पीसीआर परिभाषा पीसीआर रक्त परीक्षण क्या है, और इसकी आवश्यकता क्यों है

संक्रामक रोगों के निदान में, रोगजनकों का पता लगाने के लिए विभिन्न प्रयोगशाला विधियों का उपयोग किया जाता है। सबसे प्रगतिशील, विशिष्ट और सटीक प्रयोगशाला परीक्षणों में से एक पीसीआर विश्लेषण है, जो आपको रोग के विकास के शुरुआती चरणों में सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए, रक्त और अन्य प्रकार की जैविक सामग्री में रोगजनकों की उपस्थिति का निर्धारण करने की अनुमति देता है। संक्रमण का।

विशेष उपकरणों पर पीसीआर विश्लेषण

पीसीआर का उपयोग करके नैदानिक ​​परीक्षण कैसे किए जाते हैं

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन बैक्टीरिया और कवक के डीएनए, डीएनए और वायरस के आरएनए का पता लगाने के लिए एक प्रयोगशाला आणविक जैविक विधि है। पीसीआर का आधार एक विशेष एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया है जो विशेष एंजाइम और आणविक प्रकृति के पदार्थों की उपस्थिति में होती है। इस तथ्य के कारण कि विधि रोग के प्रेरक एजेंट की उपस्थिति को सीधे ठीक करने में सक्षम है, इसे अन्य सभी नैदानिक ​​​​विधियों की तुलना में अव्यक्त संक्रमण और कैरिज का पता लगाने में सबसे अधिक जानकारीपूर्ण और संवेदनशील माना जाता है।

पीसीआर परीक्षण का उपयोग करके जैविक नमूनों का विश्लेषण आपको बैक्टीरिया और वायरस की उपस्थिति का जल्दी से पता लगाने की अनुमति देता है।

अन्य प्रयोगशाला निदान विधियां, एक नियम के रूप में, संक्रमण के अप्रत्यक्ष संकेतों को निर्धारित करती हैं, या एक लंबी परीक्षण प्रक्रिया की आवश्यकता होती है।

पीसीआर तकनीक के मुख्य चरण हैं:

• जैविक सामग्री लेना, उसे नैदानिक ​​प्रयोगशाला में पहुंचाना,
• ली गई सामग्री से बैक्टीरिया और वायरस की आनुवंशिक सामग्री का अलगाव,
• पीसीआर का प्रत्यक्ष विश्लेषण और प्राप्त आंकड़ों का डिकोडिंग।

एक पीसीआर प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, तरल पदार्थ, ऊतकों, रहस्यों के नमूनों का उपयोग किया जाता है, जिसमें रोगजनकों की उपस्थिति का अनुमान लगाया जाता है। परीक्षण के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले नमूने शिरापरक रक्त, प्लाज्मा या सीरम हैं। प्रयोगशाला में, बैक्टीरिया और वायरल कणों को अन्य घटकों से अलग किया जाता है और विशेष अभिकर्मकों का उपयोग करके डीएनए या आरएनए अणुओं को अलग किया जाता है।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन

अगले चरण में, इन आनुवंशिक अणुओं को विशेष उपकरणों में कई बार गुणा किया जाता है। ऐसा करने के लिए, विशेष एंजाइमों और अणुओं का उपयोग करें जो आपको कड़ाई से परिभाषित प्रकार के डीएनए को कृत्रिम रूप से गुणा करने की अनुमति देते हैं जो केवल एक विशिष्ट रोगज़नक़ से संबंधित है। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, बड़ी संख्या में छोटे डीएनए टुकड़े बनते हैं, जो वायरस और बैक्टीरिया का हिस्सा होते हैं।

तीसरे चरण में, विशेष रंगों और पहचान उपकरणों का उपयोग करके संचित टुकड़ों का पता लगाया जाता है। यदि मूल नमूने में रोगजनक होते हैं, तो प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप एक विशिष्ट उत्पाद बनता है, और विश्लेषण सकारात्मक परिणाम दिखाता है। यदि रोगज़नक़ सामग्री में नहीं था, तो प्रतिक्रिया उत्पाद संश्लेषित नहीं होता है और परीक्षण एक नकारात्मक परिणाम देता है।

पीसीआर परीक्षण संक्रमण का निदान करने के सबसे तेज़ तरीकों में से एक है। एक पूर्ण सामग्री निरीक्षण चक्र में कई घंटे से लेकर एक दिन तक का समय लगता है।

पीसीआर विधि - सार

यह कड़ाई से परिभाषित प्रकार के डीएनए अणुओं के कई प्रजनन की प्रतिक्रिया में उपयोग है जो अत्यधिक संवेदनशीलता के साथ जैविक नमूनों में सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति को सटीक रूप से निर्धारित करना संभव बनाता है। ऊतकों और शरीर के तरल पदार्थों में संक्रामक एजेंटों की एक छोटी सी एकाग्रता भी प्रतिक्रिया उत्पाद की एक बड़ी मात्रा के संश्लेषण और एक सकारात्मक निष्कर्ष का कारण बन सकती है।

पीसीआर टेस्ट से किन संक्रमणों का पता चलता है

पीसीआर तकनीक का उपयोग करते हुए, विभिन्न प्रकार के बैक्टीरिया, खमीर जैसी कोशिकाओं, वायरल कणों की उपस्थिति का पता लगाया जाता है। आधुनिक नैदानिक ​​अभ्यास में, निम्नलिखित रोगों के प्रेरक एजेंटों की पहचान करने के लिए पीसीआर विश्लेषण सबसे आम है:

• एचआईवी संक्रमण (एड्स),
• हेपेटाइटिस (हेपेटाइटिस बी, हेपेटाइटिस सी और अन्य दुर्लभ प्रकार),
• साइटोमेगालोवायरस संक्रमण,
• जननांग पथ के लगभग सभी संक्रामक रोग,
• कैंडिडिआसिस,
• माइकोप्लाज्मोसिस,
• हरपीज वायरस के कारण संक्रमण,
• पेपिलोमावायरस संक्रमण,
• टोक्सोप्लाज्मोसिस,
• आंतों के रोग,
• डिप्थीरिया,
• क्षय रोग,
• दुर्लभ फोकल संक्रमण,
• मोनोन्यूक्लिओसिस और कई अन्य।

पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन जननांग संक्रमण, हेपेटाइटिस, एचआईवी, पेपिलोमा और अन्य बीमारियों का पता लगाने के लिए सबसे आम, विश्वसनीय और तेज़ तरीका है।

