogénne vlastnosti majú modifikované, najčastejšie peroxidované, oxidované (oxy-LPN). Prispievajú k zvýšeniu syntézy kaveolínu-1, čo vedie k zníženiu tvorby NO endotelom [Vorob'eva EN, Schumacher GI, Osipova IV. a kol. // Kardiovaskulárna terapia a prevencia. - 2006, č. 5 (6). - S. 129-136; Zotova I.V., Zateishchikov D.A., Sidorenko B.A. // Kardiológia. - 2002, č. 4. - S. 57-67; Titov V.N. // Klinická laboratórna diagnostika. 2006, číslo 4. P.310]. Oxidované lipoproteíny sú aktívne dráždidlá pre monocyty, ktoré prenikajú do subendotelového priestoru, transformujú sa na makrofágy a potom, ako sa v nich hromadí modifikovaný LDL, do penových buniek. Aktivované makrofágy a penové bunky uvoľňujú biologicky aktívne látky - rastové faktory, protizápalové cytokíny, bunkové adhézne molekuly, ktoré podporujú agregáciu krvných doštičiek, vazokonstrikciu a adhéziu leukocytov a následne rozvoj zápalového procesu v stene tepny a progresiu ateroskleróza. Oxy-LDL tiež indukujú proliferáciu buniek hladkého svalstva ciev (SMC), HDL na druhej strane vykonávajú reverzný transport cholesterolu (CS) z cievnej steny a makrofágov do pečene [Titov V.N. // Klinická laboratórna diagnostika. 2006, číslo 4. P.310].

Arteriálna hypertenzia (AH) je druhým dôležitým rizikovým faktorom pre rozvoj aterosklerózy. Dokázalo sa, že medikamentózna kontrola krvného tlaku u hypertonikov znižuje riziko mŕtvice o 40 %, infarktu myokardu o 8 % a celkovej úmrtnosti na srdcové choroby o 10 % [Chicherina EN, Milyutina OV. // Klinická medicína. 2009. - č.2. - S.18-21]. Pri izolovanej hypertenzii u mužov vo veku 47,5 ± 8,4 g je lipidové spektrum posunuté smerom k zvýšeniu celkového cholesterolu (TC), triglyceridov (TG), LDL cholesterolu, zníženiu HDL cholesterolu, zvýšeniu koeficientu aterogenity (CA) [Ovchinnikova L K., Yagudina R.I., Ovchinnikova E.A. // Ruské lekárne. - 2007. - Č. 14. - str. 26-31]. Hypertenzia zvyšuje permeabilitu endotelu a akumuláciu lipoproteínov v intime [Shlyakhto EV, Gavrisheva NA, Ovchinnikova OA. et al. Vplyv indukovaného zápalu na metabolizmus kolagénu v aterosklerotických plakoch u myší // Medical Immunology. 2008, číslo 6. S.507-512]. Bolo dokázané, že dôvodom aktivácie peroxidácie proteínov a lipidov (PO) u potkanov so spontánnou hypertenziou je zvýšenie produkcie kyslíkových radikálov a neefektívnosť endogénnych systémov na ich inaktiváciu. Je tiež známe, že vývoj spontánnej hypertenzie u potkanov sprevádza syndróm systémovej zápalovej odpovede: jej počiatočným štádiom je aktivácia (priming) polymorfonukleárnych leukocytov (neutrofilov), zvýšenie produkcie a sekrécie aktívnych foriem О 2 - a Н 2 О 2 a intenzifikáciu bielkovín PO a zároveň mastných kyselín (MK). Reakcia О 2 - s oxidom dusnatým (NO) s vytvára ONOO - a zbavuje NO jeho biologického účinku ako relaxačného faktora. Pokles NO vedie k zvýšeniu krvného tlaku podľa typu vývoja začarovaného kruhu [IV Zotov, DA Zateyshikov, BA Sidorenko. // Kardiológia. - 2002, č. 4. - str. 57-67].

Z moderných pozícií je kľúčovým článkom v patogenéze aterosklerózy endotelová dysfunkcia (ED), čo je nerovnováha medzi hlavnými funkciami endotelu: vazodilatáciou a vazokonstrikciou, inhibíciou a podporou proliferácie, antitrombotické a protrombotické, antioxidačné a prooxidačné [Lupach NM, Chludeeva NM., Lukyanov P.A. a kol. // Ruský lekársky časopis. - 2010, č. 4. S. 71-74; Allison B. Reiss, Amy D. // Journal of investigative medicine. 2006. zväzok 54, č. 3. strana 123-131; Huber S. A., Sakkinen P., David C. // Circulation. 2001. - N. 103. - S. 2610-2616]. Oxid dusnatý je dôležitým regulátorom v kardiovaskulárnom systéme, posol, ktorý sprostredkúva auto- a parakrinné účinky. V tele je reakcia syntézy NO katalyzovaná skupinou NO syntáz (NOS). NOS používa L-arginín ako substrát a NADPH diaforázu ako kofaktor. NADPH-diaforáza sa podieľa na transporte elektrónov do prostetickej skupiny enzýmu. Stanovenie NADPH-diaforázy je založené na tvorbe diformazanu v prítomnosti endogénneho β-NADPH a tetrazóliových solí [IV Zotova, DA Zateyshikov., BA Sidorenko. // Kardiológia. 2002, č.4. S. 57-67; Shumatova T.A., Prikhodchenko N.G., Grigoryan L.A. a kol. // Pacific Medical Journal. 2010, č. 3. S. 59-61; Allison B. Reiss, Amy D. Glass // Journal of investigative medicine. 2006. Vol. 54, N. 3. S. 123-131].

Údaje z klinických a epidemiologických štúdií preukázali patogenetický účinok hypertenzie a hyperlipidémie na cievnu stenu, avšak obdobie vzniku ED s kombinovaným pôsobením týchto faktorov v experimentálnych podmienkach nebolo jednoznačne stanovené [Ovchinnikova LK, Yagudina RI, Ovchinnikova EA // Ruské lekárne. - 2007. - Č. 14. - S.26-31; Vorobieva E.N., Schumacher G.I., Osipova I.V., Khoreva M.A. a kol. // Kardiovaskulárna terapia a prevencia. - 2006. - č. 5 (6). - 129-136; Nagornev V.A., Voskayants A.N. // Vestn. RAMS, 2006. - č. 9-10. S.66-74; Davignon J. Ganz P. // Circulation. - 2004; 109: 27-32].

Experimentálne zvieracie modely hrajú dôležitú úlohu pri štúdiu chorôb, vrátane aterosklerózy. Potkany sa často používajú pri modelovaní hyperlipidémie ako rizikového faktora aterosklerózy [Meshcherskaya K.A., Borodina G.P., Koroleva N.P. O spôsobe výberu činidiel ovplyvňujúcich metabolizmus cholesterolu. // Eleutherococcus a iné adaptogény z rastlín Ďalekého východu. / Ed. K. A. Meshcherskaya. - Vladivostok, 1966. - s. 289-294; Sanniková A.A., N. N. Chuchková, Gaisina E. Sh. Imunomodulačný účinok glukozaminylmuramyldipeptidu pri zmenenom metabolizme lipidov a ateroskleróze. // Bulletin Uralskej lekárskej ekonomickej vedy. - 2008. - Číslo 1. - S.64-66. 10; Yudina T.P., Charevach E.I., Tsybulko E.I., Maslennikova E.V., Plaksen N.V. Hypolipidemický účinok komplexného emulgátora obsahujúceho laminálnu riasu a vodný extrakt z koreňov mydlovníka Sa ponaria officinalis L. v experimente na potkanoch. // Výživa. - 2008. - T. 77, č. 2. - str. 76-79]. Ich získanie a údržba sú relatívne lacné, so zvieratami sa ľahko manipuluje a v zajatí sa dobre rozmnožujú. Zo všetkých experimentálnych zvierat na potkanoch je metabolizmus najlepšie študovaný [Kulikov VA, Chirkin AA. Vlastnosti metabolizmu lipoproteínov u potkanov // Patologická fyziológia a experimentálna terapia. - 2004. - č.1. - S.26-27].

Spomínaní výskumníci však hodnotili zmenu len lipidového zloženia krvi počas krátkej doby pozorovania (od 16 dní do 3 mesiacov), v modeloch chýbajú údaje o morfologických a funkčných zmenách cievnej steny a nezohľadňujú zahrnutie dlhodobých kompenzačných mechanizmov, ktoré zabraňujú vzniku vaskulárnych lézií.

Známe metódy modelovania aterosklerózy (položka RU č. 2033646; trieda G09В 23/28, 1995; položka RU č. 2327228, trieda G09В 23/28, 2008, bulletin č. 17; položka RU č. 77K13 trieda 21271 A61K 31/505, 1999).

Vyššie uvedené spôsoby však umožňujú podávanie liekov (obzidan - 1 mg na 100 g ž.hm., hydrokortizónacetátová suspenzia - 1,5 mg na 100 g ž.hm., uridín v dávke 50 mg na 1 kg ž.hm. denne počas 6-8 dní) na pozadí stravy obohatenej o tuky, umelo menia metabolizmus zvieraťa a nedostatočne odrážajú tvorbu prirodzených patogenetických mechanizmov, ktoré zohrávajú kľúčovú úlohu pri rozvoji aterosklerózy.

Prototyp bol použitý na simuláciu hyperlipidémie u potkanov na dlhú dobu [Kropotov A.V. Vplyv cimifugy dahurskej a nechtíka lesného na niektoré ukazovatele metabolizmu lipidov a reprodukčný systém (experimentálna štúdia). Abstrakt práce. dizertačnú prácu pre stupeň kandidát med. vedy, Vladivostok - 1975, strana 5]. Známy spôsob dodáva strave výrazné aterogénne vlastnosti. Potkany sú na diéte s vysokým obsahom tukov počas 7 mesiacov. Do krmiva pre zvieratá sa pridáva cholesterolový prášok v množstve 1%, margarín 10%, mercazolil 10 mg/kg a vitamín D v množstve 2,5 ME na kg telesnej hmotnosti potkana.

Prototyp však nehodnotil zmenu funkčných a morfologických vlastností cievneho endotelu, vedci pozorovali len zmeny v lipidovom spektre v krvi a v pečeňových biopsiách potkanov.

Berúc do úvahy zvláštnosti metabolických procesov u potkanov, ktoré prispievajú k vytvoreniu ich odolnosti voči tukovej záťaži, autori vynálezu použili na najvýraznejšie poškodenie endotelu kombináciu hyperlipidémie s arteriálnou hypertenziou. ÚČINOK: metóda zvyšuje narušenie procesov metabolizmu cholesterolu, tvorbu pretrvávajúcich príznakov aterosklerotického poškodenia ciev, s prihliadnutím na zahrnutie urgentných a dlhodobých kompenzačných mechanizmov.

