पीसीआर परिभाषा। पीसीआर के लिए रक्त परीक्षण क्या है, और इसकी आवश्यकता क्यों है

संक्रामक बीमारियों के निदान में, रोगजनकों का पता लगाने के लिए विभिन्न प्रयोगशाला विधियों का उपयोग किया जाता है। सबसे प्रगतिशील, विशिष्ट और सटीक प्रयोगशाला परीक्षणों में से एक पीसीआर विधि का विश्लेषण है, जो रक्त और अन्य प्रकार की जैविक सामग्री की उपस्थिति को निर्धारित करने की अनुमति देता है, अन्य प्रकार के जैविक सामग्री, रोगों के विकास के पहले चरण में सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए, मामलों में वाहक संक्रमण का।

विशेष उपकरण पर पीसीआर पर विश्लेषण

पीसीआर का उपयोग करके नैदानिक \u200b\u200bपरीक्षण कैसे करें

पॉलिमरस चेन रिएक्शन डीएनए बैक्टीरिया और मशरूम, डीएनए और आरएनए वायरस का पता लगाने के लिए एक प्रयोगशाला आणविक जैविक विधि है। पीसीआर का आधार एक विशेष एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया है जो विशेष एंजाइमों और आणविक प्रकृति के पदार्थों की उपस्थिति में होती है। इस तथ्य के कारण कि विधि सीधे एक बीमारी की उपस्थिति को ठीक करने वाले एजेंट को ठीक करने में सक्षम है, यह अन्य सभी नैदानिक \u200b\u200bतरीकों की तुलना में अव्यक्त संक्रमण और वाहक की पहचान करते समय सबसे अधिक जानकारीपूर्ण और संवेदनशील माना जाता है।

पीसीआर परीक्षण का उपयोग करके जैविक नमूने का विश्लेषण आपको बैक्टीरिया और वायरस की उपस्थिति को तुरंत पहचानने की अनुमति देता है।

निदान के शेष प्रयोगशाला विधियों, एक नियम के रूप में, संक्रमण के अप्रत्यक्ष संकेत निर्धारित करते हैं, या एक लंबी परीक्षण प्रक्रिया की आवश्यकता होती है।

पीसीआर तकनीक का मुख्य चरण हैं:

• जैविक सामग्री लेना, डायग्नोस्टिक प्रयोगशाला में इसकी डिलीवरी,
• लाया सामग्री से बैक्टीरिया और वायरस की अनुवांशिक सामग्री का चयन,
• सीधे पीसीआर विश्लेषण और प्राप्त डेटा को डिकोड करना।

पीसीआर प्रतिक्रिया के निर्माण के लिए, तरल पदार्थ, ऊतकों, रहस्यों के नमूने, जिसमें रोगजनक सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति शामिल है। अक्सर, शिरापरक रक्त, प्लाज्मा या रक्त सीरम परीक्षण नमूने के रूप में उपयोग किया जाता है। प्रयोगशाला में, जीवाणु और वायरल कण शेष घटकों से अलग होते हैं और डीएनए या आरएनए अणु से विशेष अभिकर्मकों का उपयोग करते हैं।

पोलीमरेज श्रृंखला अभिक्रिया

अगले चरण में, ये अनुवांशिक अणु विशेष उपकरणों में गुणा गुणा करते हैं। ऐसा करने के लिए, विशेष एंजाइमों और अणुओं का उपयोग करें जो आपको कृत्रिम रूप से केवल एक विशेष रोगजनक से संबंधित डीएनए के डीएनए का प्रचार करने की अनुमति देते हैं। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, वायरस और बैक्टीरिया में शामिल लोगों के समान, लघु डीएनए टुकड़ों की एक बड़ी संख्या का गठन किया जाता है।