कई निदान रोगों के लिए, पीसीआर एकमात्र निदान पद्धति नहीं है। निदान की पुष्टि डॉक्टर द्वारा तभी की जाती है जब रोग के अन्य लक्षण देखे जाते हैं।

वायरस और बैक्टीरिया का पता लगाने की योजना

लेकिन कई मामलों में, पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया प्रयोगशाला निदान का "स्वर्ण मानक" है।

पीसीआर द्वारा पता लगाए गए संक्रमणों की सूची हर साल बढ़ रही है। विधि के विकास ने पहले से ही कई रोगजनकों को एक साथ निर्धारित करना संभव बना दिया है। इसने व्यापक सर्वेक्षण कार्यक्रमों का प्रसार करने का काम किया है। उनमें से: बैक्टीरियल वेजिनोसिस के लिए माइक्रोफ्लोरा का व्यापक अध्ययन, TORCH संक्रमणों का निर्धारण, उच्च और निम्न कार्सिनोजेनिक जोखिम के मानव पेपिलोमा की पहचान। इसके अलावा, एक पीसीआर रक्त परीक्षण अनिवार्य अस्पताल निदान परिसर में शामिल है।

पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया का उपयोग करके, वैज्ञानिक अणुओं की पहचान करने में सक्षम थे जो विभिन्न प्रकार के घातक ट्यूमर - ट्यूमर मार्करों के विकास का संकेत देते हैं। इसके लिए धन्यवाद, विधि ने कैंसर का जल्द पता लगाने में आवेदन पाया है। पीसीआर परीक्षणों का सक्रिय रूप से वंशानुगत आनुवंशिक दोषों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है, जिसमें प्रसवपूर्व निदान और गर्भावस्था की योजना के दौरान शामिल हैं।

पीसीआर विश्लेषण के लिए जैविक सामग्री की विशेषताएं

अनुसंधान के लिए एक निश्चित प्रकार की सामग्री का संग्रह संक्रमण के प्रकार से निर्धारित होता है जिसे वे परीक्षण के परिणामस्वरूप निदान करना चाहते हैं। निम्नलिखित नमूने परीक्षण नमूने के रूप में लिए गए हैं:

• नसयुक्त रक्त
• लार,
• स्क्रैपिंग, उदाहरण के लिए ग्रीवा नहर से, गाल के अंदर से,
• बलगम के नमूने,
• मूत्र,
• फुफ्फुस द्रव
• वीर्य और प्रोस्टेट स्राव,
• थूक और ब्रोन्को-फुफ्फुसीय पानी से धोना,
• मूत्रमार्ग से निर्वहन।

परिणाम केवल विशेषज्ञ ही समझ सकते हैं

व्यक्तिगत संक्रमणों और विशेष संकेतों के लिए, डॉक्टर मस्तिष्कमेरु द्रव परीक्षण लिख सकते हैं। अंतर्गर्भाशयी रोगों का पता लगाने में, प्लेसेंटा और एमनियोटिक द्रव के नमूनों का उपयोग किया जाता है।

सामान्य तौर पर, पीसीआर का उपयोग करके निदान के लिए, उस प्रकार की सामग्री का उपयोग किया जाता है जिसमें रोग का प्रेरक एजेंट सबसे अधिक मौजूद होता है। विश्लेषण का जिक्र करते समय डॉक्टर द्वारा जैविक सामग्री का प्रकार निर्धारित किया जाता है।

विश्लेषण के सटीक और सही होने के लिए, नमूना लेने से पहले सरल तैयारी की आवश्यकता होती है और नमूने लेने और विश्लेषण करने की अत्यधिक शुद्धता का पालन करने की आवश्यकता होती है।

एक सटीक विश्लेषण परिणाम प्राप्त करने के लिए, आपको शोध के लिए सामग्री की तैयारी और संग्रह के लिए कई नियमों का पालन करना चाहिए:

• जननांगों से सामग्री लेने से कुछ दिन पहले और रक्त परीक्षण द्वारा जननांग संक्रमण के निदान के मामले में संभोग को रद्द कर दें,
• सुबह पीसीआर विश्लेषण के लिए शिरापरक रक्त लें, प्रसव से पहले पेय और भोजन का सेवन न करें,
• रक्तदान करने से कम से कम दो घंटे पहले धूम्रपान न करें,
• सोने के तुरंत बाद एक बाँझ कंटेनर में पेशाब को सख्ती से इकट्ठा करें।

जरूरी! एंटीबायोटिक्स और अन्य दवाएं लेने से परीक्षण के परिणाम खराब हो सकते हैं। सामग्री जमा करने से पहले, आपको अपने चिकित्सक से परामर्श करना चाहिए।

यदि पीसीआर विश्लेषण करने के लिए जननांगों से सामग्री लेने की योजना है, तो उपस्थित चिकित्सक के परामर्श से जीवाणुरोधी स्वच्छता उत्पादों और शक्तिशाली दवाओं के उपयोग को रद्द करने की सिफारिश की जाती है।

पीसीआर विश्लेषण के परिणाम को कैसे समझें

पीसीआर परिणाम आमतौर पर गुणात्मक प्रारूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। एक संक्रामक एजेंट या तो जैविक सामग्री के नमूने में पाया जाता है, या उसमें नहीं पाया जाता है।

इस मामले में निष्कर्ष की व्याख्या यथासंभव सरल है:

• एक सकारात्मक परिणाम इंगित करता है कि विश्लेषण किए गए नमूने में सूक्ष्मजीव मौजूद था,
• एक नकारात्मक परीक्षण इंगित करता है कि कोई संक्रामक एजेंट नहीं पाया गया है।

ध्यान! एक नकारात्मक परिणाम कभी-कभी अनुचित नमूनाकरण या विश्लेषण प्रक्रिया में त्रुटियों का परिणाम होता है।

रोग के स्पष्ट लक्षणों और झूठे नकारात्मक परिणाम के संदेह की उपस्थिति में, अध्ययन को दोहराने की सलाह दी जा सकती है।

पीसीआर विश्लेषण के लिए बड़ी सटीकता की आवश्यकता होती है

विशेष मामलों में, रोगज़नक़ को निर्धारित करने के लिए मात्रात्मक तरीकों का उपयोग किया जाता है। इस तरह के विश्लेषण के परिणाम सामग्री की एक निश्चित मात्रा के संदर्भ में डीएनए या रोगज़नक़ के आरएनए की प्राप्त एकाग्रता के रूप में जारी किए जाते हैं। उदाहरण के लिए, रक्त प्लाज्मा के प्रति मिलीलीटर डीएनए अणुओं की प्रतियों में।

