Синусоидални клетки (ендотелни клетки, Krafe клетки, звездни и помпи клетки), заедно със синусоид, превръщат се част от хепатоцитите, образуват функционално и хистологично устройство.
Ендотелни клетки Синусоидите се разплащат и съдържат Fenstra, образувайки етапна бариера между синусоида и пространството на диса. Клетките на равенството са прикрепени към ендотелиума.
Звездни клетки Черният дроб се намират в пространството на дисерията между хепатоцитите и ендотелните клетки. Пространството на Disse. Съдържа тъканна течност, която изтича по-нататък в лимфните съдове на порталните зони. При увеличаване на синусоидалното налягане, производството на лимфа в пространството на дисерията се увеличава, което играе роля при образуването на асцит с нарушение на венозния изтичане от черния дроб.
Клетъчната клетка съдържа специфични мембранни рецептори за лиганди, включително имуноглобулин Fc фрагмент и комплемент C3B компонент, който играе важна роля в антитела.
Клетките на Krafe се активират в обобщени инфекции или наранявания. Те специфично абсорбират ендотоксин и в отговор производството на редица фактори, например, тумор некрозис фактор, интерлевкин, колагеназа и лизозомална хидролаза. Тези фактори подобряват усещането за дискомфорт и заболяване. Токсичният ефект на ендотоксин, поради това се дължи на продуктите на секрецията на копера клетките, тъй като самата тя е нетоксична.
Клетката на чиновниците също секретира метаболитите на арахидоновата киселина, включително простагландини.
Клетката на чиновниците има специфични мембранни рецептори към инсулин, глюкагон и липопротеини. Въглехидратният рецептор N-ацетилгликозамин, маноза и галактоза може да бъде посредник в пиноцитоза на някои гликопротеини, особено лизозомни хидрола. В допълнение, той ще посредничи абсорбцията на имунните комплекси, съдържащи IgM.
В черния дроб на Fetal Krafe клетките се извършва еритроблоидната функция. Признаването и скоростта на ендоцитоза от клетки KOPECK зависят от отоплението, плазмения фибронектин, имуноглобулините и TFTSIN - естествен имуномодулационен пептид. Тези "черния дроб седи" филтрират макромолекули с различни размери. Чрез те не преминават големи, хиломикрон триглицериди и по-малки, лоши триглицериди, но остатъците, наситени с холестерол и ретинол, могат да проникнат в пространството на дисфида. Ендотелиалните клетки са малко по-различни в зависимост от местоположението в Slicer. С сканираща електронна микроскопия може да се види, че количеството на фенозата може да бъде значително намалено до образуването на базалната мембрана; Особено ярко, тези промени се проявяват в зона 3 при пациенти с алкохолизъм.
Синусоидалните ендотелни клетки се отстраняват активно от кръвообращението на макромолекули и малки частици, използващи рецептор-непряка ендоцитоза. Те носят повърхностни рецептори към хиалуронова киселина (основния полизахариден компонент на съединителната тъкан), хондроитиниксулфат и гликопротеин, съдържащ на края на маноза, както и тип II и III рецептори към FciGG фрагменти и рецептор към протеинов свързващ липополизахариди. Ендотелиалните клетки изпълняват функция за почистване, премахване на ензими, увреждащи тъкани и патогенни фактори (включително микроорганизми). В допълнение, те пречистват кръвта от унищожения колаген и свързват и абсорбират липопротеините.