Cieľom nárokovaného vynálezu je vyvinúť experimentálny model endoteliálnej dysfunkcie založený na štúdiu kombinovaného účinku hyperlipidémie a arteriálnej hypertenzie na morfologickú štruktúru krvných ciev u potkanov.

Uvedený cieľ nárokovaného spôsobu sa dosahuje kombináciou kŕmenia laboratórnych zvierat aterogénnou stravou pozostávajúcou z pridávania práškového cholesterolu v množstve 1 %, 10 % margarínu, 10 mg/kg mercazolilu a vitamínu D - 2,5 IU na kg. telesnej hmotnosti potkana a vykonaním operácie, ktorá zahŕňa podviazanie obličkového pediklu ľavej obličky nevstrebateľným šijacím materiálom a prišitie horného pólu pravej obličky, pričom sa ponechajú 2/3 orgánu, čo prispieva k rozvoju perzistujúca renovaskulárna arteriálna hypertenzia. Počas experimentu boli vykonané nasledujúce kroky:

Monitorovanie stavu metabolizmu lipidov v krvnom sére sa uskutočnilo pri izolovanej experimentálnej hyperlipidémii (EH) a pri kombinovanom účinku aterogénnej diéty a arteriálnej hypertenzie (D + AH).

Monitorovanie hladiny krvného tlaku v modeloch EG a D + AH.

Stanovenie aktivity NADPH-diaforázy v endoteli aorty, femorálnych artériách a mikrocievach prednej brušnej steny (ABW) v dvoch experimentálnych modeloch.

Hodnotenie stavu lúmenu krvných ciev u pokusných zvierat metódou počítačovej magnetickej rezonancie (MRI).

Technický výsledok navrhovanej metódy spočíva v získaní pretrvávajúcich štrukturálnych porúch cievnej steny v porovnaní s izolovanou aterogénnou stravou za účelom vytvorenia modelu aterosklerózy u laboratórnych zvierat na diagnostiku, prevenciu a liečbu aterosklerózy.

Podstatou nárokovaného vynálezu je kombinácia hyperlipidémie a renovaskulárnej hypertenzie u laboratórnych potkanov.

Hyperlipidémia sa dosiahla pridaním 1 % cholesterolu v prášku, 10 % margarínu, 10 mg/kg mercazolilu a vitamínu D - 2,5 IU na kg telesnej hmotnosti potkana do krmiva.

Renovaskulárna hypertenzia bola vykonaná podviazaním obličkového pediklu ľavej obličky nevstrebateľným šijacím materiálom a prišitím horného pólu pravej obličky (ponechali 2/3 orgánu).

Táto technika umožňuje získať pretrvávajúce štrukturálne poruchy cievnej steny v porovnaní s izolovanou experimentálnou hyperlipidémiou.

Podstatu navrhovanej metódy ilustrujú nákresy, kde obrázok 1a-1 ukazuje u skúsených potkanov nárast šírky spoločnej krčnej tepny, brachiocefalického trupu a hrudnej časti aorty po 2 mesiacoch štúdie, obrázok 2 ukazuje v modeli D + AG definíciu nerovnomerného kontrastu artérií, čo naznačuje lokálne aterogénne zmeny v stene artérie, na obrázku 3 - v aorte experimentálnych potkanov pri farbení hematoxylínom a eozínom zmeny v architektonike elastických vlákien, posunutie jadier myocytov do periférie, ich zhutnenie, infiltrácia bunkovej steny, zhrubnutie endotelu, sú zobrazené 400 (kamera A × Cam MRc, Nemecko), farbenie hematoxylínom a eozínom, obr.4 vizualizuje perinukleár opticky prázdne útvary, zväčšenie × 400 (kamera A × Cam MRc, Nemecko), farbenie hematoxylínom a eozínom; obrázok 5 - farbenie aorty hematoxylínom a eozínom (kontrola), zväčšenie x 100 (kamera A x Cam MRc, Nemecko), farbenie hematoxylínom a eozínom; na obr. 6 vo femorálnych artériách vizualizované perinukleárne opticky prázdne útvary zväčšenie × 400, sfarbenie hematoxylín a eozín; Obr. 7 - farbenie femorálnej artérie hematoxylínom a eozínom (kontrola), zväčšenie x 400 (kamera A x Cam MRc, Nemecko) farbenie hematoxylínom a eozínom; 8 - v skupine potkanov s D + AH pri farbení aorty Sudanom 4 (podľa Okamotovej metódy), znázorňuje infiltráciu cievy tukovými inklúziami, farba ciev podľa Okamotovej metódy, zväčšenie Obr. × 100; Obr.9 v skupine potkanov s D + AH pri farbení femorálnej artérie Sudanom 4 (podľa Okamotovej metódy) ukazuje infiltráciu cievy tukovými inklúziami, zväčšenie × 400; Obrázok 10 ukazuje graf hrúbky steny a intimy aorty a femorálnych artérií potkanov v modeli hyperlipidémie (skupina I) a v komplexnom modeli: hyperlipidémia a arteriálna hypertenzia (skupina II).

Príklad konkrétneho vyhotovenia

Materiálom pre experimentálne štúdie boli potkany Wistar - 45 samcov s hmotnosťou 200-250 g. Zvieratá boli rozdelené do 2 skupín:

Skupina 1 - 15 samcov potkanov bola na cholesterolovej diéte počas 6 mesiacov (prototyp). Diéta pozostávala z pridávania cholesterolu v prášku v množstve 1%, 10% margarínu, 10 mg/kg mercazolilu a vitamínu D - 2,5 IU na kg telesnej hmotnosti potkana do krmiva.

2 skupina 15 samcov potkanov 15 dní pred začatím kŕmenia podobnou aterogénnou diétou (pridanie práškového cholesterolu v množstve 1%, 10% margarínu, 10 mg/kg mercazolilu a vitamínu D - 2,5 IU na kg telesnej hmotnosti potkanov ) bola vykonaná operácia - uloženie ligatúry na obličkový pedikel ľavej obličky nevstrebateľným šijacím materiálom a zošitie horného pólu pravej obličky s ponechaním 2/3 orgánu (nárokovaný spôsob). Táto operácia rozvinie pretrvávajúcu renovaskulárnu arteriálnu hypertenziu do 8-10 týždňov experimentu.

Skupina III - kontrola - 15 zdravých samcov potkanov konzumovalo obvyklú stravu. Po 6 mesiacoch štúdie boli zvieratá každej skupiny vyradené z experimentu pod éterovou anestézou dekapitáciou. Odoberalo sa krvné sérum, fragmenty aorty, femorálne artérie a PBS. Pokus bol vykonaný v prísnom súlade s požiadavkami Európskeho dohovoru (Štrasburg, 1986) o udržiavaní, kŕmení a starostlivosti o pokusné zvieratá, ako aj o ich stiahnutí z pokusu a následnej likvidácii. Pokusy boli uskutočnené v súlade s požiadavkami Svetovej spoločnosti na ochranu zvierat (WSPA) a Európskeho dohovoru na ochranu pokusných zvierat. Štúdia bola schválená medziodborovou etickou komisiou (protokol č. 4, vec č. 21 zo dňa 24.01.2011).

Stanovenie obsahu OX; TG; LDL cholesterol, HDL cholesterol sa uskutočňoval štandardnou kolorimetrickou metódou s použitím činidiel Olvex diagnosticum (Rusko).

Krvný tlak sa meral v chvostovej tepne pomocou analyzátora MLU/4C 501 (MedLab, Čína). Počas experimentu boli zvieratá v narkóze, čo ich zbavilo úzkosti a s tým spojených tlakových rázov.

Metóda zobrazovania magnetickou rezonanciou je nasledovná.

Pred skenovaním boli zvieratá intraperitoneálne usmrtené roztokmi rometaru (Xylazinum, SPORA, PRAHA) v koncentrácii 1 mg/ml a relánia v koncentrácii 2 mg/ml. MRI diagnostika bola vykonaná na tomografe PharmaScan US 70/16 pre experimentálny výskum (Bruker, Nemecko) so silou magnetického poľa 7,0 Tesla, frekvenciou 300 MHz a cievkou BGA 09P. Na angiografiu sa použil protokol Head_Angio s nasledujúcimi parametrami: TR / TE = 50,0 / 5,6; uhol sklonu 25,0; obrazové pole 3,0 / 3,0 / 3,0; efektívna hrúbka rezu 30 mm; presah 30,0 mm; matrica 256/256/64 prvkov; spriemerovanie jedného signálu, doba snímania 14 min.

Histologické preparáty boli fixované v 10% neutrálnom formalíne a zaliate do parafínu. Rezy boli zafarbené hematoxylínom a eozínom, Van Gieson, Mallory a Sudan-4 (Okamotova metóda). Opis preparátov bol realizovaný na mikroskope Olympus BX 41. Snímky boli zhotovené elektronickým fotoaparátom Olympus DP 12, pri konštantnom zväčšení 100 a 400. Morfometria bola realizovaná pomocou okulárového mikrometra MOB - 1-16 × .

V experimente bola použitá histochemická metóda pre NADPH-diaforázu podľa štandardného receptu Hope a Vincent (1989): fragmenty zvieracích ciev boli izolované pomocou čepele a ponorené do 4% paraformaldehydu, ochladené v 0,1 M fosfátovom pufri (pH 7.4), ktorá z celej triedy diaforáz si iba NADPH-diaforáza zachováva svoju aktivitu. Materiál bol fixovaný počas 2 hodín pri teplote 4 °C, premývaný jeden deň pri rovnakej teplote v 15% roztoku sacharózy, pričom roztok bol vymenený 7-8 krát. Vzorky tkaniva zmrazené v kryostate boli narezané na 10 μm rezy, pripevnené na podložné sklíčka a umiestnené do inkubačného média. Zloženie a konečná koncentrácia média boli nasledovné: 50 mM Tris tlmivý roztok (pH 8,0), 1 mM NADPH (Sigma), 0,5 mM nitrotetrazoliová modrá (Sigma) a 0,2 % Triton X-100 ("Serva"). Inkubácia prebiehala 60 minút v termostate pri 37 °C. Potom boli rezy opláchnuté v destilovanej vode, dehydratované a vložené do balzamu podľa metódy všeobecne akceptovanej v histológii.