मात्रात्मक और अर्ध-मात्रात्मक पीसीआर विश्लेषण और इसके परिणामों की व्याख्या रोग के पाठ्यक्रम की निगरानी, ​​​​वायरल लोड निर्धारित करने, रोग के चरण की पहचान करने और सशर्त रोगजनकों के कारण होने वाले रोगों का निदान करने के लिए की जाती है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के सकारात्मक पहलू

संक्रामक रोगों की इतनी विस्तृत श्रृंखला के निदान में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन पद्धति का सक्रिय परिचय इसके कई लाभों के कारण संभव हो गया है:

• विधि की उच्च विशिष्टता - विश्लेषण आपको रोगजनकों के डीएनए के कड़ाई से परिभाषित प्रकार का पता लगाने की अनुमति देता है,
• विश्लेषण को स्ट्रीम पर रखने और प्रक्रिया को स्वचालित करने की क्षमता,
• विधि की उच्च संवेदनशीलता और प्रारंभिक अवस्था में रोग का निदान करने की क्षमता,
• एक ही समय में कई संक्रमणों का निदान;
• प्रक्रिया की गति और उपभोग्य सामग्रियों की कम लागत।

विधि के नुकसान में महंगे उपकरण की आवश्यकता, प्रयोगशाला की शुद्धता और विनिर्माण क्षमता के लिए उच्च आवश्यकताएं, विश्लेषण पद्धति का पालन नहीं करने पर गलत परिणाम प्राप्त करने की संभावना शामिल है।

कई संक्रामक रोगों के पर्याप्त और प्रभावी उपचार के लिए, एक सटीक निदान की समय पर स्थापना आवश्यक है। इस समस्या को हल करने में, आजकल आणविक जीव विज्ञान के तरीकों पर आधारित उच्च तकनीक निदान पद्धतियां शामिल हैं। फिलहाल, प्रयोगशाला निदान के लिए सबसे विश्वसनीय उपकरण के रूप में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) पहले से ही व्यावहारिक चिकित्सा में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

वर्तमान समय में पीसीआर की लोकप्रियता क्या बताती है?

सबसे पहले, इस पद्धति का उपयोग उच्च सटीकता के साथ विभिन्न संक्रामक रोगों के प्रेरक एजेंटों की पहचान करने के लिए किया जाता है।

दूसरे, उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी करने के लिए।

विभिन्न मैनुअल, ब्रोशर, लेखों के साथ-साथ चिकित्सा विशेषज्ञों के स्पष्टीकरण में, हम अक्सर समझ से बाहर शब्दों और शब्दों का उपयोग करते हैं। विज्ञान के उच्च-तकनीकी उत्पादों के बारे में सामान्य शब्दों में बात करना वास्तव में कठिन है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का सार और यांत्रिकी क्या है?

प्रत्येक जीवित जीव के अपने विशिष्ट जीन होते हैं। जीन डीएनए अणु में स्थित होते हैं, जो वास्तव में, प्रत्येक विशेष जीव का "कॉलिंग कार्ड" होता है। डीएनए (आनुवंशिक सामग्री) न्यूक्लियोटाइड नामक बिल्डिंग ब्लॉक्स से बना एक बहुत लंबा अणु है। संक्रामक रोगों के प्रत्येक प्रेरक एजेंट के लिए, वे कड़ाई से विशेष रूप से स्थित हैं, अर्थात एक निश्चित क्रम और संयोजन में। जब यह समझना आवश्यक होता है कि क्या किसी व्यक्ति में कोई विशेष रोगज़नक़ है, तो जैविक सामग्री (रक्त, मूत्र, लार, धब्बा) लिया जाता है, जिसमें सूक्ष्म जीव के डीएनए या डीएनए के टुकड़े होते हैं। लेकिन रोगज़नक़ की आनुवंशिक सामग्री की मात्रा बहुत कम है, और यह कहना असंभव है कि यह किस सूक्ष्मजीव से संबंधित है। इस समस्या के समाधान के लिए पीसीआर का उपयोग किया जाता है। पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का सार यह है कि डीएनए युक्त अनुसंधान के लिए थोड़ी मात्रा में सामग्री ली जाती है, और पीसीआर प्रक्रिया के दौरान, एक विशिष्ट रोगज़नक़ से संबंधित आनुवंशिक सामग्री की मात्रा में वृद्धि होती है और इस प्रकार, इसे पहचाना जा सकता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स एक बायोमटेरियल का आनुवंशिक अध्ययन है।

पीसीआर पद्धति का विचार अमेरिकी वैज्ञानिक के। मुलिंस का है, जिसे उन्होंने 1983 में प्रस्तावित किया था। हालाँकि, इसे XX सदी के 90 के दशक के मध्य में ही व्यापक नैदानिक ​​​​आवेदन प्राप्त हुआ।

आइए जानें कि शब्दावली क्या है - डीएनए, आदि। किसी भी जीवित प्राणी (जानवर, पौधे, मानव, बैक्टीरिया, वायरस) की प्रत्येक कोशिका में गुणसूत्र होते हैं। गुणसूत्र आनुवंशिक जानकारी के संरक्षक होते हैं, जिसमें प्रत्येक विशेष जीवित प्राणी के जीन का संपूर्ण क्रम होता है।

प्रत्येक गुणसूत्र में डीएनए के दो स्ट्रैंड होते हैं, जो एक दूसरे के सापेक्ष एक हेलिक्स में मुड़ जाते हैं। डीएनए रासायनिक रूप से डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड है, जिसमें संरचनात्मक घटक होते हैं - न्यूक्लियोटाइड। 5 प्रकार के न्यूक्लियोटाइड होते हैं - थाइमिन (टी), एडेनोसिन (ए), गुआनिन (जी), साइटोसिन (सी) और यूरैसिल (यू)। न्यूक्लियोटाइड एक के बाद एक सख्त व्यक्तिगत अनुक्रम में स्थित होते हैं, जिससे जीन बनते हैं। एक जीन में 20-200 ऐसे न्यूक्लियोटाइड हो सकते हैं। उदाहरण के लिए, इंसुलिन उत्पादन के लिए जीन कोडिंग लंबाई में 60 आधार जोड़े हैं।

