На основе антител и определения показателей их концентрации в плазме крови происходит диагностика многих состояний организма. Одним из показателей является антинуклеарный фактор, который объединяет под своим названием группу антител разного рода, направленных против клеточных составляющих. При выявлении подобного фактора есть смысл говорить об аутоиммунном заболевании, особенно системной красной волчанке.
Хоть тест является универсальным для определения многих системных патологий организма, в частности, такого серьезного заболевания, как красная волчанка, с ним связаны некоторые интересные особенности. Применять его стали с 1957 года, но широкое распространение методика получила только с конца 80-х годов прошлого столетия. Стоит отметить, что наличие имплантов в груди повышает титр антиядерных антител, что наблюдается от 5% до 55% всех случаев у пациентов женского пола.
Что собой представляют
Комплекс антител, который включает в себя антинуклеарный фактор, представлен более чем 200 показателями, чаще всего это иммуноглобулины класса G, в редких случаях IgМ и IgА. Появляются они при патологиях, характеризующихся аутоиммунным или ревматическим характером поражения в результате нарушенной толерантности иммунитета к собственным тканям.
При некоторых состояниях иммунитет направляет все свои силы не на борьбу с чужеродными факторами, а против собственных тканей, клеток, чего в норме не должно происходить. Нарушается толерантность к некоторым клеткам, на которые направлена агрессия, развивается аутоиммунное заболевание. Антитела, вырабатываемые в процессе заболевания, или комплексы носят название аутоиммунных.
У многих людей в небольшом количестве есть аутоантитела, но это не является признаком заболевания. Только серьезный сбой в иммунитете способен привести к тому, что возрастает уровень аутоантител, это является поводом к тому, чтобы выставить соответствующий диагноз. Но его еще должны дополнить остальные исследования, в частности, крови, мочи, а также клинические проявления.
У человека, страдающего системной красной волчанкой, АНФ повышается еще до того, как разовьются первые симптомы. Из всех заболевших 95% имеют в крови повышенный антинуклеарный фактор, который дополняется симптомами болезни, что, в свою очередь, подтверждает диагноз.
Механизм появления фактора
Есть несколько причин, способствующих развитию заболевания у человека. Происходит все в определенной последовательности:
- Под влиянием ультрафиолета солнца на кожные покровы запускаются процессы заранее генетически запрограммированной гибели клеток, которая носит название апоптоза. Это нормальная реакция организма, однако при болезнях системного характера усиленно начинают мигрировать лимфоциты.
- Ранее недоступные, невидимые составляющие клеток становятся доступны для иммунитета, в частности, клеточная оболочка, ядрышки, гистоны, оболочка ядра, другие. Они становятся оголенными, а макрофаги вместо утилизации подобного материала передают информацию далее, провоцируя иммунный ответ организма.
- На сигнал, подаваемый макрофагом, отвечают В-лимфоциты, вырабатывающие антиядерные антитела, они вступают во взаимосвязь с соответствующим антигеном, образуя комплекс.
- Комплексы откладываются на мембранах органов, тканей, обильно это происходит на поверхности стенки сосуда изнутри, активируется комплемент или местный ответ иммунитета.
- Повреждение нарушает функцию органа.
Анализ, показания
Есть несколько показаний, когда назначается анализ на антинуклеарные антитела. Прежде всего, это подозрение на развитие системной красной волчанки, синдрома Шегрена. Если есть одно системное заболевание, врачом подозревается другое, к примеру, на фоне волчанки может развиться антифосфолипидный синдром.
Симптомы, когда стоит сдать анализ
Всегда есть симптомы, появление которых должно насторожить человека, заставить его пройти обследование. Врач должен сориентировать пациента, если есть:
- Артрит, проявляющийся воспалением сустава, с болью, отеками, нарушенной подвижностью, покраснением кожи над ним, повышением температуры.
- Не помешает обследование при перикардите, плеврите, причина которых неизвестна.
- Поражение почек, связанное с нарушением состояния иммунной системы, появление изменений в анализе мочи, в частности, белка, крови.
- Еще одним показанием является гемолитический вариант анемии, при которой в большом количестве разрушаются эритроциты, повышается уровень билирубина в крови, анализе мочи.
- Показанием является понижение уровня тромбоцитов, нейтрофилов в формуле лейкоцитов.
- Проявления на коже в виде сыпи, утолщения, которые возникают после пребывания на солнце.