Enzýmová aktivita bola meraná v endoteli a hladkých myocytoch aorty, femorálnych artérií a mikrociev PBS potkanov.

Enzýmová aktivita bola stanovená pomocou softvéru "ImageJ1.37 v" a vyjadrená v jednotkách optickej hustoty. Existuje dôkaz o priamom vzťahu medzi koncentráciou študovaného enzýmu a optickou hustotou zrazeniny vytvorenej ako výsledok histochemickej reakcie.

Na matematické spracovanie získaných údajov sa SPSS v. 16. Porovnanie stredných hodnôt vo vzorkách bolo uskutočnené pomocou neparametrického Wilcoxon-Mann-Whitneyho U-testu.

Monitorovanie krvného tlaku ukázalo, že v experimentálnej skupine II (D + AH) bol krvný tlak vyšší ako v skupine I a v skupine zdravých potkanov počas celého experimentu (2, 4, 6 mesiacov), čo potvrdzuje tvorbu renovaskulárnych a renoprivačných mechanizmov arteriálnej hypertenzie (tabuľka 1).

stôl 1
Indexy krvného tlaku u potkanov v modeloch experimentálnej aterosklerózy
Skupiny potkanov	Experiment 2 mesiace	Experiment 4 mesiace	Experiment 6 mesiacov
Systolický. BP (mm Hg)	diastolický. BP (mm Hg)	Systolický. BP (mm Hg)	diastolický. BP (mm Hg)	Systolický. BP (mm Hg)	diastolický. BP (mm Hg)
Skupina I (IG)	113,8 ± 3,6	68,8 ± 1,22	122,06 ± 1,05	66,18 ± 7,08	141,70 ± 4,41	90,89 ± 1,83
Skupina II (D + AG)	131,3 ± 1,5; *	83,4 ± 3,2; *	140,12 ± 3,25; *	90,24 ± 4,44; *	161,70 ± 1,66; *	99,33 ± 3,41; *
Skupina III (kontrola)	115,1 ± 0,7	73,4 ± 0,53	116,25 ± 0,84	70,20 ± 2,18	116,01 ± 3,05	71,44 ± 1,70
* - spoľahlivosť rozdielov medzi skupinami I a II (рu<0,05);
- spoľahlivosť medzi experimentálnymi skupinami a kontrolnou skupinou (р u<0,05).

Pri štúdiu lipidového spektra v experimentálnych skupinách potkanov po 2 mesiacoch experimentu bolo zistené zvýšenie hladiny TC, TG, LDL, HDL a CA v porovnaní s kontrolnou skupinou (р u<0,05) (таблица 2). При этом в группе крыс с артериальной гипертензией значения ОХ, ЛПНП, ЛПВП и КА были достоверно выше (р u <0,05), а уровень ТГ - несколько ниже (p u >0,05) ako v skupine potkanov s izolovanou hyperlipidémiou (tabuľka 2). V 4. mesiaci pokusu u 1. skupiny potkanov pretrvávali poruchy lipidového profilu, výrazne sa zvýšila hladina LDL (р u<0,05). Во II группе значения ЛПВП и ЛПНП снизились и стали ниже, чем в I группе животных, при этом происходило увеличение уровня ТГ и КА. К 6 месяцу эксперимента в обеих опытных группах животных достоверно нарастал уровень ОХ и ТГ. У крыс с атерогенной диетой к этому периоду эксперимента отмечалось увеличение содержания липопротеинов высокой плотности по сравнению с их уровнем на 4 месяце исследования, при этом значения ЛПНП и КА не повышались (р u <0,05), тогда как во II группе крыс (Д+АГ) продолжалась тенденция снижения показателей ЛПНП и ЛПВП. При этом уровень ЛПВП у крыс данной группы стал ниже, чем у здоровых крыс (р u <0,05), произошло увеличение КА - в 2,5 раза по сравнению с I группой и в 4,8 раза по сравнению с контрольной группой крыс (таблица 2). Выявленные изменения подтверждают более выраженные нарушения липидного спектра у крыс II группы (Д+АГ). Снижение сывороточного содержания ЛПНП и ЛПВП у крыс с артериальной гипертензией и гиперлипидемией, вероятно, указывает на усиление их рецепции эндотелием сосудов.

Pri hodnotení NADPH-diaforázy ciev sa zistilo, že vo femorálnych artériách experimentálnych a kontrolných skupín zvierat bol obsah NADPH-diaforázy nižší ako v aorte, čo možno vysvetliť anatomickými znakmi štruktúry steny týchto ciev (svalová zložka je výraznejšia vo femorálnych artériách) (р u<0,05). В бедренных артериях II группы крыс значения NADPH-диафоразы были несколько ниже, чем в аорте, однако показатели не имели достоверной разницы, что может свидетельствовать о более выраженном нарушении синтеза этого кофермента в аорте при моделировании реноваскулярной гиперетензии. При мониторинге NADPH-диафоразы зарегистрировано снижение ее уровня во фрагментах аорты и бедренных артерий I и II опытных групп крыс с достоверностью различий с контролем (р u <0,05) (табл.3).

V obsahu cievneho koenzýmu v závislosti od času experimentu (2, 4, 6 mesiacov) neboli zistené signifikantné rozdiely vo všetkých experimentálnych skupinách. Najväčší pokles hladiny NADPH-diaforázy bol stanovený po 2 mesiacoch štúdie s relatívnou stabilizáciou hodnôt koenzýmu na nízkej hladine počas následného monitorovania.

U potkanov s hyperlipidémiou a arteriálnou hypertenziou bola hodnota NADPH-diaforázy v dynamike celého experimentu nižšia ako u prototypu (p u<0,05), что свидетельствует о более глубоком нарушении функциональных свойств эндотелия. У крыс II группы уровень NADPH-диафоразы в сосудах микроциркуляторного русла снижался ко 2 месяцу исследования, тогда как в группе крыс I группы (ЭГ) достоверное снижение его уровня происходило только к 6 месяцу эксперимента.

Pri monitorovaní stavu arteriálneho riečiska pomocou magnetickej rezonancie (MRI) sa zistilo, že po 2 mesiacoch štúdie na experimentálnych potkanoch sa zväčšila šírka spoločnej krčnej tepny, brachiocefalického kmeňa a hrudnej časti aorty (tabuľka 4, obrázok 1, obrázok 2). Táto vaskulárna reakcia je spôsobená zahrnutím ochranných a adaptačných mechanizmov na udržanie centrálnej hemodynamiky.

Do 6. mesiaca experimentu však bolo zaznamenané zúženie priesvitu uvedených ciev (tab. 4), ktoré bolo najvýraznejšie v skupine II potkanov (spoľahlivosť rozdielov so skupinou I (р u<0,05). У крыс II группы регистрировалось уменьшение ширины просвета подвздошных артерий, что свидетельствует о мультифокальности поражения артериального русла при комплексном действии гиперлипидемии и артериальной гипертензии. Определялось неравномерное контрастирование артерий в моделе Д+АГ, что предполагает локальные атерогенные изменения стенки артерий (фиг.2).

Tabuľka 4
Priemer lúmenu ciev potkanov (mm) stanovený metódou MRI.
Plavidlá	ja (diéta)	Skupina II (diéta + operácia)	Ovládanie (rozmer v mm)
2 mesiace	6 mesiacov	2 mesiace	6 mesiacov	2 mesiace	6 mesiacov
Všeobecne ospalý	1,57(1,49-1,63)!	1,41(1,38-1,54)	1,34;(1,26-1,47)	1,14;(1,10-1,19)	1,27(1,19-1,32)	1,23(1,20-1,31)
Vnútorná ospalosť	0,79(0,76-0,81)	0,72(0,70-0,73)	0,78(0,76-0,84)	0,44(0,42-0,50) !	0,8(0,78-0,89)	0,77(0,75-0,91)
Brachiocefalický kmeň	1,54(1,51-1,58)!	1,38(1,43-1,50)	1,47(1,60-1,65)!	1,23(1,21-1,25)	1,31(1,28-1,33)	1,30(1,27-1,32)
Mozgové tepny	0,49(0,46-0,56)	0,40(0,38-0,41)	0,49(0,45-0,52)	0,44(0,42-0,50)	0,40(0,37-0,47)	0,41(0,39-0,44)
Gr. časť aorty	2,13(2,05-2,16)!	1,78 (1,76-1,79) x	2,32(2,26-2,33)!	1,51; (1,47 – 1,53)! ×	1,95(1,83-1,97)	1,86(1,80-1,93)
Br. časť aorty	1,61	1,41	1,66		1,64	1,62(1,54-1,63)
	(1,59-1,63)	(1,40-1,44)	(1,60-1,68)	1,53(1,43-1,56)	(1,60-1,66)
Spoločné iliakálne artérie	1,1(0,94-1,05)	0,82(0,80-0,87)	0,94(0,92-0,96)	0,74 (0,71-0,75)! ×	0,98(0,96-1,2)	0,93(0,90-0,99)
Poznámka: údaje sú prezentované ako Medián (NK-VK).
! - spoľahlivosť medzi experimentálnymi skupinami a kontrolnou skupinou (р u<0,05).
- spoľahlivosť rozdielov medzi skupinami I a II (p u<0,05);
× - spoľahlivosť rozdielov medzi ukazovateľmi po 2 a 6 mesiacoch experimentu.

Posúdenie histologickej štruktúry arteriálnej steny ukázalo, že najvýraznejšie zmeny na cievach boli zaznamenané do 6. mesiaca experimentu. V aorte a femorálnych artériách experimentálnych potkanov sa pri farbení hematoxylínom a eozínom pozorujú zmeny v architektonike elastických vlákien, perinukleárne opticky prázdne útvary, posunutie jadier myocytov na perifériu, ich zhutnenie, bunková infiltrácia steny, zhrubnutie endotelu sú vizualizované (obr. 3, obr. 4, obr. 6c) v porovnaní s intaktnými potkanmi (obr. 5, obr. 7). V tomto prípade sú najvýraznejšie zmeny v morfológii tepien zaznamenané v druhej experimentálnej skupine (D + AG) (obrázok 4, obrázok 6). Pri farbení tepien Sudanom 4 podľa Okamotovej metódy u experimentálnych potkanov s D + AH bola zistená infiltrácia cievy tukovými inklúziami. V tomto prípade ukladanie tuku vyplní prázdne miesta odhalené farbením hematoxylínom a eozínom (obr. 8, obr. 9).