तीसरे चरण में, संचित टुकड़ों को पहचान के लिए विशेष रंगों और उपकरणों के साथ पाया जाता है। यदि प्रारंभिक नमूने में रोगजनक सूक्ष्मजीव निहित हैं, तो प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप एक विशिष्ट उत्पाद बनता है, और विश्लेषण सकारात्मक परिणाम दिखाता है। यदि रोगजनक सामग्री में नहीं था, तो प्रतिक्रिया उत्पाद संश्लेषित नहीं होता है और परीक्षण नकारात्मक परिणाम देता है।

पीसीआर विधि का परीक्षण संक्रमण का निदान करने के सबसे तेज़ तरीकों में से एक है। सामग्री की जांच का पूरा चक्र कई घंटों से एक दिन तक रहता है।

पीसीआर विधि - सार

यह डीएनए अणुओं के बार-बार पुनरुत्पादन की प्रतिक्रिया में एक बहु परिभाषित रूप का उपयोग है जो अधिकतम संवेदनशीलता वाले जैविक नमूने में सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति को सटीक रूप से निर्धारित करना संभव बनाता है। यहां तक \u200b\u200bकि ऊतकों और शरीर के तरल पदार्थों में संक्रामक एजेंटों की एक छोटी सी एकाग्रता भी प्रतिक्रिया उत्पाद और सकारात्मक निष्कर्ष की एक बड़ी मात्रा के संश्लेषण का कारण बन सकती है।

पीसीआर परीक्षण द्वारा क्या संक्रमण निर्धारित किया जाता है

पीसीआर प्रौद्योगिकी की मदद से, विभिन्न प्रकार के बैक्टीरिया की उपस्थिति, खमीर कोशिकाएं, वायरल कण पता लगाते हैं। आधुनिक नैदानिक \u200b\u200bअभ्यास में, निम्नलिखित बीमारियों के रोगजनकों का पता लगाने के लिए पीसीआर विश्लेषण सबसे आम है:

• एचआईवी संक्रमण (एड्स),
• हेपेटाइटिस (हेपेटाइटिस बी, हेपेटाइटिस सी और अन्य दुर्लभ किस्में),
• cytomegalovirus संक्रमण,
• मूत्र पथ के लगभग सभी संक्रामक रोग,
• कैंडिडाइसिस,
• माईकोप्लाज्मोसिस
• हर्पस वायरस के कारण संक्रमण,
• papillomorovirus संक्रमण,
• टोक्सोप्लाज़मोसिज़
• आंतों की बीमारियां
• डिप्थीरिया,
• क्षय रोग,
• दुर्लभ फोकल संक्रमण
• मोनोन्यूक्लोसिस और कई अन्य।

पॉलिमरेज़ चेन रिएक्शन जननांग संक्रमण, हेपेटाइटिस, एचआईवी, पेपिलम और अन्य बीमारियों का पता लगाने की सबसे आम, भरोसेमंद और तेज़ तरीका है।

कई निदान पीसीआर रोगों के लिए, निदान करने का यह एकमात्र तरीका नहीं है। रोग के अन्य संकेतों को देखते हुए केवल डॉक्टर द्वारा निदान की पुष्टि की जाती है।

वायरस और बैक्टीरिया की पहचान का आरेख

लेकिन कई मामलों के लिए, पॉलिमरस प्रतिक्रिया प्रयोगशाला निदान का "स्वर्ण मानक" है।

पीसीआर के साथ पता लगाने योग्य संक्रमण की सूची हर साल फैली हुई है। विधि के विकास ने पहले से ही कई रोगजनकों को निर्धारित करना संभव बना दिया है। इसने व्यापक सर्वेक्षण कार्यक्रमों के प्रसार की सेवा की। उनमें से: जीवाणु योनिओसिस पर माइक्रोफ्लोरा का एक व्यापक अध्ययन, मशाल संक्रमण की परिभाषा, उच्च और निम्न कार्सिनोजेनिक व्यक्ति के पेपिलोमा की पहचान करना। इसके अलावा, पीसीआर रक्त परीक्षण निदान के अनिवार्य अस्पताल परिसर में शामिल है।