Звезди от чернодробни клетки (мастни клетки, липоцити, ITO клетки). Тези клетки са разположени в субденотелното пространство. Те съдържат дълъг растеж на цитоплазма, някои от които са тясно свързани с паренхимните клетки, докато други постигат няколко синусоида, където могат да участват в контрола на кръвния поток и по този начин засягат порталната хипертония. В нормален черен дроб, тези клетки са като основното място на съхранение на ретиноиди; Морфологично, това се проявява под формата на мазнини капчици в цитоплазмата. След избора на тези капки, стандартните клетки стават подобни на фибробластите. Те съдържат актин и миозин и са намалени, когато са изложени на ендотелин-1 и вещество R. в случай на увреждане на хепатоцитите, Stard клетките губят мастните капки, пролиферат, мигрират до зона 3, придобиват фенотип, който прилича на фенотипа на миофибробласти и произвежда колаген тип I, III и IV, и произвеждат колаген тип I, III и IV, както и ламинин. В допълнение, те идентифицират клетъчни матрични протеинази и техните инхибитори, например, инхибитор на тъкани на металопротеиназите (виж глава 19). Коланезацията на пространството на дисерията води до намаляване на допускането до хепатоцита на субстратите, свързани с протеина.
Клетки за хранене. Това са много движими лимфоцити - естествени убийци, прикрепени към ендотелиумата на синусоида. Техните микровълни или псевдоподия проникват през ендотелното разреждане, свързвайки се с микровиливите паренхимни клетки в пространството на дисерията. Тези клетки живеят дълго и се актуализират поради циркулиращи лимфоцити на кръв, които са диференцирани в синусоиди. Те откриват характерни гранули и мехурчета с пръчици в центъра. Издърпайте клетките, които имат спонтанна цитотоксичност по отношение на тумора и заразени с вирус на хепатоцити.
Взаимодействията на синусоидалните клетки
Между клетките на Kravel и ендотелните клетки, между синусоидните клетки и хепатоцитите, има сложно взаимодействие. Активирането на клетките чрез купувачипополисахариди потиска абсорбцията на хиалуронова киселина чрез ендотелни клетки. Този ефект може да бъде медииран от левкотриените. Цитокинови синусоиди, образувани от клетки, могат да стимулират и потискат пролиферацията на хепатоцитите.
Основният източник на ендотоксин в тялотое грам-отрицателна чревна флора. В момента без съмнение е фактът, че черният дроб е основният орган, ендотоксин клирънс. Endotoxin се улавя предимно отkami Kufera (QC), взаимодействие с мембранния рецепторCD. 14. С рецептора може да комуникира като себе си липополизахарид (LPS), така и неговият комплекс с липид a-свързващ belcOM плазма. Взаимодействието на LPS с чернодробните макрофаги стартира каскадата на реакциите въз основа на развитието и освобождаването цитокини и други биологично активнимедиатори.
Има много публикации за MacrofgOV черния дроб (CK) при изземването и изчистването на бактериални LPS, обаче, взаимодействието на ендотелиума с другите мезенканмал клетки, по-специално с perisinusoidal. ITO клетки, практически не се изучава.
Методология на изследването
Въведени са бели мъжки плъхове с тегло 200 g интраперитонеално в 1 ml стерилен физиологичен разтвор високо пречистени лиофилизиран LPS. Д. coli. щам 0111 в дози 0.5,2.5, 10, 25 и 50 mg / kg. По отношение на 0.5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 часа и 1, вътрешните органи се отстраняват под анестезия и се поставят в буфер 10% формалин. Материалът се излива в парафинови блокове. 5 микрона дебели съкращения имунохистохимикастрептавидин-Биотинов Метод на антителата за десмин α - гладка мускулна актина (A-GMA) и ядрена антихигдобре пролифериращи клетки (PCNA, " Дако."). Desmin се използва като маркер perisinusoidal. ITO клетки, A-GMA - по качествоve marker. miofibroblasts., PCNA. - пролифериращи клетки. За откриване на ендотоксин в чернодробните клетки, използва се пречистен анти-R.е-гликолипид Антитела (Институт по обща и клинична патология на CADO, Москва).
Резултати от изследванията
При доза от 25 mg / kg и над 6 часа след въвеждането на LPS се наблюдава смъртоносен удар. Остър на LPS върху чернодробната тъкан предизвика активирането на ITO клетките, което се проявява чрез увеличаване на техния брой. Номер demindoint. Клетките се увеличават от 6 часа след инжектиране на LPS и достигат максимум ma до 48-72 часа (фиг. 1, a, B).