न्यूक्लियोटाइड्स में संपूरकता का गुण होता है। इसका मतलब यह है कि एक डीएनए स्ट्रैंड में एडेनिन (ए) के विपरीत दूसरे स्ट्रैंड में जरूरी थाइमिन (टी) होता है, और ग्वानिन (जी) के विपरीत - साइटोसिन (सी)। योजनाबद्ध रूप से ऐसा दिखता है:
जी - सी
टी - ए
पर
पूरकता का यह गुण पीसीआर के लिए महत्वपूर्ण है।

डीएनए के अलावा, आरएनए में एक ही संरचना होती है - राइबोन्यूक्लिक एसिड, जो डीएनए से इस मायने में भिन्न होता है कि यह थाइमिन के बजाय यूरैसिल का उपयोग करता है। आरएनए - रेट्रोवायरस (उदाहरण के लिए, एचआईवी) नामक कुछ वायरस में आनुवंशिक जानकारी का संरक्षक है।

डीएनए और आरएनए अणु "गुणा" कर सकते हैं (इस संपत्ति का उपयोग पीसीआर के लिए किया जाता है)। यह इस प्रकार होता है: डीएनए या आरएनए के दो स्ट्रैंड एक दूसरे से अलग हो जाते हैं, प्रत्येक स्ट्रैंड पर एक विशेष एंजाइम बैठता है, जो एक नए स्ट्रैंड का संश्लेषण करता है। संश्लेषण पूरकता के सिद्धांत के अनुसार आगे बढ़ता है, अर्थात, यदि मूल डीएनए स्ट्रैंड में न्यूक्लियोटाइड ए है, तो नए संश्लेषित में टी होगा, अगर जी - तो सी, आदि। इस विशेष एंजाइम - संश्लेषण की शुरुआत के लिए "बिल्डर" को "बीज" की आवश्यकता होती है - 5-15 न्यूक्लियोटाइड का एक क्रम। यह "बीज" प्रत्येक जीन (क्लैमाइडिया जीन, माइकोप्लाज़्मा, वायरस) प्रयोगात्मक रूप से।

तो, प्रत्येक पीसीआर चक्र में तीन चरण होते हैं। पहले चरण में, तथाकथित डीएनए अनइंडिंग होता है - यानी दो जुड़े डीएनए स्ट्रैंड का पृथक्करण। दूसरे में, "बीज" डीएनए स्ट्रैंड के एक हिस्से से जुड़ा होता है। और, अंत में, इन डीएनए स्ट्रैंड्स का लंबा होना, जो "बिल्डर" एंजाइम द्वारा निर्मित होता है। वर्तमान में, यह पूरी जटिल प्रक्रिया एक टेस्ट ट्यूब में होती है और इसमें बड़ी संख्या में प्रतियां प्राप्त करने के लिए निर्धारित डीएनए के पुनरुत्पादन के बार-बार चक्र होते हैं, जिन्हें पारंपरिक तरीकों से पता लगाया जा सकता है। यानी डीएनए के एक स्ट्रैंड से हमें सैकड़ों या हजारों मिलते हैं।

पीसीआर अनुसंधान के चरण

अनुसंधान के लिए जैविक सामग्री का संग्रह

एक नमूने के रूप में, विभिन्न जैविक सामग्रियों का उपयोग किया जाता है: रक्त और इसके घटक, मूत्र, लार, श्लेष्म झिल्ली का निर्वहन, मस्तिष्कमेरु द्रव, घाव की सतहों का निर्वहन, शरीर के गुहाओं की सामग्री। सभी बायोएसे को डिस्पोजेबल उपकरणों के साथ एकत्र किया जाता है, और एकत्रित सामग्री को प्लास्टिक बाँझ ट्यूबों में संलग्न किया जाता है या संस्कृति मीडिया पर रखा जाता है, इसके बाद प्रयोगशाला में परिवहन किया जाता है।

आवश्यक अभिकर्मकों को एकत्रित नमूनों में जोड़ा जाता है और एक प्रोग्राम योग्य थर्मोस्टेट - एक थर्मल साइक्लर (एम्पलीफायर) में रखा जाता है। थर्मोसायकलर में, पीसीआर चक्र को 30-50 बार दोहराया जाता है, जिसमें तीन चरण होते हैं (विकृतीकरण, एनीलिंग और बढ़ाव)। इसका क्या मतलब है? आओ हम इसे नज़दीक से देखें।

प्रत्यक्ष पीसीआर प्रतिक्रिया के चरण, आनुवंशिक सामग्री की नकल

मैंपीसीआर चरण - नकल के लिए आनुवंशिक सामग्री तैयार करना।
यह 95 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर होता है, जबकि डीएनए किस्में अलग हो जाती हैं, और "बीज" उन पर बैठ सकते हैं।

"बीज" विभिन्न अनुसंधान और उत्पादन संघों द्वारा औद्योगिक रूप से निर्मित होते हैं, और प्रयोगशालाओं को तैयार-तैयार खरीदा जाता है। उसी समय, पता लगाने के लिए "बीज", उदाहरण के लिए, क्लैमाइडिया, केवल क्लैमाइडिया, आदि के लिए काम करता है। इस प्रकार, यदि क्लैमाइडियल संक्रमण की उपस्थिति के लिए एक बायोमटेरियल का परीक्षण किया जाता है, तो क्लैमाइडिया के लिए एक "बीज" को प्रतिक्रिया मिश्रण में रखा जाता है; यदि एपस्टीन-बार वायरस के लिए बायोमटेरियल का परीक्षण किया जाता है, तो यह एपस्टीन-बार वायरस के लिए "बीज" भी है।

द्वितीयचरण - संक्रामक एजेंट और "बीज" की आनुवंशिक सामग्री का संयोजन।
यदि पता चला वायरस या बैक्टीरिया का डीएनए है, तो "बीज" इस डीएनए पर बैठता है। "प्राइमर" को जोड़ने की यह प्रक्रिया पीसीआर का दूसरा चरण है। यह चरण 75 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर होता है।