V PBS u experimentálnych potkanov sa pozoruje pokles počtu mikrociev (u potkanov skupiny I sa zistí 5-7 mikrociev, v skupine II - 3-4 mikrocievy v zornom poli, zatiaľ čo u kontrolných potkanov - 8-10 mikrocievy). Cievy mikrovaskulatúry u potkanov experimentálnej skupiny II sú vo forme pruhov s proliferáciou endotelových buniek, zatiaľ čo u kontrolných potkanov sú oválne alebo okrúhle. V experimentálnych skupinách potkanov sa zväčšila hrúbka mikrociev prednej brušnej steny. Zároveň bolo pozorované maximálne zhrubnutie steny mikrociev v experimentálnej skupine II (M = 4,62 (4,36-4,72) mikrónov v druhej skupine, M = 2,31 (2,12-2,36) mikrónov v skupine I a 1,54 (1,50-1,62) μm - u kontrolných potkanov). U experimentálnych potkanov bolo zaznamenané zvýšenie hrúbky steny aorty a femorálnych artérií. U potkanov s arteriálnou hypertenziou bol zaznamenaný nárast hrúbky steny a intimy ciev v porovnaní s modelom izolovanej experimentálnej hyperlipidémie (obr. 10).

Porovnávacia analýza navrhovaného riešenia s prototypom ukazuje, že pri metóde podľa vynálezu, ktorá kombinuje artériovú hypertenziu a hyperlipidémiu, dochádza do 6. mesiaca experimentu k zmenám v lipidovom spektre krvného séra (zvýšenie OX, TG, zníženie HDL, zvýšenie CA) v porovnaní s prototypom. Metóda podľa vynálezu vám umožňuje stanoviť trvalé zvýšenie systolického a diastolického krvného tlaku od 2 do 6 mesiacov štúdie. V porovnaní s prototypom bol do 6. mesiaca experimentu zaznamenaný pokles aktivity NADPH-diaforázy vo vaskulárnom endoteli. Bolo pozorované poškodenie ciev: deformácia elastických vlákien, zväčšenie hrúbky steny a intimy, bunková infiltrácia, ukladanie tukových inklúzií v stene, zúženie vaskulárneho lumenu, zníženie počtu mikrociev PBS.

Metóda modelovania aterosklerózy, vrátane kŕmenia študovaných zvierat aterogénnou diétou, pozostávajúca z pridávania práškového cholesterolu v množstve 1 %, margarínu 10 %, mercazolilu 10 mg/kg a vitamínu D – 2,5 IU na kg telesnej hmotnosti. potkana do krmiva, vyznačujúci sa tým, že popri podávaní aterogénnej stravy zvieratám sa vykonáva operácia, ktorá pozostáva z podviazania obličkového pediklu ľavej obličky nevstrebateľným šijacím materiálom a zošitia horného pólu pravej obličky, pričom sa ponechá 2/3 orgánu.

Podobné patenty:

[0001] Vynález sa týka medicíny, najmä experimentálnej kardiofarmakológie, a môže sa použiť na korekciu nedostatku oxidu dusnatého. Na tento účel experiment simuluje nedostatok oxidu dusnatého denne počas 7 dní intraperitoneálnou injekciou N-nitro-L-arginín-metylesteru samcom potkanov Wistar v dávke 25 mg/kg.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny a môže sa použiť na modelovanie primárnej biliárnej cirhózy. Za týmto účelom sa 0,08 až 0,12 ml 45 až 50 % alkoholového roztoku kyseliny pikrylsulfónovej vstrekne do lúmenu bulbárnej časti dvanástnika a koncovej časti ilea potkana v intervaloch 5 až 10 minút.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny, najmä chirurgie, a môže sa použiť na modelovanie chronickej hnisavej kostnej rany. Vznik kostného defektu sa uskutočňuje pozdĺž osi kosti, umiestni sa do nej kultivačná zmes muzeálneho kmeňa Staphylococcus Aureus č. 5 v množstve 40-45 miliónov CFU na 1 kg telesnej hmotnosti. pokusné zviera a 0,1 ml sterilného kremenného piesku.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny, menovite oftalmológie, a na modelovanie diabetického makulárneho edému. Na tento účel sa potkanovi vstrekne do brušnej dutiny alloxán v dávke 15,0 mg/100 g telesnej hmotnosti.

Vynález sa týka medicíny, najmä experimentálnej farmakológie, a môže sa použiť na korekciu ischémie. Na tento účel sa na druhý deň experimentu pre laboratórne zvieratá vymodeluje kožná chlopňa.

Vynález sa týka medicíny, konkrétne experimentálnej medicíny. Stimulačná myografia sa vykonáva na laboratórnych zvieratách 9 týždňov po ukončení expozície toxickej látke.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny a môže sa použiť na korekciu ischémie kostrového svalstva. Na tento účel sa modeluje ischémia svalov nôh, vrátane simultánneho dodatočného modelovania deficitu oxidu dusnatého intraperitoneálnym podávaním blokátora syntézy oxidu dusnatého N-nitro-L-arginín metylesteru (L-NAME) počas 7 dní pri dávka 25 mg/kg denne.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny a týka sa modelovania encefalopatie v prenatálnom období vývoja zvierat. Na tento účel sa samiciam malých laboratórnych zvierat denne subkutánne injekčne podáva roztok dusitanu sodného v dávke 50 mg / kg od 10. do 19. dňa gravidity.

Vynález sa týka medicíny, najmä experimentálnej farmakológie, a možno ho použiť na štúdium farmakologickej podpory prežívania kožnej chlopne v podmienkach zníženého krvného obehu.

Vynález sa týka experimentálnej farmakológie a chirurgie a môže sa použiť na štúdium možnosti korekcie ischémie kostrového svalstva. Na tento účel sa na druhý deň experimentu u potkanov simuluje ischémia svalov nôh.

Vynález sa týka medicíny, najmä experimentálnej stomatológie, a na modelovanie demineralizácie zubnej skloviny. Na tento účel je na extrahovaný zub pripevnený držiak. Ohnisko, ktoré sa nachádza na vestibulárnom povrchu zuba okolo držiaka, obmedzte voskovým povlakom. Zub je ponorený do samostatnej nádobky s demineralizačným gélom, ktorý pozostáva z (hmotn. %): dihydrogenfosforečnan vápenatý - 0,04-0,08, kyselina mliečna - 0,8-1,0, praestol 2510 - 3,0-4,5, roztok hydroxidu sodného - 0,4, destilovaná voda - zvyšok. Potom sa nádoba so zubom umiestni na 96 hodín do termostatu pri pH = 4,5. Metóda poskytuje zvýšenie jasnosti demineralizačného zamerania. 4 chor., 2 priem.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny a farmakológie a je určený na štúdium príslušnosti študovaných liečiv k substrátom efluxného transportného proteínu Pgp (glykoproteín-P). Na tento účel sa v experimente simuluje stav indukcie funkčnej aktivity tohto proteínu. Finasterid sa používa ako induktor. Liek sa podáva králikom intragastricky vo forme suspenzie v olivovom oleji v dennej dávke 0,225 mg/kg telesnej hmotnosti zvieraťa počas 14 dní. Metóda poskytuje vytvorenie modelu, je bezpečná, nevyžaduje drahé laboratórne špeciálne vybavenie a materiály. 1 tab.

Vynález sa týka medicíny, najmä oftalmológie, a môže sa použiť na vytváranie modelov očných chorôb. Na tento účel sa cez plochú časť ciliárneho telieska do sklovca oka králika činčily vstrekne 0,1 ml kultivačnej tekutiny obsahujúcej adenovírus typu 6 prispôsobený transplantovanej línii embryonálnych obličkových buniek ošípaných v dávke 10 000 TCID50. ihla 33G. V tomto prípade sa histologické vyšetrenie odstránenej očnej gule uskutoční po 7 dňoch od infekcie. Metóda poskytuje zvýšenie frekvencie a presnosti reprodukcie adenovírusovej uveitídy komplikovanej optickou neuritídou. 1 ex.

Vynález sa týka medicíny, najmä oftalmológie, a môže sa použiť na vytváranie modelov očných chorôb. Na tento účel sa použije 0,1 ml kultivačnej tekutiny obsahujúcej vírus herpes simplex (HSV) typ I kmeň L2, prispôsobený transplantovanej línii embryonálnych buniek obličiek ošípaných, v dávke 100 000 TCID50 ... V tomto prípade sa histologické vyšetrenie odstránenej očnej gule vykoná 21. deň po infekcii. Metóda poskytuje zvýšenie frekvencie a presnosti reprodukcie izolovanej optickej neuritídy. 1 ex.

Vynález sa týka medicíny, menovite regeneratívnej medicíny a tkanivového inžinierstva, a môže byť použitý na získanie extracelulárnych matríc krvných ciev malého kalibru. Na tento účel sa v prvej fáze tkanív premyje fragment krvnej cievy destilovanou vodou počas 1 hodiny pri teplote + 4 ° C. Potom sa fragment umiestni do 0,05 % roztoku trypsínu a 0,02 % EDTA na 1 hodinu pri teplote + 37 °C. V treťom stupni sa ošetrenie uskutočňuje v 0,075% roztoku dodecylsulfátu sodného počas 24 hodín pri teplote 26 °C. Potom sa fragment umiestni do 0,25 % roztoku Triton X-100 na 24 hodín pri teplote 26 °C. Vo štvrtom štádiu sa na tento fragment pôsobí roztokom obsahujúcim RNázu A 20 μg / ml a DNázu I 200 μg / ml počas 6 hodín pri teplote + 37 ° C. V tomto prípade sa po každej fáze spracovania fragment krvnej cievy trikrát premyje fyziologickým roztokom pufrovaným fosfátom počas 10 minút. Celý proces spracovania prebieha za stáleho miešania roztokov a súčasných vibrácií generovaných vibračným motorom, ktorý je umiestnený na vonkajšej stene nádoby. ÚČINOK: metóda zlepšuje kvalitu decelularizácie ciev malého kalibru, zachováva ich integritu a ultraštruktúru pre následnú imobilizáciu buniek príjemcu. 2 ex., 6 chorých.