Фиг. 1. Раздели на черния дроб на Кри звукови дърветаLsab. - чЕННИ антитела към des. мин (Група α - Gladoma плачки актива (б), x400 (но, б)x200 (b).
a - преди въвеждането на ендотоксина един човек demindoinable ITO клетки в разглеждането на зоната; б.- 72 ° С.след прилагане на ендотокси до: многобройни demindoinable ITO клетки; в - 120 h след въвежданеdotoxin: α - умни миди aktin присъства самоko в гладък мускулкахски кораби.
В 1. nED номер demindoint. клетките намаляват, ноначислени над контролните индикатори. За в никакъв случай не спазваме външния вид A-gma-положителен клетки в синусоdAH черния дроб. Вътрешен положителен Контрол при оцветяване с антитела към A-GMA сервират се да идентифицират гладките мускулни клеткивезни съдове на портални пътеки, съдържащи A-GMA (Фиг. 1, в).Следователно, въпреки увеличаването на броя на клетките на ITO, един братефектът на L PS не води до трансформация ( трансдриферант) Те са в миофибробласти.
Фиг. 2. Раздели на черния дробплъхове, третираниLsab. -Забрани антитела К.PCNA. и - преди въвеждането на EN dotoxin: Single.пролифериращи G. патцити., x200; В - 72 часа след въвеждането на ендотоксин: многобройни пролифериращи хепатоцити, X400.
Увеличаване на количеството demindoint. Клетките започнаха в порталната зона. От 6 часа до 24 часа след въвеждането на LPS perisinusoidal. Клетките бяха намерени само около порталните пътеки, т.е. В първата зона на Acy нос. По отношение на 48-72 часа, когато се наблюдава максимпал номер demindoint. Честтекущи, те се появяват в други зони на acinus; Въпреки това, повечето от ITO клетките все още са перипорти.
Може би това се дължи на факта, че периодични Намира се на първото улавяне на KKендотоксин идва от червата в портална вена или от системен кръвен поток. Ак. tyivated QC произвежда широк диапазонцитокини, за които се приема, че пускат активирането на ITO клетките и трансдриферант Те са в миофибробласти. Очевидно е, затова първите емисии на цитокини реагират на неговите клетки, разположени в близост до активираните макрофаги на черния дроб (в първата зона на Oscinus). Въпреки това, в нашето изследване, ние не ги наблюдавахме трансдриферант в myofibroblasts.И това предполага, че цитокинът подчерта CK и хепатоцитите могат да служат като фактор, който вече е подкрепил процеса трансдриферантНо те вероятно не могат да го управляват с едно излагане на LPS на черния дроб.
Увеличаването на пролиферативната активност на клетките също се наблюдава главно в първата зона на acinus. Вероятно това предполага, че всички (или практически всичко) процеси, насочени към излизане относно- и паракриналната регулация на междуклетъчните взаимодействия, продължете в перипорталните зони. Увеличаването на количеството на пролифериращите клетки се наблюдава от 24 часа след въвеждането на LPS; Броят на положителните клетки се увеличава до 72 часа (максимална пролиферативна активност, фиг. 2, \\ t a, B).Пролиферирани както хепатоцити, така и синусоидни клетки. Въпреки това, рисуванеPCNA. не дава възможности за идентифициране на тип Proleferaсинусоидни клетки. Според литературата ефектът на ендотоксин води до броя на QC. Вярвам, че е за товатой продължава както за сметка на разпространението на макрофагите на черния дроб и поради миграцията на моноцитите на редактиране на органи. Изхвърлената QC цитокини могат да увеличат пролиферативната способност на ITO клетките. Следователно е логично да се предположи, че са представени пролифериращи клетки perisinusoidal. ITO клетки. Увеличаването на нашия номер, регистрирано от нас, очевидно е необходимо за увеличаване на синтеза на растежни фактори и възстановяването на междуклетъчната матрица при условията на повреда. Това може да бъде една от връзките на компенсаторни реакции на чернодробни реакции, тъй като ITO клетките са основният източник на компонентите на междуклетъчния матрикс, коефициента на стволови клетки и хепатоцитен растежен фактор, който участва в ремонт и диференциация гитърни чернодробни клетки. Липсвасъщата трансформация на ITO клетки в myofibroblasts. Това показва, че един епизод на ендотоксична агресия не е достатъчен за развитие на чернодробна фиброза.