तृतीयचरण - संक्रामक एजेंट की आनुवंशिक सामग्री की नकल करना।
यह वास्तव में आनुवंशिक सामग्री के लंबे या प्रजनन की प्रक्रिया है, जो 72 डिग्री सेल्सियस पर होती है। "बिल्डर" एंजाइम "बीज" के पास पहुंचता है और एक नए डीएनए स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है। एक नए डीएनए स्ट्रैंड के संश्लेषण की समाप्ति के साथ, पीसीआर चक्र भी समाप्त हो जाता है। यानी एक पीसीआर चक्र में आनुवंशिक सामग्री की मात्रा दोगुनी हो जाती है। उदाहरण के लिए, मूल नमूने में किसी भी वायरस के 100 डीएनए अणु थे; पहले पीसीआर चक्र के बाद, नमूने में पहले से ही परीक्षण किए गए वायरस के 200 डीएनए अणु होंगे। एक चक्र 2-3 मिनट तक रहता है।

पहचान के लिए पर्याप्त मात्रा में आनुवंशिक सामग्री उत्पन्न करने के लिए, आमतौर पर 30-50 पीसीआर चक्र किए जाते हैं, जिसमें 2-3 घंटे लगते हैं।

प्रचारित आनुवंशिक सामग्री की पहचान का चरण

पीसीआर स्वयं इस बिंदु पर समाप्त होता है, और फिर पहचान का एक समान रूप से महत्वपूर्ण चरण होता है। पहचान के लिए, वैद्युतकणसंचलन की विधि का उपयोग करें या "प्राइमर्स" लेबल करें। वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करते समय, प्राप्त डीएनए किस्में आकार से अलग होती हैं, और विभिन्न लंबाई के डीएनए टुकड़ों की उपस्थिति एक सकारात्मक विश्लेषण परिणाम (यानी, एक विशेष वायरस, बैक्टीरिया, आदि की उपस्थिति) को इंगित करती है। लेबल वाले "प्राइमर्स" का उपयोग करते समय, अंतिम प्रतिक्रिया उत्पाद में एक क्रोमोजेन (डाई) जोड़ा जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एंजाइमी प्रतिक्रिया एक रंग के गठन के साथ होती है। रंग का विकास सीधे इंगित करता है कि मूल नमूने में एक वायरस या अन्य पता लगाने योग्य एजेंट मौजूद है।

आज, लेबल वाले "प्राइमर्स" के साथ-साथ उपयुक्त सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके, कोई तुरंत पीसीआर परिणामों को "पढ़" सकता है। यह तथाकथित रीयल-टाइम पीसीआर है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स इतना मूल्यवान क्यों है?

पीसीआर पद्धति के महत्वपूर्ण लाभों में से एक इसकी उच्च संवेदनशीलता है - 95 से 100% तक। हालांकि, ये फायदे निम्नलिखित शर्तों के अनिवार्य पालन पर आधारित होने चाहिए:

1. सही संग्रह, जैविक सामग्री का परिवहन;
2. बाँझ, डिस्पोजेबल उपकरणों, विशेष प्रयोगशालाओं और प्रशिक्षित कर्मियों की उपलब्धता;
3. विश्लेषण के दौरान तकनीक और बाँझपन का सख्त पालन

विभिन्न रोगाणुओं का पता लगाने के लिए संवेदनशीलता भिन्न होती है। उदाहरण के लिए, हेपेटाइटिस सी वायरस का पता लगाने के लिए पीसीआर विधि की संवेदनशीलता 97-98% है, यूरियाप्लाज्मा का पता लगाने की संवेदनशीलता 99-100% है।

पीसीआर विश्लेषण में निहित क्षमताएं आपको बेजोड़ विश्लेषणात्मक विशिष्टता प्राप्त करने की अनुमति देती हैं। इसका मतलब है कि आप जिस सूक्ष्मजीव की तलाश कर रहे थे, उसकी ठीक-ठीक पहचान करना, न कि समान या निकट से संबंधित।
पीसीआर पद्धति की नैदानिक ​​संवेदनशीलता और विशिष्टता अक्सर संस्कृति पद्धति से बेहतर होती है, जिसे संक्रामक रोगों का पता लगाने के लिए "स्वर्ण मानक" कहा जाता है। संस्कृति वृद्धि की अवधि (कई दिनों से लेकर कई हफ्तों तक) को ध्यान में रखते हुए, पीसीआर पद्धति का लाभ स्पष्ट हो जाता है।

संक्रमण के निदान में पीसीआर
पीसीआर पद्धति (संवेदनशीलता और विशिष्टता) के लाभ आधुनिक चिकित्सा में अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला निर्धारित करते हैं।
पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के आवेदन के मुख्य क्षेत्र:

1. विभिन्न स्थानीयकरण के तीव्र और पुराने संक्रामक रोगों का निदान
2. चिकित्सा की प्रभावशीलता की निगरानी
3. रोगज़नक़ के प्रकार का स्पष्टीकरण

पीसीआर का उपयोग प्रसूति, स्त्री रोग, नवजात विज्ञान, बाल रोग, मूत्रविज्ञान, वेनेरोलॉजी, नेफ्रोलॉजी, संक्रामक रोगों के क्लिनिक, नेत्र विज्ञान, न्यूरोलॉजी, फ्थिसियोपल्मोनोलॉजी, आदि में किया जाता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग अन्य शोध विधियों (एलिसा, पीआईएफ, आरआईएफ, आदि) के संयोजन में किया जाता है। उनका संयोजन और उपयुक्तता उपस्थित चिकित्सक द्वारा निर्धारित की जाती है।

पीसीआर द्वारा पता लगाया गया संक्रामक एजेंट

वायरस:

1. रेट्रोवायरस एचआईवी -1 और एचआईवी -2
2. हर्पेटिफॉर्म वायरस
3. हरपीज सिंप्लेक्स वायरस प्रकार 1 और 2

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर, पीसीआर - पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) एक जैविक नमूने में कुछ डीएनए अंशों (जीन) की कई प्रतियां प्राप्त करने की एक विधि है।

आणविक जीव विज्ञान की एक विधि के रूप में पीसीआर का सार परिस्थितियों में विशेष एंजाइमों का उपयोग करके एक निश्चित जीन (डीएनए अनुभाग) की कई चयनात्मक प्रतिलिपि बनाना है। कृत्रिम परिवेशीय... पीसीआर की एक महत्वपूर्ण विशेषता डीएनए (जीन) के एक विशिष्ट क्षेत्र की प्रतियां प्राप्त करना है जो निर्दिष्ट शर्तों को पूरा करती है। डीएनए कॉपी करने की प्रक्रिया का पर्यायवाची "एम्पलीफिकेशन" है। डी एन ए की नकल विवो मेंप्रवर्धन भी माना जा सकता है। हालांकि, प्रतिकृति के विपरीत, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन के दौरान डीएनए के छोटे हिस्सों (अधिकतम 40,000 बेस पेयर) को बढ़ाया जाता है।

बुनियादी सिद्धांत

तो, पीसीआर बार-बार तापमान चक्रों के दौरान इन विट्रो में कुछ डीएनए अंशों की बार-बार नकल है। एक तापमान चक्र के भीतर प्रतिक्रिया प्रक्रिया कैसे आगे बढ़ती है?