Vynález sa týka medicíny, menovite experimentálnej oftalmológie, a na modelovanie diabetickej makulárnej neovaskularizácie. Diabetes mellitus sa modeluje u potkanov intraperitoneálnym podaním alloxánu v dávke 15,0 mg/100 g telesnej hmotnosti. Po 6,5 týždňoch sa potkaniemu VEGF 164 vstrekne do sklovca metódou intravitreálneho prístupu v 1., 3. a 7. deň, 1 μg, v celkovej dávke 3 μg. Metóda zabezpečuje neovaskularizáciu makulárnej oblasti typickú pre diabetes mellitus, čo umožňuje ďalšie štúdium účinnosti a určenie vhodnosti terapie tohto ochorenia. 1 ex.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny a týka sa modelovania malých fokálnych cerebrálnych krvácaní u novonarodených potkanov. Na tento účel sa novonarodené krysy vo veku 3 dní umiestnia do komory a vystavia sa zvuku so silou 70 dB, frekvenciou 110 Hz, počas 60 minút. Metóda zabezpečuje vznik malofokálnych mozgových krvácaní v mozgovej kôre u 100 % novonarodených potkanov bez prasknutia veľkých ciev, čo najviac zodpovedá klinickému obrazu mozgových krvácaní u novorodencov. 7 dwg, 1 tbl

Vynález sa týka medicíny, najmä experimentálnej farmakológie. Na identifikáciu psychotropných vlastností skúmaných látok sa simuluje emocionálno-fyzická stresová situácia, dosiahnutá umiestnením zvierat do valca so studenou vodou. Čas na vyriešenie a splnenie úlohy opustiť valec sa zaznamenáva pomocou navrhnutých záchranných prostriedkov (koľajnica, rebrík a lano) inštalovaných vo valci. Vypočíta sa percentuálna pravdepodobnosť vyriešenia úlohy. Výpočet indexov charakterizujúcich psychoemočné a motoricko-motorické účinky skúmanej látky sa uskutočňuje podľa určitých matematických vzorcov. Metóda je technicky jednoduchá, finančne nenáročná, má vysokú úroveň reprodukovateľnosti, umožňuje s nízkou časovou a vysokou pravdepodobnosťou určiť psychosedatívny alebo psychostimulačný účinok študovanej látky 1 ill., 3 tabuľky, 2 ex.

Vynález sa týka medicíny, menovite experimentálnej kardiológie, a možno ho použiť na štúdium patogenézy nefrogénnej arteriálnej hypertenzie a na skríningové a podrobné farmakologické štúdie. Aby sa simulovala renoparenchymálna arteriálna hypertenzia, dospelí samci potkanov vážiaci spôsobia chemické poškodenie renálneho parenchýmu injekciou 0,1 ml 4% paraformaldehydu do horného pólu oboch obličiek. Metóda poskytuje v krátkom čase pretrvávajúce zvýšenie krvného tlaku, vysokú reprodukovateľnosť výsledku, jednoduchosť vykonania zákroku, jeho nízku invazívnosť, krátku rehabilitačnú dobu pri vzniku významných morfologických a biochemických prestavieb v cieľových orgánoch, podobne ako pri klinickom varianty renoparenchymálnej arteriálnej hypertenzie. 2 tbl, 4 dwg

Vynález sa týka medicíny, najmä experimentálnej farmakológie, a môže sa použiť na štúdium mechanizmov korekcie endotelovej dysfunkcie u tehotných žien. Spôsob zahŕňa reprodukciu modelu gestózy u potkanov Wistar denným intraperitoneálnym podávaním metylesteru N-nitro-L-arginínu v dávke 25 mg/kg počas 7 dní od 14. dňa gravidity. Potom nasleduje jedna reprodukcia 10 minút vzdialenej ischemickej epizódy zadnej končatiny na 21. deň tehotenstva zovretím femorálnej artérie a následnou reperfúziou. Po 90 minútach sa vykonajú vaskulárne testy na výpočet koeficientu endoteliálnej dysfunkcie. ÚČINOK: metóda umožňuje študovať NO - nepodmienené mechanizmy ochranného účinku pri korekcii endotelovej dysfunkcie v špecifických experimentálnych podmienkach. 1 ex.

Vynález sa týka experimentálnej medicíny, patofyziológie a týka sa modelovania aterosklerózy, ktoré možno použiť na štúdium diagnózy, prevencie a liečby tohto ochorenia. K tomu sa laboratórnym zvieratám - potkanom pridáva do krmiva cholesterolový prášok v množstve 1, margarín 10, mercazolil 10 mg kg a vitamín D - 2,5 ME na kg telesnej hmotnosti. Okrem toho sa zvieratá podrobia operácii pozostávajúcej z podviazania obličkového pediklu ľavej obličky neabsorbovateľným šijacím materiálom a zošitia horného pólu pravej obličky, pričom zostane 23 orgánov. Metóda je ľahko realizovateľná, nespôsobuje smrť zvierat, je primeraným modelom poškodenia endotelu a rozvoja aterosklerotického procesu. 12 dwg, 4 tbl, 1 ex

Téma: Experimentálna ateroskleróza

1. Úvod: Experimentálna ateroskleróza

2. Cievne lézie, ktoré vznikajú pri poruchách výživy

3. Zmeny v aorte s hypervitaminózou D

4. Aortálne nekrózy a aneuryzmy u potkanov

5. Nekrotizujúca arteritída

6. Zmeny v cievach s nedostatočným množstvom bielkovín v potravinách

7. Dystroficko-sklerotické cievne zmeny získané pomocou určitých chemikálií

8. Aortitída získaná mechanickým tepelným a infekčným poškodením cievnej steny

Literatúra

ÚVOD: EXPERIMENTÁLNA ATEROSKLERÓZA

Experimentálne rozmnožovanie cievnych zmien podobných ateroskleróze človeka sa dosahuje kŕmením zvierat potravou bohatou na cholesterol alebo čistým cholesterolom rozpusteným v rastlinnom oleji. Pri vývoji experimentálneho modelu aterosklerózy mali najväčší význam štúdie ruských autorov.

V roku 1908 A.I. Ignatovský ako prvý zistil, že keď sú králiky kŕmené živočíšnou potravou, v aorte sa vyvinú zmeny, ktoré veľmi pripomínajú aterosklerózu človeka. V tom istom roku A.I. Ignatovský spolu s L.T. Mooro vytvoril klasický model aterosklerózy, ktorý ukazuje, že keď sú králiky kŕmené vaječným žĺtkom počas 1-2-61 / 2 mesiacov, vzniká ateromatóza aorty, ktorá začína v intime a prechádza do strednej membrány. Tieto údaje potvrdil L.M. Starokadomsky (1909) a N.V. Stuckey (1910). N.V. Veselkin, S.S. Khalatov a N.P. Anichkov zistili, že hlavnou aktívnou súčasťou žĺtkov je cholesterol (A.I. Moiseev, 1925). Potom na získanie aterosklerózy spolu so žĺtkami začali používať čistý OH cholesterol. I. Aničkov a S. S. Khalatov, 1913).

Na dosiahnutie aterosklerotických zmien v aorte a veľkých cievach sa dospelým králikom denne počas 3 až 4 mesiacov podáva cholesterol rozpustený v slnečnicovom oleji. Cholesterol sa rozpustí v zahriatom slnečnicovom oleji tak, aby sa získal 5-10% roztok, ktorý sa vstrekuje do žalúdka zahriateho na 35-40 °; denne zviera prijíma 0,2-0,3 g cholesterolu na 1 kg telesnej hmotnosti. Ak sa nevyžaduje presné dávkovanie cholesterolu, podáva sa zmiešaný so zeleninou. Už po 1,5-2 týždňoch sa u zvierat vyvinie hypercholesterolémia, ktorá postupne dosahuje veľmi vysoké čísla (až 2000 mg% pri rýchlosti 150 mg%). V aorte sa podľa NN Anichkova (1947) odohrávajú nasledujúce zmeny. Na vnútornom povrchu nádoby sa 3 až 4 týždne po začiatku experimentu objavia škvrny a pruhy oválneho tvaru, trochu vyvýšené. Postupne (do 60-70 dní) sa vytvárajú pomerne veľké plaky, ktoré vyčnievajú do lúmenu cievy. Objavujú sa predovšetkým v počiatočnej časti aorty nad chlopňami a v oblúku pri ústiach veľkých krčných tepien; ďalej sa tieto zmeny šíria pozdĺž aorty kaudálnym smerom (obr. 14). Počet a veľkosť plakov

zväčšujú, navzájom sa spájajú a vytvárajú súvislé difúzne zhrubnutie steny aorty. Rovnaké plaky sa tvoria na chlopniach ľavého srdca, v koronárnych, karotických a pľúcnych tepnách. Ukladanie lipoidov sa pozoruje v stenách centrálnych tepien sleziny a v malých tepnách pečene.

T.A. Sinitsyna (1953), na získanie aterosklerózy hlavných vetiev koronárnych artérií srdca, kŕmil králiky dlhú dobu vaječnými žĺtkami (0,2 - 0,4 g cholesterolu), rozpustenými v mlieku, a súčasne im injekčne podával 0,3 g tiouracilu. Každý králik dostal počas experimentu 170-200 žĺtkov. Mikroskopické vyšetrenie vo včasnom štádiu odhalí difúznu akumuláciu lipoidov v intersticiálnej substancii steny aorty, najmä medzi vnútornou elastickou platničkou a endotelom. Následne vznikajú veľké bunky (polyblasty a makrofágy), ktoré hromadia lipoidné látky vo forme dvojlomných kvapiek cholesterolu-éteru. Zároveň sa v miestach ukladania lipoidov tvorí veľké množstvo elastických vlákien, ktoré sa odštiepujú od vnútornej elastickej platničky a nachádzajú sa medzi bunkami obsahujúcimi lipoidy. Čoskoro sa na týchto miestach objavia najskôr prskollagén a potom kolagénové vlákna (N.N. Anichkov, 1947).

V štúdiách realizovaných pod vedením N. N. Anichkova sa skúmal aj proces spätného vývoja vyššie opísaných zmien. Ak sa po 3-4 mesiacoch kŕmenia zvierat cholesterolom preruší jeho podávanie, dochádza k postupnej resorpcii lipoidov z plakov, ktorá u králikov trvá viac ako dva roky. V miestach veľkej akumulácie lipoidov sa tvoria vláknité plaky s lipoidnými zvyškami a kryštálmi cholesterolu v strede. Pollack (1947) a Fistbrook (1950) uvádzajú, že s nárastom hmotnosti zvierat sa zvyšuje závažnosť experimentálnej aterosklerózy.