По този начин, остър ефект на Endotock сина причинява увеличение на броя demindoint. ITO клетки, което е косвен знак за увреждане на черния дроб. количество perisinusoidal. Клетките се увеличават, очевидно, в резултат на тяхното разпространение. Причини за еднократния епизод на ендотоксичната агресия активиране на Moun perisinusoidal. ITO клеткии не води до тях трансдриферант В миофибробласти. В това отношение може да се приеме, че в механизмите за активиране и трансдриферант ITO клетките участват не само ендотоксин и цитокини, но и някои други фактори на междуклетъчните взаимодействия.
Литература
1. Мията D.N., Viset E., Decker K. // Нови граници хепатология. Новосибирск, 1992.
2. Salakhov i.m., ipatov a.i., конев Yu.v., Яковлев М.Ю. / Успехи на помиряването, BIOL. 1998. Т. 118, vol. 1. стр. 33-49.
3. Яковлев М.Ю. /Казан. . м. Журнал 1988. № 5. стр. 353-358.
4. Фройденберг. Н.., Piotraschke. Й.., Галанос. ° С.. и. ал. // Вируси.Арх. [B]. 1992. Vol.. 61. стр. 343-349.
5. Грисън. А.. М.. // Хепатогастронованост.. 1996. Vol. 43. стр. 92-103.
6. Schmidt c, Bladt F., Goedecke S. et al. / Природа. 1995. Vol. 373, N 6516. стр. 699-702.
7. Мъка Д., BRAET F., LUO D. et al. / Токсико. Патол. 1996.Vol. 24, N 1. стр. 100-111.
Междуклетъчната комуникация може да бъде реализирана чрез паракринна секреция и директни контакти от клетки към клетки. Известно е от чернодробните перисинусоидални клетки (HPC) да създават регионални стволови клетки ниша и определят тяхната диференциация. В същото време HPC остават слабо характеризирани на молекулярно и клетъчно ниво.
Целта на проекта е да се изследват взаимодействията между чернодробните перисинусоидални клетки и различни стволови клетки, такива като мононуклеар клетъчна фракция на човешка пъпна кръвна кръв (UCB-MC) и многооцени, получени от костен мозък, получени многоцелни клетки (BM-MMSC).
Материали и методи. RAT BM-MSC и HPC, човешки UCB-Mc клетки бяха извлечени като се използват стандартни техники. За да проучим регулацията на паракринния HPC, ние сме култивирани UCB-MC или BM-MMSC клетки с HPC, използвайки Boyden камери и ценни HPC клетки. Диференциално етикетирани клетки бяха съвместно култивирани и техните взаимодействия се наблюдават чрез флуоресцентна микроскопия и имуноцитохимия.
Резултати. През първата седмица на отглеждането е имало автофлуоресценция на витамин А поради способността на мазнините на PHC. BM-MMSC демонстрира висока жизнеспособност във всички модели за съвместно култура. След 2-дневна инкубация в кондиционирана медийна съвместна култура на BM-MMSC с HPC наблюдавахме промени в морфологията на MMSC - те намаляват по размер и техните скотци станаха по-къси. Изразът на а-гладък мускулен актин и десмин е подобен на миофибробласт - междинна форма на ITO клетки култура in vitro. Тези промени могат да се дължат на стимулиране на паракрин от HPC. Най-дълбокият ефект на HPC върху UCB-Mc клетки се наблюдава при контактна култура, като по този начин е важно UCB-Mc клетките да създадат директни клетки към клетки за поддържане на тяхната жизнеспособност. Ние не наблюдавахме никакви клетъчни сливания между HPC / UCB и HPC / BM-MMSC клетки в съ-култури. В нашите допълнителни експерименти планираме да проучим факторите на растежа, получени от HPC за чернодробна диференциация на стволови клетки.