- Синдром Рейно, при котором периодически свой цвет меняют пальцы на стопах, кистях. Они становятся бледными, синими или краснеют, нарушается чувствительность, беспокоит боль.
- Показанием является нехарактерная симптоматика со стороны неврологии или психиатрии.
- Если повышается температура, развивается усталость, понижается масса тела, увеличиваются лимфатические узлы.
Разновидности исследования
Есть две методики, которые позволяют определить антинуклеарные антитела в крови. Первая носит название непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии. Линия клеток для нее получена из аденокарциномы в области гортани. Если есть антинуклеарные антитела, они связываются со специфическими антигенами, после чего добавляются метки, способные светиться в определенном спектре света. Под микроскопом возникает возможность определить интенсивность, тип свечения.
Эта методика признана лучшей для определения показателя антинуклеарных антител. Она имеет другое название – волчаночные тест-полосы.
Результатом исследования является титр или максимальное разведение крови, которое дает свечение. При положительном результате описывается тип свечения. Титр повышается при большом скоплении антител. Низкий титр можно считать отрицательным результатом, а при высоком можно говорить о том, что повышается концентрация антиядерных антител.
Вторым вариантом диагностики является ферментный иммунный анализ. Суть его состоит в том, что антитела, которые есть в крови, вступают в связь с соответствующим антигеном, результатом является то, что раствор меняет свой цвет.
Стоит отметить, что положительный результат анализа не является стопроцентным диагнозом. Это сигнал к тому, что требуется дополнительное обследование, которое поможет выявить заболевание в раннем периоде, назначить лечение. При отрицательном анализе на антинуклеарные факторы можно говорить об их полном отсутствии, но диагноз предполагаемой аутоиммунной патологии при этом не исключается.
В обязательно порядке нужно сдавать анализы крови на различные показатели. Однако стоит помнить, что на результат может повлиять прием некоторых лекарств, а также острые или хронические заболевания. Разобраться во всех тонкостях всегда поможет специалист, после чего установит диагноз, порекомендует, что делать дальше.
Давно я хотела написать про антинуклеарный фактор, но меня все время что-то останавливало. Почему? Ну потому что писать об этом — это пытаться объять необъятное, а краткость — явно не сестра моего таланта)))
Определение антинуклеарного фактора (АНФ) -основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител. Результатом определения АНФ является сам факт присутствия аутоантител, конечный титр разведения сыворотки и тип свечения ядра клетки.
АНФ-это не одно антитело!
Метод выявления АНФ был разработан Таном (1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (вы могли видеть это название в бланке анализа). Это клеточная линия получена из опухоли гортани человека (аденокарциномы). Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ.
В качестве субстратов могут применяться и другие клеточные линии (см карусель), однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. В англоязычной литературе иногда этот метод обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).
Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции.
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это антитела, обнаруженные иммунофлюресцентным методом.
Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного значения.
Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией (свечением) ядер клеток. При использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80, в этом случае в норме титры АНФ менее 1:160. Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 — 1:640 — 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.).
На фоне обострения заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры могут снижаться до 1:160-1:320.
Балльная оценка результатов выявления («в крестах» +++) позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным❌
Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.
ТИПЫ СВЕЧЕНИЯ ЯДРА
Тип свечения ядра — одна из ключевых характеристик при выявлении АНФ. Каждая разновидность антинуклеарных антител (ANA) имеет конкретные мишени в клетке и отражает взаимодействие сыворотки больного с структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в крови, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей антител, которые имеются в данной сыворотке. Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ.
Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, однако для клинической практики достаточно выделить основные. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.
При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина.
За счёт чего? Антитела против нуклеосом, ДНК, гистонов.
Когда? У больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией.
Часто обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.
Периферический тип свечения могут выделять отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно при СКВ, заболеваниях печени.
Гранулярный тип (крапчатый, сетчатый) является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим.
За счёт чего? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA.
Когда? СКВ, болезнь/синдром Шегрена, склеродермия, дерматомиозит/полимиозит, РА и ряда других болезней. Низкие титры (1:160-1:320) АНФ с гранулярным типом свечения могут быть в сыворотках крови у клинически здоровых лиц БЕЗ признаков системного заболевания.
Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз и требует дообследования для выявления RNPантигена.
Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции.
За счёт чего? PHК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.
Когда? Склеродермия и ее разновидности.