Králiky zostali po dlhú dobu jediným živočíšnym druhom, ktorý sa používal na získanie experimentálnej aterosklerózy. Je to spôsobené tým, že napríklad u psov pri kŕmení aj veľkým množstvom cholesterolu jeho hladina v krvi mierne stúpa a nedochádza k rozvoju aterosklerózy. Steiner a spol.(1949) však ukázali, že ak spojíte kŕmenie psov s cholesterolom so znížením funkcie štítnej žľazy, dochádza k výraznej hypercholesterolémii a vzniku aterosklerózy. Psom sa podával tiouracil denne počas 4 mesiacov s jedlom vo zvyšujúcich sa množstvách: počas prvých dvoch mesiacov po 0,8 g, počas tretieho mesiaca po 1 g a potom po 1,2 g. 10 g cholesterolu, ktorý bol predtým rozpustený v éteri a zmiešané s jedlom; krmivo sa podávalo psom po odparení éteru. Kontrolné experimenty ukázali, že dlhodobé podávanie tiouracilu samotného alebo cholesterolu psom nespôsobuje významnú hypercholesterolémiu (4-00 mg% pri dávke 200 mg%) ani aterosklerózu. Súčasne pri súčasnom podávaní tiouracilu a cholesterolu psom vzniká ťažká hypercholesterolémia (až 1200 mg %) a ateroskleróza.

Topografia aterosklerózy u psov v oveľa väčšej miere ako u králikov sa podobá ľudskej ateroskleróze: najvýraznejšie zmeny v brušnej aorte, výrazná ateroskleróza veľkých vetiev koronárnych artérií srdca s výrazným zúžením priesvitu cievy ( Obr. 15), mnohé plaky sú viditeľné v tepnách mozgu ... Huper (1946) injekčne podával psom denne do krčnej žily 50 ml roztoku hydroxycelulózy s rôznou viskozitou (5- až 6-krát vyššou ako viskozita plazmy) a pozoroval rozvoj ateromatózy a dystrofických zmien v strednej membráne v aorte. Pri hodnotení závažnosti experimentálnej aterosklerózy je potrebné vziať do úvahy pokyny Lindsay a kol., (1952, 1955), ktorí zistili, že staré psy a mačky majú často významnú artériosklerózu. Lipoidné usadeniny sú zvyčajne nevýznamné a cholesterol sa v nich nenachádza.

Bregdon a Boyle (1952) získali aterosklerózu u potkanov intravenóznymi injekciami lipoproteínov získaných zo séra králikov kŕmených cholesterolom. Tieto lnoproteíny sa izolovali, purifikovali a koncentrovali centrifugáciou pri 30 000 ot./min. so zvýšenou koncentráciou soli v sére až na 1063. Prebytok soli sa potom odstránil dialýzou. Pri každodenných opakovaných injekciách sa u potkanov vytvárajú významné lipoidné usadeniny v stene aorty a veľkých ciev. Chaikov, Lindsay, Lorenz (1948), Lindsay, Nichols a Chaikov (1,955) dostali aterosklerózu u vtákov, pričom im pravidelne subkutánne podávali 1-2 tablety dietylstilbestrolu (každá tableta obsahovala 12-25 mg liečiva); skúsenosť trvala 10 mesiacov.

Rozvíjajúca sa ateroskleróza z hľadiska topografie a morfogenézy sa nelíšila od cholesterolu. Podľa týchto autorov sa ateroskleróza u vtákov dá získať bežným spôsobom - kŕmením cholesterolom.

Reprodukcia aterosklerózy u opíc často končila neúspechom (Kawamura, cit. podľa Manna a kol., 1953). Mannovi a kol., (1953) sa však podarilo dosiahnuť výraznú aterosklerózu aorty, karotických a stehenných tepien u opíc podobných ľuďom, keď boli 18-30 mesiacov kŕmené potravou bohatou na cholesterol, ktorá však obsahovala nedostatočné množstvo metionínu resp. cystín. Denné pridávanie 1 g metionínu do jedla zabraňuje rozvoju aterosklerózy. Už skôr Reinhart a Greenberg (1949) dostali aterosklerózu u opíc, keď boli držané 6 mesiacov na diéte s vysokým cholesterolom a nedostatočným množstvom pyridoxínu.

Rozvoj experimentálnej aterosklerózy možno urýchliť, alebo naopak spomaliť. Viacerí vedci pozorovali intenzívnejší rozvoj aterosklerózy pri kŕmení zvierat cholesterolom v kombinácii s experimentálnou hypertenziou. Takže, N.N. Anichkov (1914) ukázal, že keď sa lúmen brušnej aorty zúži o V"-2/3, výrazne sa urýchli rozvoj aterosklerózy u králikov, ktorí dostávajú 0,4 g cholesterolu denne. Podľa N.I. Anichkov, intenzívnejšie aterosklerotické zmeny sa môžu dosiahnuť u zvierat, keď sú kŕmené cholesterolom a dennými intravenóznymi injekciami 1: 1000 roztoku adrenalínu v množstve 0,1-0,15 ml počas 22 dní. Wheelens (1943) podával králikom 1 g cholesterolu denne (6 dní v týždni) a ukladal ich do vzpriamenej polohy na 5 hodín (aj 6-krát do týždňa), čo viedlo k zvýšeniu krvného tlaku o 30 – 40 %. Skúsenosť trvala 4 až 12 týždňov; u týchto zvierat bola ateroskleróza oveľa výraznejšia ako u kontrol (ktoré boli kŕmené iba cholesterolom alebo boli umiestnené vo vzpriamenej polohe).

V.S. Smolensky (1952) pozoroval intenzívnejší rozvoj aterosklerózy u králikov s experimentálnou hypertenziou (zúženie brušnej aorty; obalenie jednej obličky gumovým puzdrom a odstránenie druhej).

Esther, Davis a Friedman (1955) pozorovali zrýchlenie rozvoja aterosklerózy u zvierat, keď boli kŕmené cholesterolom v kombinácii s opakovanými injekciami epinefrínu. Králikom sa denne intravenózne podával adrenalín v dávke 25 mg na kg telesnej hmotnosti. Po 3-4 dňoch sa táto dávka zvýšila na 50 mg na 1 kg telesnej hmotnosti. Injekcie trvali 15 až 20 dní. Počas rovnakého obdobia zvieratá dostali 0,6-0,7 g cholesterolu. Pokusné zvieratá vykazovali výraznejšie ukladanie lipoidov v aorte v porovnaní s kontrolnými králikmi, ktoré dostávali iba cholesterol.

Schmidtman (1932) ukázal význam zvýšenej funkčnej záťaže srdca pre rozvoj aterosklerózy koronárnych artérií. Potkany dostávali denne s jedlom 0,2 g cholesterolu rozpusteného v rastlinnom oleji. Súčasne boli zvieratá nútené každý deň behať na bežiacom páse. Skúsenosť trvala 8 mesiacov. Kontrolné potkany dostávali cholesterol, ale nebehali v bubne. U pokusných zvierat bolo srdce asi 2-krát väčšie ako u kontrol (hlavne v dôsledku hypertrofie steny ľavej komory); mali obzvlášť výraznú aterosklerózu koronárnych artérií: na niektorých miestach bol lúmen cievy takmer úplne uzavretý aterosklerotickým plátom. Stupeň rozvoja aterosklerózy v aorte u pokusných a kontrolných zvierat bol približne rovnaký.

K.K. Maslova (1956) zistila, že pri kŕmení králikov cholesterolom (0,2 mg denne počas 115 dní) v kombinácii s intravenóznym nikotínom (0,2 ml, 1 % roztok denne) dochádza k ukladaniu lipoidu v stene aorty v oveľa väčšej miere ako v prípadoch kde králiky prijímajú len cholesterol. KK Maslova vysvetľuje tento jav tým, že dystrofické zmeny v cievach spôsobené nikotínom prispievajú k intenzívnejšiemu hromadeniu lipoidov v ich stene. Kelly, Taylor a Huss (1952), Prior a Hartmap (1956) uvádzajú, že v oblastiach dystrofických zmien steny aorty (mechanické poškodenie, krátkodobé zmrazenie) sú aterosklerotické zmeny obzvlášť výrazné. Ukladanie lipoidov v týchto miestach zároveň odďaľuje a skresľuje priebeh regeneračných procesov v cievnej stene.

Množstvo štúdií preukázalo spomaľujúci účinok niektorých látok na rozvoj experimentálnej aterosklerózy. Takže pri kŕmení králikov cholesterolom a súčasnom podávaní tyreoidínu je rozvoj aterosklerózy oveľa pomalší. V.V.Tatarsky a V.D. Ziperling (1950) zistil, že tyreoidín podporuje rýchlejší reverzný vývoj ateromatóznych plátov. Králikom sa injekčne podávalo denne cez hadičku do žalúdka 0,5 g cholesterolu (0,5 % roztok v slnečnicovom oleji). Po 3,5 mesiacoch kŕmenia cholesterolom sa začal používať tyreoidín: denné podávanie do žalúdka cez hadičku 0,2 g tyreoidínu vo forme vodnej emulzie počas 1,5-3 mesiacov. U týchto králikov, na rozdiel od kontrolných králikov (ktorým nebol podávaný tyreoidín), došlo k prudšiemu poklesu hypercholesterolémie a k výraznejšiemu spätnému rozvoju ateromatóznych plátov (menej lipoidov v stene aorty, uložených najmä vo forme veľkých kvapky). Cholín má tiež retardačný účinok na rozvoj aterosklerózy.

Steiner (1938) podával králikom po dobu 3-4 mesiacov 3x týždenne s potravou 1g cholesterolu. Okrem toho sa zvieratám denne injekčne podávalo 0,5 g cholínu vo forme vody

emulzie. Ukázalo sa, že cholias výrazne oneskoruje rozvoj aterosklerózy. Ukázalo sa tiež, že pod vplyvom cholínu dochádza k rýchlejšiemu spätnému vývoju ateromatóznych plátov (zavedenie cholínu králikom do 60 dní po predbežnom 110-dňovom kŕmení králikov cholesterolom). Staperove údaje potvrdili Bauman a Rush (1938), Morrisop a Rossi (1948). Horlick a Duff (1954) zistili, že pod vplyvom heparínu sa rozvoj aterosklerózy výrazne oneskoruje. Králiky dostávali 1 g cholesterolu denne s jedlom počas 12 týždňov. Súčasne zvieratá dostávali denne intramuskulárne injekcie 50 mg heparínu. U liečených králikov bola ateroskleróza výrazne menej výrazná ako u kontrolných králikov, ktorí nedostávali heparín. Podobné výsledky už skôr získali Konstanides a ďalší (1953). Stumpf a Wheelens (1954), Gordon, Kobernik a Gardner (1954) zistili, že kortizón spomaľuje rozvoj aterosklerózy u králikov, ktorí dostávajú cholesterol.