Въведение
От особен интерес сред разнообразието на чернодробните клетки представляват перисинузоидни чернодробни клетки (ITO клетки). Благодарение на секрецията на растежни фактори и компоненти на междуклетъчната матрица, те създават микрофузия на хепатоцити и в редица научни изследвания, способността на чернодробните клетки към образуването на микросреждания за бременни клетъчни клетки (включително хематопоетично) и влияние тяхната диференциация в хепатоцитите. Междуклетъчните взаимодействия на тези клетъчни популации могат да се извършват чрез паракринска секреция на растежни фактори или директни междуклетъчни контакти, но молекулярните и клетъчните основи на тези процеси остават напълно неизследвани.
Цел на проучването.
Проучване на механизмите за взаимодействие iTO клетки с хематопоетично (HSC) и мезенхимно (MMSK) стволови клетки В in vitro.
Материали и методи.
ITO чернодробните клетки на плъхове са подчертани в два различни ензимни метода. В същото време, STROMAL MMSK се получава от плъховете на костния мозък. Мононуклеарната фракция на хематопоетични стволови клетки е подчертана от кръвта на човешкия пъд. Паракринните влияния на клетките на ITO бяха изследвани по време на отглеждането на MMSK и HSC в средата, в която клетките на ITO нараснаха и със съвместно култивиране на клетки, разделени чрез полупропусклива мембрана. Ефектът на междуклетъчните контакти се изследва с съвместно култивиране на клетки. За по-добра визуализация всяка популация е обозначена с индивидуален флуоресцентен етикет. Клетъчната морфология се оценява чрез фазов контраст и флуоресцентни микроскопични методи. Фенотипните признаци на култивирани клетки са изследвани чрез имуноцитохимични методи за анализ.
Резултати.
През седмицата, след освобождаването на перисинусоидални клетки, ние имаме способността им да се въртят на автофлуоресценцията поради мастната каретка. След това клетките преминаха към междинната фаза на техния растеж и закупени звезди. При първоначалните етапи на съвместното отглеждане на клетките на ITO с MMSC на плъховия мозък, жизнеспособността на MMSC остава във всички изпълнения на отглеждането. На втория ден, по време на отглеждането на MMSK в културалната среда на клетките на ITO се наблюдава промяна в MORPHOLY MMSK - те намаляват по размер, преработеното производство. Изразът на Alpha-гладък мускул актин и дефа в MMSK се увеличи, което показва тяхното фенотипно прилигване с миофибробластите - междинен етап на растеж на активирани ITтрови клетки in vitro. Нашите данни показват ефекта на парашуидните фактори, разпределени от ITO клетките върху свойствата на MMSK в културата.
Въз основа на съвместното отглеждане на хематопоетични стволови клетки с ITO клетки, беше показано, че хематопоетичните стволови клетки задържат жизнеспособността само с кооперация за контакт с ITO клетки. Според флуоресцентен анализ на смесени култури, феноменът на сливането на клетки от различни популации не е открит.
Констатации. За да се запази жизнеспособността на кръвообразуващите стволови клетки, решаващ фактор е наличието на директни междуклетъчни контакти с ITO клетки. Паракриналният регламент бе отбелязан само в отглеждането на MMSC в хранителната среда, в която клетките на ITO нарастваха. Проучването на влиянието на специфични фактори, генерирано от ITO клетките върху диференциацията на GSK и MMSK в клетъчната култура, трябва да се извърши в следващите проучвания.
Шакулина А.К., Тронн А.А., Шачичинова А.С., Калигин М.А., Газизов и., РИЗВАНОВ А.А., Гмеова А.А., Киясов A.P.