एक बहुलक प्रतिक्रिया का उपयोग करके, वैज्ञानिक अणुओं को निर्धारित करने में सक्षम थे जो घातक ट्यूमर के विभिन्न रूपों के विकास को संकेत देते हैं - ऑनमोकर्स। जिसके कारण विधि को कैंसर के शुरुआती पहचान में एक आवेदन मिला। पीसीआर परीक्षणों का सक्रिय रूप से आनुवंशिक अनुवांशिक दोषों का पता लगाने के लिए किया जाता है, जिसमें प्रसवपूर्व निदान और गर्भावस्था नियोजन की प्रक्रिया में शामिल हैं।

पीसीआर विश्लेषण के लिए जैविक सामग्री की विशेषताएं

अध्ययन के लिए एक निश्चित प्रकार की सामग्री की बाड़ संक्रमण के प्रकार से निर्धारित की जाती है जिसे वे परीक्षण के परिणामस्वरूप निदान करना चाहते हैं। जैसा कि अध्ययन नमूने बाड़ हैं:

• जहरीला खून
• लार
• गाल के अंदर, गर्भाशय ग्रीवा नहर जैसे स्क्रैप,
• श्लेष्म नमूने
• मूत्र
• मलबे का तरल
• शुक्राणु नमूने और प्रोटोटेशन रहस्य,
• स्पुतम और ब्रोन्को-पल्मोनरी लैवेज,
• मूत्रमार्ग का चयन।

केवल विशेषज्ञ परिणामों को समझ सकते हैं।

व्यक्तिगत संक्रमण के मामले में और विशेष गवाही के साथ, डॉक्टर रीढ़ की हड्डी के तरल पदार्थ का विश्लेषण असाइन कर सकते हैं। इंट्रायूटरिन रोगों का पता लगाने में, प्लेसेंटा और स्पिंडल पानी के नमूने का उपयोग किया जाता है।

आम तौर पर, पीसीआर के साथ निदान करने के लिए, सामग्री का प्रकार इसका उपयोग किया जाता है जिसमें कारक एजेंट स्वयं ही ही प्रस्तुत होता है। विश्लेषण पर विश्लेषण पर होने पर जैविक सामग्री का प्रकार डॉक्टर द्वारा निर्धारित किया जाता है।

विश्लेषण के लिए सटीक और सही होने के लिए, सामग्री की बाड़ और छवियों और विश्लेषण की धारणा की विशेष शुद्धता के पालन से पहले सरल तैयारी आवश्यक है।

एक सटीक विश्लेषण परिणाम प्राप्त करने के लिए, आपको अध्ययन के लिए सामग्री की तैयारी और बाड़ के लिए कई नियमों का पालन करना चाहिए:

• जननांग अंगों से सामग्री की बाड़ से कुछ दिन पहले सेक्स संपर्कों को रद्द करें और रक्त परीक्षण के लिए यौन संक्रमण के निदान के मामले में,
• पीआरआर विश्लेषण पर शिरापरक रक्त सुबह में हाथ में हाथ में, पेय और भोजन नहीं पीने से पहले,
• रक्त वितरण से कम से कम दो घंटे पहले धूम्रपान न करें,
• मूत्र नींद के तुरंत बाद बाँझ कंटेनर में सख्ती से इकट्ठा।

महत्वपूर्ण! एंटीबायोटिक्स और अन्य दवाओं का स्वागत विश्लेषण के परिणामों को विकृत कर सकता है। सामग्री की डिलीवरी से पहले डॉक्टर से परामर्श लेना चाहिए।

यदि पीसीआर विश्लेषण जननांग सामग्री की बाड़ होने की योजना बनाई गई है, तो उपस्थित चिकित्सक के साथ समन्वय में जीवाणुरोधी स्वच्छता और शक्तिशाली दवाओं के उपयोग को रद्द करने की सिफारिश की जाती है।