Duff a Mac Millap (1949) ukázali, že vývoj experimentálnej aterosklerózy je výrazne oneskorený u králikov s alloxánovým diabetom. Králikom bol intravenózne podaný 5 % vodný roztok alloxipu (v dávke 200 mg na 1 kg telesnej hmotnosti). Po 3-4 týždňoch (keď sa objavil obraz cukrovky) sa zvieratám podával cholesterol počas 60-90 dní (celkovo dostali 45-65 g cholesterolu). U týchto zvierat bola v porovnaní s kontrolami (bez diabetu) ateroskleróza oveľa menej výrazná. Niektorí vedci pozorovali prudké spomalenie rozvoja aterosklerózy u králikov, ktorí boli súčasne s príjmom cholesterolu vystavení všeobecnej expozícii ultrafialovým lúčom. U týchto zvierat sa obsah cholesterolu v sére mierne zvýšil.

Niektoré vitamíny majú významný vplyv na vznik aterosklerózy. Ukázalo sa (A.L. Myasnikov, 1950; G.I. Leibman a E.M. Berkovsky, 1951), že pod vplyvom kyseliny askorbovej sa vývoj aterosklerózy oneskoruje. G.I. Leibman a E.M. Berkovský bol podávaný králikom denne počas 3 mesiacov v dávke 0,2 g cholesterolu na 1 kg telesnej hmotnosti. Súčasne zvieratá dostávali denne kyselinu askorbovú (0,1 g na 1 kg telesnej hmotnosti). U týchto zvierat bola ateroskleróza menej výrazná ako u zvierat, ktoré kyselinu askorbovú nedostávali. U králikov dostávajúcich cholesterol (0,2 g denne počas 3-4 mesiacov) v kombinácii s vitamínom D (10 000 jednotiek denne počas celého experimentu) sa rozvoj aterosklerotických zmien zintenzívňuje a urýchľuje (A.L. Myasnikov, 1950).

Podľa Bragera (1945) vitamín E prispieva k intenzívnejšiemu rozvoju experimentálnej cholesterolovej aterosklerózy: králikom 3-krát týždenne počas 12 týždňov S žobrákom sa podával 1 g cholesterolu; Zároveň boli podané intramuskulárne injekcie 100 mg vitamínu E. Všetky brušká HI1IX mali vyššiu hypercholesterolémiu a závažnejšiu aterosklerózu v porovnaní s králikmi, ktoré vitamín E nedostávali.

CÉVNE OCHORENIA ROZVÍJAJÚCE SA PRI PORUCHÁCH VÝŽIVY. ZMENY V AORTE PRI HYPERVITAMINÓZE D

Pod vplyvom veľkých dávok vitamínu D sa u zvierat vyvíjajú výrazné zmeny vo vnútorných orgánoch a veľkých cievach. Kreitmire a Hintzelman (1928) pozorovali významné vápenaté usadeniny v strednej membráne aorty u mačiek, ktorým sa podávalo 28 mg ožiareného ergosterolu denne s jedlom počas jedného mesiaca (obr. 16). Nekrotické zmeny v strednej výstelke aorty s následnou kalcifikáciou zistil u potkanov Dagide (1930), ktorý denne podával zvieratám 10 mg ožiareného ergosterolu v 1 % roztoku v olivovom oleji. Meessen (1952) podával králikom 5000 cd počas troch týždňov na získanie nekrózy strednej aortálnej membrány. vitamín Dg. Za týchto podmienok prebiehali iba mikroskopické zmeny. Gilman a Gilbert (1956) objavili dystrofiu strednej aortálnej membrány u potkanov, ktorým bolo podávaných 100 000 jednotiek počas 5 dní. vitamínu D na 1 kg telesnej hmotnosti. Cievna lézia bola intenzívnejšia u zvierat, ktorým sa podávalo 40 μg tyroxínu počas 21 dní pred podaním vitamínu D.

NEKRÓZA AORTY A ANEURYZMY U POKRÝS

Pri dlhodobom kŕmení potkanov potravou obsahujúcou veľké množstvo hrachu sa vyvíjajú degeneratívne zmeny na stene aorty s postupnou tvorbou aneuryzmy. Bechkhyubur a Lelich (1952) kŕmili biele potkany potravou, z ktorej 50 % tvoril mletý alebo hrubý, nespracovaný hrášok. V strave boli okrem hrachu aj kvasnice, kazeín, olivový olej, soľná zmes a vitamíny. Zvieratá boli na diéte 27 až 101 dní. U 20 z 28 experimentálnych potkanov sa v oblasti oblúka aorty vyvinula aneuryzma aorty. U niektorých zvierat aneuryzma praskla s vytvorením masívneho hemotoraxu. Histologické vyšetrenie odhalilo edém strednej výstelky aorty, deštrukciu elastických vlákien a drobné krvácania. Neskôr sa vyvinula fibróza steny s tvorbou aneuryzmatickej expanzie cievy. Panseti a Baird (1952) v podobných experimentoch pozorovali vývoj aneuryzmy v hrudnej aorte u 6 z 8 experimentálnych potkanov. Spolu s tým sa u zvierat vyvinula kyfoskolióza, ktorá vznikla v dôsledku dystrofických zmien v telách stavcov. Päť zvierat zomrelo po 5-9 týždňoch na prasknutie aneuryzmy a masívny hemotorax.

Walter a Wirtschaftsr (1956) chovali mladé potkany (21 dní po narodení) na 50%-nej strave hrachu; okrem toho strava obsahovala: kukuricu, kazeín, sušené mlieko, soľ, vitamíny. To všetko bolo zmiešané a dané zvieratám. Posledne menované boli usmrtené 6 týždňov po začiatku experimentu. Na rozdiel od vyššie uvedených experimentov sa pri týchto experimentoch pozorovalo poškodenie portov nielen v oblasti oblúka, ale aj v iných oddeleniach vrátane brušnej. Histologicky sa cievne zmeny vyskytli v dvoch paralelných procesoch: dystrofia a rozpad elastického rámu na jednej strane a fibróza na strane druhej. Zvyčajne boli pozorované viaceré intramurálne hematómy. K významným zmenám došlo aj v pľúcnej tepne a koronárnych tepnách srdca. Niektoré potkany uhynuli v dôsledku prasknutia aneuryzmy; v mnohých prípadoch mala delaminácia charakter. Lulich (1956) ukázal, že opísané zmeny v aorte sú spôsobené P-amipopropiopitritom obsiahnutým v hrachu.

NEKROTICKÁ ARTERITÍDA

Holman (1943, 1946) ukázal, že u psov kŕmených stravou bohatou na tuk vedie zlyhanie obličiek k rozvoju nekrotizujúcej arteritídy. Zvieratá dostali krmivo, v ktorom 32 dielov bola hovädzia pečeň, 25 dielov - trstinový cukor, 25 dielov - škrobové zrná, 12 dielov - olej, 6 dielov - rybí tuk; do tejto zmesi sa pridal kaolín, soľ a paradajková šťava. Experiment trval 7-8 týždňov (čas potrebný na nástup vaskulárnych lézií v prítomnosti zlyhania obličiek). Zlyhanie obličiek sa dosiahlo rôznymi spôsobmi: obojstrannou nefrektómiou, subkutánnymi injekciami 0,5 % vodného roztoku dusičnanu uránového v dávke 5 mg na 1 kg hmotnosti zvieraťa alebo intravenóznym podaním 1 % vodného roztoku chloridu ortutnatého v dávke 3 mg na 1 kg hmotnosti zvieraťa. U 87 % pokusných zvierat sa vyvinula nekrotizujúca arteritída. V srdci bola pozorovaná výrazná parietálna endokarditída. Nekrotizujúca arteritída sa vyvinula len pri kombinácii kŕmenia zvierat potravou bohatou na tuk, so zlyhaním obličiek. Každý z týchto faktorov, braný samostatne, nespôsobil významné poškodenie stien nádob.

CIEVNE ZMENY VZNIKAJÚCE PRI NEDOSTATOČNOM MNOŽSTVE PROTEÍNOV V POTRAVINÁCH

Hanmap (1951) podával bielym myšiam potravu s nasledujúcim zložením (v percentách): sacharóza - 86,5, kazeín - 4, soľná zmes - 4, rastlinný olej - 3, rybí olej - 2, cystín - 0,5; bezvodá zmes glukózy - 0,25 (0,25 g tejto zmesi obsahovalo 1 mg riboflavínu), kyselina para-aminobenzoová - 0,1, inozitol - 0,1. K 100 g stravy sa pridali 3 mg pantotenátu vápenatého, 1 mg niacínu, 0,5 mg kyseliny chlorovodíkovej tiamínu a 0,5 mg kyseliny chlorovodíkovej pyridoxínu. Myši uhynuli v priebehu 4 až 10 týždňov. Pozorovalo sa poškodenie aorty, pľúcnej tepny a krvných ciev srdca, pečene, pankreasu, pľúc a sleziny. V ranom štádiu sa v intime ciev objavila bazofilná homogénna látka, ktorá vytvorila plaky trochu vyčnievajúce pod endotelom: došlo k fokálnemu poškodeniu strednej membrány s deštrukciou elastických vlákien. Proces sa skončil rozvojom artériosklerózy s ukladaním vápna v oblastiach dystrofie.

DYSTROFICKO-SKLEROTICKÉ ZMENY V CIEVACH ZÍSKANÝCH S POMOCOU URČITÝCH CHEMIKÁLIÍ

(adrenalín, nikotín, tyramín, difterický toxín, dusičnany, vysokomolekulárne proteíny)

Josue (1903) ukázal, že po 16-20 intravenóznych injekciách adrenalínu sa u králikov vyvinú výrazné degeneratívne zmeny hlavne na membráne strednej aorty, končiace sklerózou a v niektorých prípadoch aj dilatáciou aneuryzmy. Toto pozorovanie bolo neskôr potvrdené mnohými výskumníkmi. Erb (1905) injekčne podával králikom do ušnej žily každé 2-3 dni 0,1-0,3 mg epinefrínu v 1% roztoku; injekcie pokračovali týždne a dokonca mesiace. Rzhenkhovsky (1904) podával králikom intravenózne 3 kvapky roztoku epinefrínu 1: 1000; injekcie sa robili denne, niekedy v intervaloch 2-3 dní počas 1,5-3 mesiacov. BD Ivanovsky (1937) na získanie sklerózy adrenalínu podávaný králikom intravenózne denne alebo každý druhý deň roztok adrenalínu I: 20 000 v množstve 1 až 2 ml. Králiky dostali až 98 injekcií. V dôsledku dlhotrvajúcich injekcií adrenalínu sa prirodzene vyvíjajú sklerotické zmeny v aorte a veľkých cievach. Postihnutá je najmä stredná membrána, kde vzniká ložisková nekróza, následne vznik fibrózy a kalcifikácia nekrotických oblastí.