Центромерный тип отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-синдроме (вариант склеродермии).
Цитоплазматический тип свечения.
За счёт чего? Антитела к тРНК–синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: при аутоиммунном гепатите, при первичном билиарном циррозе.
Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения. Антитела к Scl-70 дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 — светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках.
Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70.
Иногда в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА.
Антинуклеарные антитела (АНА,ANA, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор-АНФ)- метод НИФ на линии клеток HEp-2 с определением тип свечения. - показатель аутоиммунных заболеваний соединительной ткани. АНА представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам (включая ДНК), находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза - системная красная волчанка (считается, что АНА появляются в 90% случаев СКВ, иными словами, отрицательный результат с вероятностью около 90% исключает диагноз СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.
К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани. Под термином «антинуклеарный фактор» понимают тест для выявления антинуклеарных антител с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции.
Одним из способов выявления антинуклеарного фактора в крови (антинуклеарных антител) является метод непрямой иммунофлюоресценции путем нанесения сыворотки пациента на клетки тканей перевиваемой линии человеческих клеток HEp-2 (клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие различные ядерные антигены), используя меченый конъюгат с человеческими антителами. В качестве субстратов могут применяться и другие человеческие клеточные линии, однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линий Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. Метод обнаружения АНФ был разработан Tan в 1982, применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2. Это клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на стекле. Сыворотку больного инкубируются с тканевым субстратом, при этом антинуклеарные антитела из сыворотки больного (если они присутствуют) связываются с соответствующими ядерным антигенами. Места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой антисыворотки, меченной флюоресцеином. Результаты реакции оцениваются микроскопией с помощью люминисцентного микроскопа и визуальной оценки характера свечения связавшихся антител. Среди преимуществ HEp-2 (при сравнении с криосрезами тканей животных) можно отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, экспрессирующимся только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами. При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела - AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.
При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. Таким образом, тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.
В скрининговых тестах для определения суммарных АНА обычно используется набор следующих антигенов, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP/Sm, J01, центромере B.
Основные антигены, применяющиеся в современных наборах для выявления ядерных антител класса IgG
представлены следующим набором:
- SS-A (Ro) - ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
- SS-B (La) - ядерные белки. Антитела к ним выявляются до 60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
- Scl-70 - белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
- Двухцепочечная ДНК - нативная ДНК. Антитела к ДНК наиболее специфичны при СКВ (до 80% случаев) и практически не определяются при ревматоидном артрите и склеродермии.
- RNP/Sm - Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани - т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
- Jo-1 - фермент - синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
- CENP-B (Центромера) - для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии). CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
- Hep-2 клетки - клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие много различных ядерных антигенов, включая антиген SS-A (Ro) и антигены центромеры. Антитела к Hep-2 обнаруживаются у больных с полимиозитом и дерматомиозитом до 90% случаев.
- Митохондрии (PDC) - PDC - пируватдегидрогеназный комплекс. Большая группа антимитохондриальных антител представляют собой аутоантитела, которые образовались на ферменты пируватдегидрогеназного комплекса, располагающегося в митохондриях клеток и участвующего в окислительном декарбоксилировании пирувата.
Часто АНА обнаруживаются при билиарном циррозе печени.
AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.
Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев. Появление (низкие титры) возможно при воспалительных заболеваниях, онкологии и вирусных инфекциях.
- Сравнительная частота выявления антинуклеарных антител.
Заболевание и состояние Частота выявления, % СКВ 95-100 Люпоидный гепатит (новое название - хронический аутоиммунный гепатит) 70 -80% Синдром Фелти (Felty. 1924 г.) - ревматоидный артрит + спленомегалия + нейтропения + лейкопения + лимфоаденопатия. 95-100 Системная склеродермия 75-80 Лекарственный волчаночныи синдром (гидралазин, прокаинамид, изониазид) Около 50 Синдром Шегрена (Аутоиммунное системное поражение соединительной ткани. Характеризуется вовлечением в патологический процесс желез внешней секреции, главным образом слюнных и слезных, и хроническим прогрессирующим течением). 40-75 Клинически здоровые родственники пациента с СКВ Около 25 Дискоидная красная волчанка 15-50 Хронический ювенильный артрит, ревматоидный артрит 15-30 Узелковый периартериит 15-25 Дерматомиозит и полимиозит 10-30 Ревматизм Около 5 Синдром Рейно 15-20