पीसीआर का विश्लेषण करने के परिणाम को कैसे डिक्रिप्ट करें

पीसीआर विश्लेषण के परिणाम आमतौर पर उच्च गुणवत्ता वाले प्रारूप में दर्शाए जाते हैं। संक्रामक एजेंट या तो जैविक सामग्री के नमूने में पाया जाता है, या इसमें पता नहीं लगाया जाता है।

इस मामले में निष्कर्ष की व्याख्या यथासंभव सरल है:

• एक सकारात्मक परिणाम बताता है कि विश्लेषणात्मक नमूने में सूक्ष्मजीव उपस्थित थे,
• एक नकारात्मक परीक्षण इंगित करता है कि संक्रामक एजेंट का पता नहीं लगाया गया था।

ध्यान! नकारात्मक परिणाम कभी-कभी विश्लेषण की प्रक्रिया में सामग्री या त्रुटियों की गलत बाड़ का परिणाम होता है।

बीमारी के स्पष्ट लक्षणों और झूठे नकारात्मक परिणाम की संदेह की उपस्थिति में, अध्ययन को दोहराने के लिए सलाह दी जा सकती है।

पीसीआर विश्लेषण के लिए बड़ी सटीकता की आवश्यकता होती है

विशेष मामलों में, रोगजनक निर्धारित करने के लिए मात्रात्मक तरीकों का उपयोग किया जाता है। इस तरह के विश्लेषण के परिणाम एक निश्चित मात्रा में सामग्री के संदर्भ में डीएनए या आरएनए की डीएनए या आरएनए की प्राप्ति के रूप में जारी किए जाते हैं। उदाहरण के लिए, रक्त प्लाज्मा के प्रति मिलीलीटर डीएनए अणुओं की प्रतियों में।

पीसीआर के मात्रात्मक और अर्ध-मात्रात्मक विश्लेषण और इसके परिणामों को समझने से रोग के पाठ्यक्रम की निगरानी करने, वायरल लोड को निर्धारित करने, बीमारी के चरण की पहचान करने, सशर्त रोगजनकों के कारण बीमारियों का निदान करने के लिए किया जाता है।

PCR द्वारा डायग्नोस्टिक्स के लिए सकारात्मक पार्टियां

संक्रामक रोगों की इस तरह की एक विस्तृत श्रृंखला के निदान के लिए बहुलक श्रृंखला प्रतिक्रिया की विधि का सक्रिय परिचय कई फायदों से संभव बनाया गया था:

• विधि की उच्च विशिष्टता - विश्लेषण आपको एक सख्ती से परिभाषित प्रकार के डीएनए रोगजनकों का पता लगाने की अनुमति देता है,
• प्रक्रिया के प्रवाह और स्वचालन पर एक विश्लेषण बनाने की क्षमता,
• विधि की उच्च संवेदनशीलता और प्रारंभिक चरणों में बीमारी का निदान करने की क्षमता,
• डायग्नोस्टिक्स एक ही समय में कई संक्रमण;
• प्रक्रियाओं की गति और उपभोग्य सामग्रियों की एक छोटी सी लागत।

इस विधि के नुकसान में महंगी उपकरण की आवश्यकता, प्रयोगशाला की शुद्धता और तकनीकी विधि पर उच्च मांग, विश्लेषण तकनीक के अनुपालन में झूठी परिणाम प्राप्त करने की संभावना शामिल है।

कई संक्रामक बीमारियों के पर्याप्त और प्रभावी उपचार के लिए, समय पर एक सटीक निदान स्थापित करना आवश्यक है। इस कार्य को हल करने में, आणविक जीवविज्ञान विधियों के आधार पर आज की उच्च तकनीक नैदानिक \u200b\u200bविधियां शामिल हैं। वर्तमान में, पॉलिमरस चेन रिएक्शन (पीसीआर) व्यावहारिक चिकित्सा में प्रयोगशाला निदान के लिए सबसे विश्वसनीय उपकरण के रूप में पहले से ही व्यापक रूप से व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

वर्तमान में पीसीआर द्वारा क्या समझाया गया है?