Ziegler (1905) pozoroval v niektorých prípadoch zhrubnutie intimy, niekedy výrazné. Môže dôjsť k aneuryzmatickému zväčšeniu aorty. Oblasti sklerózy a kalcifikácie sa stanú viditeľnými makroskopicky po 16-20 injekciách. Významné sklerotické zmeny sa vyvíjajú aj v renálnych (Erb), iliakálnych, karotických (Zieglerových) artériách a vo vnútroorganických vetvách veľkých arteriálnych kmeňov (BD Ivanovskiy). B.D. Ivanovský ukázal, že pod vplyvom viacerých injekcií adrenalínu dochádza k významným zmenám v malých tepnách a dokonca aj v kapilárach. Stena posledne menovaného zhrubne, sklerotizuje a kapiláry už nepriľnú, ako je bežné, priamo k parenchýmovým prvkom orgánov, ale sú od nich oddelené tenkou vrstvou spojivového tkaniva.

Walter (1950), ktorý študoval vaskulárne zmeny po intravenóznom podaní vysokých dávok adrenalínu psom (8 ml roztoku 1:1000 každé 3 dni), ukázal, že už v priebehu 10 dní a ešte skôr boli pozorované mnohopočetné krvácania v strednej membráne hrudnej aorty a tiež v malých tepnách srdca, žalúdka, žlčníka, obličiek, hrubého čreva. Existuje fibrinoidná nekróza strednej membrány a ťažká paparteritída s perivaskulárnou bunkovou reakciou. Predbežné podanie diabiamínu zvieratám zabráni rozvoju týchto zmien.

Davis a Uster (1952) ukázali, že pri kombinácii intravenóznych injekcií králikom ep a e fri a a (25 mg na 1 kg telesnej hmotnosti) a tyroxínu (subkutánne podávanie denne v dávke 0,15 mg na 1 kg telesnej hmotnosti) zmeny v aorte sú obzvlášť výrazné. Pri denných subkutánnych injekciách 500 mg kyseliny askorbovej zvieratám sa rozvoj artériosklerózy výrazne oneskoruje. Predbežné odstránenie štítnej žľazy inhibuje rozvoj artériosklerózy spôsobenej epinefrínom (adrenalínom). Huper (1944) pozoroval dystrofické zmeny v strednej výstelke aorty a veľkých ciev s kalcifikáciou a tvorbou cýst u psov, ktoré prežili g a výdrž. Histamín sa podával subkutánne v zmesi s včelím voskom a minerálnym olejom na báze 15 mg/1 kg hmotnosti zvieraťa (pozri získanie žalúdočných vredov histamínom).

Už skôr Huper a Lapdsberg (1940) ukázali, že v prípade otravy psov sa podáva eritrol tetranitrát O"m (orálne podávanie počas 32 týždňov denne, vo zvyšujúcich sa dávkach od 0,00035 g do 0,064 g) alebo dusík mn a em (zavedenie cez v ústach niekoľko týždňov, 0,4 g denne), dochádza k výrazným degeneratívnym zmenám, hlavne v strednej membráne pľúcnice a jej vetvách. stredná výstelka aorty s následnou kalcifikáciou a tvorbou cýst u psov, ktorým bol do žily 5-krát týždenne injekčne podávaný roztok metylcell golózy vo zvyšujúcom sa množstve (od 40 do 130 ml).Pokus trval šesť mesiacov ...

Zmeny v aorte podobné tým, ktoré sú opísané vyššie, možno získať u zvierat opakovanými injekciami n a kotínu. A. 3. Kozdoba (1929) injekčne podával králikom do ušnej žily každý deň počas 76-250 dní 1-2 ml roztoku nikotínu (priemerná denná dávka - 0,02-1,5 mg). Bola pozorovaná srdcová hypertrofia a dystrofické zmeny v tepne sprevádzané aneuryzmatickou dilatáciou. Všetky zvieratá vykazovali významné zvýšenie nadobličiek. E. A. Zhebrovsky (1908) objavil nekrózu strednej výstelky aorty s následnou kalcifikáciou a sklerózou u králikov, ktoré denne na 6-8 hodín umiestňoval pod kapotu naplnenú tabakovým dymom. Experimenty pokračovali 2-6 mesiacov. KK Maslova (1956) zaznamenala dystrofické zmeny v stene aorty po denných intravenóznych injekciách 0,2 ml 1% roztoku nikotínu u králikov počas 115 dní. Bailey (1917) dostával výrazné dystrofické zmeny v strednej výstelke aorty a veľkých artérií s nekrózou a mnohopočetnými aneuryzmami s dennými intravenóznymi injekciami 0,02-0,03 ml toxínu u králikov počas 26 dní.

Duff, Hamilton a Mzgper (1939) pozorovali rozvoj nekrotizujúcej arteritídy u králikov pod vplyvom viacnásobných injekcií tyramínu (intravenózne podanie 50-100 mg liečiva vo forme 1% roztoku). Experiment trval 106 dní. U väčšiny králikov došlo k výrazným zmenám v aorte, veľkých tepnách a arteriolách obličiek, srdca a mozgu, pričom v každom jednotlivom prípade boli zvyčajne postihnuté cievy nie všetkých troch orgánov, ale jedného. V aorte prebehla nekróza strednej membrány, často veľmi významná; podobné zmeny boli zistené vo veľkých cievach obličiek. V srdci, obličkách a mozgu bola pozorovaná arteriolyekróza, po ktorej nasledovala hyalinóza cievnej stepi. U niektorých králikov sa v súvislosti s arteriolyekrózou vyvinulo masívne cerebrálne krvácanie.

Aortitída získaná mechanickou tepelnou a infekčnou léziou cievnej steny

S cieľom študovať vzorce priebehu zápalových a reparačných procesov v stene aorty niektorí vedci používajú mechanické poškodenie cievy. Prpor a Hartman (1956) po otvorení brušnej dutiny oddelia aortu a poškodia steiku prepichnutím hrubou ihlou s ostrým, ohnutým koncom. Baldwin, Taylor a Hess (1950) poškodzujú stenu aorty krátkodobým vystavením nízkym teplotám. Za týmto účelom sa v brušnej oblasti odkryje aorta a na stenu sa priloží úzka trubica, do ktorej sa vpúšťa oxid uhličitý. Stena aorty je zmrazená v priebehu 10-60 sekúnd. Na konci druhého týždňa po zmrazení sa v dôsledku nekrózy mozgových blán vyvinie aneuryzma aorty. V polovici prípadov dochádza ku kalcifikácii poškodených oblastí. Často sa vyskytuje metaplaetická tvorba kostí a chrupaviek. Ten sa objaví najskôr štvrtý týždeň po poškodení a kosť - po 8 týždňoch. A. Soloviev (1929) kauterizoval stenu aorty a krčných tepien rozžeraveným termočlánkom. Schlichter (1946) Na získanie nekrózy aorty u psov spálil jej stenu horákom. Výrazné zmeny na vnútornej membráne (krvácanie, nekróza) v niektorých prípadoch spôsobili prasknutie cievy. Ak sa tak nestalo, rozvinula sa skleróza steny s kalcifikáciou a tvorbou malých dutín. N. Andrievich (1901) poranil stenu tepien, popálil ju roztokom dusičnanu strieborného; v niektorých prípadoch sa potom postihnutý úsek obalil celoidínom, ktorý dráždením cievnej steny zvýrazňoval poškodenie.

Talke (1902) dostal hnisavý zápal cievnej steny zavedením stafylokokovej kultúry do okolitého tkaniva. Croc (1894) už skôr ukázal, že hnisavá arteritída sa vyskytuje, keď sa kultúra mikroorganizmov podáva zvieratám intravenózne iba vtedy, ak je predtým poškodená stena cievy. F.M. Khaletskaya (1937) študoval dynamiku vývoja infekčnej aortitídy, ktorá sa vyvíja v dôsledku prechodu zápalového procesu z pleury na stenu aorty. U králikov bola fistulová trubica zavedená do pleurálnej dutiny medzi 6. a 7. rebrá. Otvor zostal otvorený 3 až 5 dní av niektorých experimentoch tri mesiace. Po 3-5 dňoch sa vyvinula vláknitá-hnisavá pleuristika a pleurálny empyém. Často sa pozoroval prechod procesu na stenu aorty. V druhom prípade sa pôvodne objavila nekróza strednej membrány; vyvinuli sa skôr, ako sa zápalový proces rozšíril do aorty a podľa F.M. Khaletskaya, boli spôsobené vazomotorickými poruchami v dôsledku intoxikácie (primárna dystrofia a nekróza strednej membrány). Ak sa hnisanie rozšírilo do aorty, vonkajšia, stredná a vnútorná membrána boli postupne zapojené do zápalového procesu s rozvojom sekundárnych nekrotických zmien.

Proces sa teda skončil sklerózou cievnej steny s tvorbou malých a veľkých jaziev. Vo vnútornej membráne bola pozorovaná tromboarteritída končiaca zhrubnutím a sklerózou intimy.

Literatúra:

Aničkov H.H. Beitr. patol. Anat. u. allg. Pathol .. Bel 56,1913.

Aničkov II.II. Verh. d. nemecky, patol. Ges., 20: 149, 1925.

Aničkov II.H. Novinky, hpr. i potrap, kraj, t. 16-17 kn 48-49 str. 105, 1929.

Aničkov II.P. Experimentálny výskum aterosklerózy. V knihe: L. I. Abrikosov. Súkromný patológ, anatómia t 2 str. 378, 1947.

Valdes A.O. Arch. patológ., 5,1951.

Valker F.I. Experimentálne údaje o flebitíde, trombóze a embólii. So. diela, sídliskový vak. 40. výročie činnosti V. N. Shevkunenka, L., 1937.

Vartapetov B.L. doktor. prípad, 1. 4. 3. 1941.

B.L. Vartapetov doktor. prípad. 11 - 12 848, 1946.

Vinogradov S.A. Arch. patológ, 2, 1950.

Vinogradov S.A. Arch. patológ, 1, 1955.

Vinogradov S.A. Bull. exp. bpol. a med., 5,1956.

Višnevskaja O. II. Vses. conf. patológ. Abstrakty, L. 1954.

Abstrakt Téma: Experimentálna ateroskleróza Plán: 1. Úvod: Experimentálna ateroskleróza 2. Cievne lézie, ktoré vznikajú pri poruchách výživy 3. Zmeny na aorte s hypervitaminózou D 4.