Годеж VPO "Казан държавен медицински университет на Федералната агенция за здраве и социално развитие"
В горната част - схематично представяне на ITO клетка (HSC) в непосредствена близост до най-близките хепатоцити (PC) под синусоидалните чернодробни епителни клетки (ЕК). S - чернодробен синусоид; Kc е Kravel клетка. В долната част на лявата - клетките на ITO в културата под светлинния микроскоп. В долния десен ъгъл - електронната микроскопия ви позволява да видите многобройните мастни вакуоли (L) на ITO клетки (HSC), в които се съхраняват ретиноиди.
ITO клетки (Синоними: звездни клетки на Бинанията, жизнена помпа, липоцит, английски Чернодробна стоманена клетка, HSC, клетка на ITO, ITO клетка) - перицит съдържащи се в способност да функционират в две различни състояния - спокоен и активиран. Активирани клетки ITO. играят основната роля в формирането рубатова. Тъкани по време на щети черен дроб.
В непокътната черен дроб, звездните клетки са в спокойно състояние. В това състояние клетките имат няколко появявания покриващи синусоида капиляри . Друга отличителна черта на клетката е присъствието в техните цитоплазма Резерви витамин А. (Retinoida) под формата на мазнини капчици. Спокойните клетки на ITO са 5-8% от броя на всички чернодробни клетки.
Увеличените клетки на ITO са разделени на два вида: perisinusoidal. (субденители) и интергепатоцелуларен. Първото оставяне на тялото на клетката и се простират по повърхността на синусоида капиляри След като се покриват от тънки клонове на фейгъла. Перисинузалните растения са покрити с къси вени и имат характерни дълги микровълни, разтягащи се още по-нататък върху повърхността на ендотелната тръба на капиляра. Интерплатоцелуларните нараства, преодоляването на хепатоцитната плоча и достигането на съседна синусоида, са разделени на няколко перизинсуидални растения. Така ITO клетката средно покрива малко повече от две съседни синоиди.
В случай на повреда на чернодробните клетки, ITO преминава активирано състояние. Активиран фенотип характеризиращ се с пролиферация хемотаксис , намаляване, загуба на ретиноидни резерви и образуване на клетки, наподобяващи miofibroblastic. . Активираните звезди на чернодробните клетки също демонстрират повишено съдържание на нови генов , като, ICAM-1. , chemokina. и цитокини . Активирането показва началото на ранния етап на фиброгениза и е предшестван от увеличеното производство Ecm. -Belkov. Последното постановяване на чернодробната купчина се характеризира с подсилен апоптоза Активирани ITO клетки, в резултат на което тяхното количество е рязко намалено.
За да визуализирате ITO клетките по време на микроскопия, се използва оцветяване златен хлорид . Също така е установено, че надеждният маркер за разграничаване на тези клетки от други миофибробласти е израз на протеин рилин.
История [ | ]
В 1876. Karl Von Kver Описах клетките, наречени "Sternzellen" (звездни клетки). При боядисване на златен оксид, включванията бяха забележими при цитоплазмата. Като погрешно от техните фрагменти от червените кръвни клетки, заловени чрез фагоцитоза, кувът през 1898 г. преразгледа възгледите си на "звездата" като отделен тип клетки и ги носи в категория фагоцит . Въпреки това, през следващите години, имаше редовни описания на клетки, подобни на кохетанските "звездни клетки". Бяха назначени различни имена: интерстициални клетки, паразичноидни клетки, липоцити, перицит. Ролята на тези клетки остава загадка в продължение на 75 години, докато професор (Toshio Ito) не е намерил перисинусозно пространство Човешки дроб. Някои клетки, съдържащи мазнини. ITO ги нарече "Shibo-sesshu saibo" - нулеви абсорбиращи клетки. Осъзнаване, че включванията са били мазнини, произведени от клетки от гликоген Той промени името на Shibo-Chozo Saibo - Greasel клетки. В