सबसे पहले, इस विधि का उपयोग उच्च सटीकता के साथ विभिन्न संक्रामक बीमारियों के रोगजनकों की पहचान करने के लिए किया जाता है।

दूसरा, उपचार की प्रभावशीलता को नियंत्रित करने के लिए।

विभिन्न दिशानिर्देशों, प्रॉस्पेक्टस, लेखों के साथ-साथ विशेषज्ञ डॉक्टरों के स्पष्टीकरण में, हम अक्सर समझ में आने वाली शर्तों और शब्दों के उपयोग की सुविधा प्रदान करते हैं। रोजमर्रा के शब्दों में विज्ञान के उच्च तकनीक उत्पादों के बारे में बताना वाकई मुश्किल है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का सार और यांत्रिकी क्या है?

प्रत्येक जीवित जीव के अपने अद्वितीय जीन होते हैं। जीन डीएनए अणु में स्थित हैं, जो वास्तव में प्रत्येक विशेष जीव का एक "विज़िटिंग कार्ड" है। डीएनए (जेनेटिक सामग्री) एक बहुत लंबा अणु है जिसमें न्यूक्लियोटाइड नामक "ईंटें" शामिल हैं। संक्रामक बीमारियों के प्रत्येक कारक एजेंट, वे विशेष रूप से विशेष रूप से स्थित हैं, यानी, एक निश्चित अनुक्रम और संयोजन में। जब यह समझना आवश्यक है कि किसी व्यक्ति के पास एक विशेष रोगजनक है, एक जैविक सामग्री (रक्त, मूत्र, लार, स्मीयर) बंद है, जिसमें डीएनए या सूक्ष्मजीव डीएनए टुकड़े होते हैं। लेकिन रोगजनक की अनुवांशिक सामग्री की संख्या बहुत छोटी है, और यह कहना असंभव है कि यह वास्तव में सूक्ष्मजीव है। इस समस्या को हल करने और पीसीआर की सेवा करने के लिए। पॉलिमरस श्रृंखला प्रतिक्रिया का सार यह है कि डीएनए युक्त अध्ययन के लिए सामग्री की एक छोटी मात्रा, और पीसीआर प्रक्रिया में, एक विशिष्ट रोगजनक से संबंधित अनुवांशिक सामग्री की संख्या में वृद्धि हुई है, और इस प्रकार, की पहचान की जा सकती है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स बायोमटेरियल का एक अनुवांशिक अध्ययन है।

पीसीआर विधि का विचार अमेरिकी वैज्ञानिक के। मुल्लिन्स से संबंधित है, जिसे उन्होंने 1 9 83 में सुझाव दिया था। हालांकि, व्यापक रूप से क्लीनिकल उपयोग केवल XXVEK के 90 के दशक के मध्य में प्राप्त हुआ।

हम शब्दावली से निपटेंगे, यह क्या है - डीएनए, आदि किसी भी जीवित होने के प्रत्येक कोशिका (पशु, पौधे, आदमी, बैक्टीरिया, वायरस) गुणसूत्र होते हैं। गुणसूत्र आनुवंशिक जानकारी के रखवाले होते हैं जिनमें प्रत्येक विशेष जीवित होने के जीन के पूरे अनुक्रम होते हैं।

प्रत्येक गुणसूत्र में दो डीएनए धागे होते हैं जो एक दूसरे के सापेक्ष एक सर्पिल में घूमते हैं। डीएनए रासायनिक रूप से deoxyribonucleic एसिड है, जिसमें संरचनात्मक घटकों - न्यूक्लियोटाइड शामिल हैं। न्यूक्लियोटाइड्स 5 प्रजातियां हैं - टिमिन (टी), एडेनोसाइन (ए), गुआनाइन (जी), साइटोसाइन (सी) और यूराकाइल (वाई)। न्यूक्लियोटाइड एक दूसरे में एक सख्त व्यक्तिगत अनुक्रम में स्थित हैं, जीन बनाने के लिए। एक जीन में 20-200 ऐसे न्यूक्लियोटाइड शामिल हो सकते हैं। उदाहरण के लिए, इंसुलिन के उत्पादन में जीन एन्कोडिंग में न्यूक्लियोटाइड के 60 जोड़े होते हैं।