न्यूक्लियोटाइड श्रृंखला का निर्माण एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़ द्वारा किया जाता है। हालाँकि, आरंभ करने के लिए, एंजाइम को एक लॉन्च पैड की आवश्यकता होती है। साइटें "प्राइमर्स" (प्राइमर्स) हैं - सिंथेटिक ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स 15-20 न्यूक्लियोटाइड्स लंबाई में। दो प्राइमर (आगे और पीछे) होने चाहिए, वे डीएनए टेम्प्लेट क्षेत्रों के पूरक हैं, और यह प्राइमर द्वारा सीमित डीएनए टुकड़ा है जिसे डीएनए पोलीमरेज़ द्वारा कई बार कॉपी किया जाएगा। पोलीमरेज़ का कार्य डीएनए टेम्पलेट के अनुक्रम के पूरक न्यूक्लियोटाइड का अनुक्रमिक जोड़ है। इस प्रकार, एक तापमान चक्र में, दो नए डीएनए टुकड़े फिर से संश्लेषित होते हैं (चूंकि डीएनए अणु डबल-स्ट्रैंडेड होता है, शुरू में दो मैट्रिक्स होते हैं)। इस प्रकार, 25-35 चक्रों में, प्राइमरों द्वारा निर्धारित डीएनए क्षेत्र की अरबों प्रतियां टेस्ट ट्यूब में जमा हो जाती हैं। एक व्यक्तिगत चक्र की संरचना को निम्नानुसार दर्शाया जा सकता है:

1. डीएनए विकृतीकरण (पिघलना, डीएनए किस्में का विचलन) - 95 ° - 1 या 2 मिनट;
2. प्राइमरों की एनीलिंग (प्राइमर्स डीएनए टेम्प्लेट से बंधते हैं, इस चरण का तापमान प्राइमर की न्यूक्लियोटाइड संरचना द्वारा निर्धारित किया जाता है) - 60 डिग्री सेल्सियस (उदाहरण के लिए) - 1 मिनट;
3. डीएनए बढ़ाव (पोलीमरेज़ डीएनए स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है) - 72 डिग्री सेल्सियस - 1 मिनट (समय संश्लेषित टुकड़े की लंबाई पर निर्भर करता है)।

प्रयोगशाला में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन विधि के अनुप्रयोग के लिए सहायक आधार में निम्न शामिल होना चाहिए:

1. (या, जैसा कि इसे थर्मल साइकिलर भी कहा जाता है);
2. एस के लिए सिस्टम (पीसीआर परिणामों के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए);
3. सिस्टम (पीसीआर परिणामों के विश्लेषण के लिए);
4. (नमूना तैयार करने के लिए);
5. डायलिंग (यांत्रिक या इलेक्ट्रॉनिक)।

पीसीआर प्रयोगशाला के पूर्ण कामकाज के लिए मुख्य और सहायक उपकरणों के अलावा, कुछ उपभोग्य सामग्रियों की आवश्यकता होती है: स्टेराइल टिप्स, टेस्ट ट्यूब, टेस्ट ट्यूब रैक और डिस्पेंसर।

एक पूर्ण पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया करने के लिए एक पारंपरिक पीसीआर प्रयोगशाला में अभिकर्मक आधार में एक बफर के साथ एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़, प्राइमर (डीएनए टेम्पलेट के विश्लेषण किए गए क्षेत्र की शुरुआत और अंत के पूरक छोटे सिंथेटिक डीएनए टुकड़े) शामिल हैं। न्यूक्लियोटाइड्स (ए, टी, डी, टी) का मिश्रण। शुद्ध पानी भी नितांत आवश्यक है।

पीसीआर पद्धति के लाभ

अध्ययन की उच्च संवेदनशीलता

विधि की संवेदनशीलता ऐसी है कि पीसीआर में बढ़ाना और लक्ष्य अनुक्रम की पहचान करना संभव है, भले ही यह १० ५ कोशिकाओं के नमूने में एक बार हो।

विश्लेषण विशिष्टता

पीसीआर अन्य सूक्ष्मजीवों के डीएनए और मेजबान जीव के डीएनए की उपस्थिति में एक विशिष्ट संक्रामक एजेंट के डीएनए का पता लगाने की अनुमति देता है, साथ ही साथ जीनोटाइपिंग भी करता है। विशेष रूप से प्रतिक्रिया घटकों (प्राइमर्स) का चयन करके, आप एक साथ निकट से संबंधित सूक्ष्मजीवों के डीएनए का पता लगा सकते हैं।

पीसीआर विधि की बहुमुखी प्रतिभा

तथ्य यह है कि संक्रामक रोगों या वंशानुगत मानव रोगों के पीसीआर निदान के लिए, एक और एक ही उपकरण का उपयोग किया जा सकता है, नमूने (नमूने) और विश्लेषण तैयार करने के लिए सार्वभौमिक प्रक्रियाएं, साथ ही साथ एक ही प्रकार की अभिकर्मक किट का पालन किया जा सकता है।

समय बचाओ

पीसीआर का एक महत्वपूर्ण लाभ सांस्कृतिक सूक्ष्मजीवविज्ञानी कार्य के चरणों की अनुपस्थिति है। परिणामों का नमूना तैयार करना, प्रतिक्रिया करना और विश्लेषण करना कई मामलों में अधिकतम रूप से सुविधाजनक और स्वचालित है। इसके लिए धन्यवाद, परिणाम प्राप्त करने का समय 4-5 घंटे तक कम किया जा सकता है।

पीसीआर पद्धति की प्रभावशीलता

अध्ययन की गई नैदानिक ​​सामग्री की चौड़ाई

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन में एक नमूने के रूप में, न केवल रोगी से जैविक सामग्री का उपयोग किया जा सकता है, बल्कि कई अन्य सब्सट्रेट भी हैं जिनमें उच्च संवेदनशीलता वाले डीएनए अणुओं की पहचान की जा सकती है, उदाहरण के लिए, पानी, मिट्टी, भोजन, सूक्ष्मजीव, वॉश और बहुत कुछ अधिक। ...

इस अनूठी विधि के उपरोक्त सभी लाभ - उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता, एक संक्रामक एजेंट की पहचान और किसी भी मानव जीन की जीनोटाइपिंग, उच्च दक्षता और समय की बचत, साधन आधार की बहुमुखी प्रतिभा - आज पीसीआर पद्धति को नैदानिक ​​​​में व्यापक रूप से उपयोग करने की अनुमति देती है। निदान, चिकित्सा पद्धति, वैज्ञानिक अनुसंधान, नियंत्रण गुणवत्ता और कई अन्य क्षेत्र।

पीसीआर आवेदन

आणविक जीव विज्ञान की आधुनिक पद्धति के रूप में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन के अनुप्रयोग के क्षेत्र विविध हैं। यह काफी हद तक उस सामग्री की चौड़ाई के कारण है जिसका विश्लेषण किया जा सकता है (लगभग हर चीज जिसमें से कम या ज्यादा उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए को अलग किया जा सकता है, अनुसंधान का उद्देश्य बन सकता है), साथ ही साथ चयनित प्राइमर भी। पीसीआर के आवेदन के मुख्य क्षेत्र:

नैदानिक ​​दवा

• संक्रामक रोगों का निदान
• वंशानुगत रोगों का निदान
• उत्परिवर्तन की पहचान
• जीनोटाइपिंग
• सेल प्रौद्योगिकियां
• आनुवंशिक पासपोर्ट का निर्माण

परिस्थितिकी

• पर्यावरणीय निगरानी
• खाद्य विश्लेषण
• आनुवंशिक रूप से संशोधित जीवों का विश्लेषण (जीएमओ)

फोरेंसिक दवा और फोरेंसिक

• पहचान पहचान
• पितृत्व की स्थापना

औषध

पशुचिकित्सा

वैज्ञानिक अनुसंधान (आणविक जीव विज्ञान, आनुवंशिकी)

एक पीसीआर प्रयोगशाला का संगठन

आदेश की जानकारी

नाम	आयतन	उत्पादन	तरीका	बिल्ली.संख्या

साइट केवल सूचना के उद्देश्यों के लिए पृष्ठभूमि की जानकारी प्रदान करती है। किसी विशेषज्ञ की देखरेख में रोगों का निदान और उपचार किया जाना चाहिए। सभी दवाओं में contraindications है। एक विशेषज्ञ परामर्श की आवश्यकता है!

तरीका पोलीमरेज़ चेन रिएक्शनलगभग तीस साल पहले एक अमेरिकी वैज्ञानिक द्वारा खोजा गया था कैरी मुलिस... तकनीक एक नैदानिक ​​उपकरण के रूप में चिकित्सा में व्यापक है, और इसका सार एक विशेष एंजाइम का उपयोग करके डीएनए के एक टुकड़े की नकल करना है ( पोलीमर्स) कृत्रिम रूप से एक परखनली में।

चिकित्सा के किन क्षेत्रों में इस पद्धति का उपयोग किया जाता है?

डीएनए की नकल क्यों की जाती है और यह दवा कैसे काम कर सकती है?
यह तकनीक अनुमति देती है:

• अलग और क्लोन जीन।
• आनुवंशिक और संक्रामक रोगों का निदान करें।
• पितृत्व का निर्धारण करें। बच्चे को आंशिक रूप से अपने जैविक माता-पिता से आनुवंशिक विशेषताएं विरासत में मिलती हैं, लेकिन साथ ही उसकी अपनी विशिष्ट आनुवंशिक पहचान भी होती है। उसमें माता-पिता के जीन के समान कुछ जीनों की उपस्थिति - हमें रिश्तेदारी की स्थापना के बारे में बात करने की अनुमति देती है।

पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का उपयोग फोरेंसिक अभ्यास में भी किया जाता है।

अपराध स्थल पर, फोरेंसिक वैज्ञानिक आनुवंशिक सामग्री के नमूने एकत्र करते हैं। इनमें शामिल हैं: बाल, लार, रक्त। इसके बाद, पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया तकनीक के लिए धन्यवाद, डीएनए को बढ़ाना और संदिग्ध की आनुवंशिक सामग्री के साथ लिए गए नमूने की पहचान की तुलना करना संभव है।

दवा में, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन का प्रभावी ढंग से उपयोग किया जाता है:

• फुफ्फुसीय अभ्यास में - बैक्टीरिया और वायरल प्रकार के निमोनिया, तपेदिक के भेदभाव के लिए।
• स्त्री रोग और मूत्र संबंधी अभ्यास में - यूरियाप्लाज्मोसिस, क्लैमाइडिया, माइकोप्लाज्मा संक्रमण, गार्डनरेलोसिस, दाद, सूजाक का निर्धारण करने के लिए।
• गैस्ट्रोएंटेरोलॉजिकल अभ्यास में।
• रुधिर विज्ञान में - ओंकोवायरस और साइटोमेगालोवायरस संक्रमण के निर्धारण के लिए।
• वायरल हेपेटाइटिस, डिप्थीरिया, साल्मोनेलोसिस जैसे संक्रामक रोगों के तेजी से निदान में।

वर्तमान में, संक्रामक रोगों के निदान में यह विधि सबसे आम है ( वायरल एटियलजि के हेपेटाइटिस, एचआईवी, यौन संचारित रोग, तपेदिक, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस).

प्रतिक्रिया के दौरान क्या होता है?

प्रतिक्रिया ही रासायनिक रूप से जटिल है। प्रतिक्रिया के लिए डीएनए का स्रोत रक्त की एक बूंद, बाल, त्वचा का एक टुकड़ा आदि हो सकता है। सिद्धांत रूप में, एक प्रतिक्रिया के लिए सही अभिकर्मकों, एक परखनली, एक जैविक नमूने और एक ऊष्मा स्रोत की आवश्यकता होती है।

पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया आपको एक संक्रमण का पता लगाने की अनुमति देती है, भले ही जैविक सामग्री के नमूने में रोगज़नक़ के केवल एक या कई डीएनए अणु हों।

प्रतिक्रिया के दौरान, एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़ के लिए धन्यवाद, दोहरीकरण होता है ( प्रतिकृति) डीएनए का एक टुकड़ा। वही डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिक एसिड ( संक्षिप्त डीएनए) हमारे लिए इस मायने में महत्वपूर्ण है कि यह बेटी कोशिकाओं को आनुवंशिक जानकारी का भंडारण और हस्तांतरण प्रदान करता है। डीएनए में एक सर्पिल का रूप होता है, जो दोहराए जाने वाले ब्लॉकों से बना होता है। ये ब्लॉक न्यूक्लियोटाइड बनाते हैं, जो डीएनए का सबसे छोटा टुकड़ा होता है। न्यूक्लियोटाइड अमीनो एसिड से बनते हैं।

डीएनए के वर्गों की प्रतिकृति की प्रक्रिया दोहराए जाने वाले चक्रों के दौरान होती है। ऐसे प्रत्येक चक्र में, न केवल मूल डीएनए खंड की प्रतिलिपि बनाई जाती है और दोगुना किया जाता है, बल्कि वे टुकड़े भी होते हैं जो पिछले प्रवर्धन चक्र में पहले से ही दोगुने हो चुके हैं। यह सब ज्यामितीय प्रगति की प्रक्रिया जैसा दिखता है।

मौजूद:

• प्राकृतिक प्रवर्धन ( यानी डीएनए को कॉपी और गुणा करने की प्रक्रिया), जो हमारे शरीर में होता है और एक नियतात्मक, पूर्व निर्धारित प्रक्रिया है।
• कृत्रिम प्रवर्धन जो पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन के माध्यम से होता है। इस मामले में, प्रतिलिपि प्रक्रिया नियंत्रित होती है और आपको न्यूक्लिक एसिड के छोटे वर्गों को भी डुप्लिकेट करने की अनुमति देती है।

प्रत्येक नकल चक्र के पूरा होने के बाद, न्यूक्लिक एसिड के टुकड़ों की संख्या तेजी से बढ़ जाती है। इसलिए इस प्रक्रिया को ही "श्रृंखला प्रतिक्रिया" कहा जाता है।

तीस या चालीस चक्रों के बाद, टुकड़ों की संख्या कई अरब तक पहुँच जाती है।

प्रवर्धन के लिए कृत्रिम परिवेशीय (कृत्रिम परिवेशीय) यह आवश्यक है कि एक विशिष्ट विदेशी डीएनए टुकड़ा ( यानी डीएनए मरीज का नहीं, पैथोजन का होता है) यदि निर्मित समाधान में कोई विशिष्ट टुकड़ा नहीं है, तो पोलीमरेज़ की कार्रवाई के तहत श्रृंखला प्रतिक्रिया आगे नहीं बढ़ेगी। यह पीसीआर की उच्च विशिष्टता की व्याख्या करता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के चरण

1. डीएनए को परीक्षण सामग्री से अलग किया जाता है।
2. न्यूक्लियोटाइड के एक विशेष समाधान में डीएनए जोड़ें।
3. डीएनए प्रोटीन को जमाने के लिए घोल को 90 - 95 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गर्म किया जाता है।
4. तापमान को 60 डिग्री तक कम करें।
5. तापमान बढ़ने और घटने के चक्रों की पुनरावृत्ति के साथ, न्यूक्लिक एसिड क्षेत्रों की संख्या बढ़ जाती है।

6. वैद्युतकणसंचलन करके, परिणामों को संक्षेप में प्रस्तुत किया जाता है और दोहरीकरण परिणामों की गणना की जाती है।

इस निदान के क्या फायदे हैं?

• बहुमुखी प्रतिभा: कोई भी न्यूक्लिक एसिड का नमूना इस विधि के लिए उपयुक्त है।
• उच्च विशिष्टता: रोगज़नक़ में डीएनए किस्में के अद्वितीय अनुक्रम होते हैं जो इसके लिए विशिष्ट हैं। इसलिए, किए गए पीसीआर के परिणाम विश्वसनीय होंगे, एक रोगज़नक़ के जीन को दूसरे रोगज़नक़ के जीन के साथ भ्रमित करना असंभव है।
• रोगज़नक़ के एक भी अणु की उपस्थिति के प्रति संवेदनशीलता।

• अनुसंधान के लिए आवश्यक सामग्री की छोटी मात्रा। खून की एक बूंद भी काम आएगी। न्यूनतम नमूना मात्रा का उपयोग करके परिणाम प्राप्त करने की क्षमता बाल चिकित्सा, नवजात विज्ञान, तंत्रिका संबंधी अनुसंधान के साथ-साथ फोरेंसिक चिकित्सा के अभ्यास में बहुत महत्वपूर्ण है।
• एक सुस्त, पुराने संक्रमण की पहचान करने की क्षमता, न कि केवल एक तीव्र।
• कई रोग पैदा करने वाली संस्कृतियों को अन्य तरीकों से इन विट्रो में खेती करना बहुत मुश्किल है, और पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया संस्कृति को आवश्यक मात्रा में प्रचारित करने की अनुमति देती है।

इस निदान के नुकसान क्या हैं?

• यदि पीसीआर के लिए अभिप्रेत सामग्री में न केवल जीवित रोगज़नक़ों का, बल्कि मृतक का भी डीएनए होता है, तो दोनों डीएनए का प्रवर्धन होगा। तदनुसार, निदान के बाद उपचार पूरी तरह से सही नहीं हो सकता है। थोड़ी देर के बाद, उपचार की प्रभावशीलता की जांच करना बेहतर होता है।
• सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति के लिए अतिसंवेदनशीलता को एक तरह से नुकसान भी माना जा सकता है। दरअसल, आम तौर पर मानव शरीर में एक सशर्त रूप से रोगजनक माइक्रोफ्लोरा होता है, यानी ये सूक्ष्मजीव होते हैं जो आंतों, पेट और अन्य आंतरिक अंगों में रहते हैं। ये सूक्ष्मजीव केवल कुछ प्रतिकूल परिस्थितियों में ही किसी व्यक्ति को नुकसान पहुंचा सकते हैं - स्वच्छता आवश्यकताओं का पालन न करना, दूषित पेयजल, आदि। पीसीआर तकनीक इन सूक्ष्मजीवों के डीएनए को भी बढ़ाती है, हालांकि वे विकृति विज्ञान की ओर नहीं ले जाती हैं।
• विभिन्न परीक्षण प्रणालियों के पीसीआर ऐसे परिणाम दिखा सकते हैं जो आपस में भिन्न होंगे। इस तकनीक के कई संशोधन हैं: " नेस्ट», « असममित», « उल्टे», « मात्रात्मक»पीसीआर और अन्य।