न्यूक्लियोटाइड में एक पूरक संपत्ति है। इसका मतलब यह है कि एक डीएनए श्रृंखला में एडेनाइन (ए) के सामने, टिमिन (टी) को एक और श्रृंखला में आवश्यक है, और गुनाइन (जी) - साइटोसाइन (सी) के विपरीत है। योजनाबद्ध रूप से इस तरह दिखता है:
श्री सी।
टी - ए।
ए - टी।
यह पूरकता संपत्ति पीसीआर के लिए महत्वपूर्ण है।

डीएनए के अलावा, एक ही संरचना में आरएनए - रिबोन्यूक्लिक एसिड होता है, जो इस तथ्य में डीएनए से भिन्न होता है कि थाइमाइन के बजाय, यूरैसिल इसका उपयोग किया जाता है। आरएनए कुछ वायरस में आनुवांशिक जानकारी का एक रक्षक है, जिसे रेट्रोवायरस कहा जाता है (उदाहरण के लिए, एचआईवी)।

डीएनए और आरएनए अणु "गुणा" कर सकते हैं (इस संपत्ति का उपयोग पीसीआर के लिए किया जाता है)। यह निम्नानुसार होता है: दो डीएनए धागे या आरएनए, एक दूसरे से तरफ से प्रस्थान करते हैं, एक विशेष एंजाइम प्रत्येक धागे पर बैठता है, जो एक नई श्रृंखला को संश्लेषित करता है। संश्लेषण पूरकता के सिद्धांत पर है, यानी, अगर न्यूक्लियोटाइड मूल डीएनए श्रृंखला के तहत होता है, तो नए संश्लेषित में, यह टी होगा यदि एम तब सी, आदि होगा। इस विशेष एंजाइम - संश्लेषण शुरू करने के लिए "बिल्डर" को "बीज" की आवश्यकता होती है - 5-15 न्यूक्लियोटाइड के अनुक्रम। यह "बीज" प्रत्येक जीन के लिए परिभाषित किया गया है (क्लैमिडिया जीन, माइकोप्लाज़्मा , वायरस) प्रयोगात्मक रूप से।

तो, पीसीआर के प्रत्येक चक्र में तीन चरण होते हैं। पहले चरण में, तथाकथित डीएनए स्पॉट होता है - यानी, इंटरकनेक्टेड दो डीएनए श्रृंखलाओं को अलग करना। दूसरे में - "बीज" लगाव डीएनए थ्रेड साइट पर होता है। और अंत में, डीएनए थ्रेड डेटा की लम्बाई, जो एंजाइम- "बिल्डर" द्वारा बनाई गई है। वर्तमान में, यह पूरी जटिल प्रक्रिया एक ट्यूब में आती है और पारंपरिक तरीकों से प्रकट होने वाली बड़ी संख्या में प्रतियां प्राप्त करने के लिए निर्धारित डीएनए के पुनरुत्पादन चक्रों को दोहराने के होते हैं। यही है, एक डीएनए धागे से, हमें सैकड़ों या हजारों मिलते हैं।

पीसीआर अनुसंधान के चरण

अनुसंधान के लिए जैविक सामग्री की बाड़

नमूना एक अलग जैविक सामग्री है: रक्त और उसके घटकों, पानी, लार, श्लेष्म झिल्ली से अलग, रीढ़ की हड्डी की सतह, शरीर की गुहाओं की सामग्री से अलग रीढ़ की हड्डी के तरल पदार्थ। सभी बायोप्रोड्यूल डिस्पोजेबल टूल्स द्वारा एकत्र किए जाते हैं, और डायल की गई सामग्री प्लास्टिक बाँझ परीक्षण ट्यूबों में निष्कर्ष निकाला जाता है या संस्कृति मीडिया पर रखा जाता है, इसके बाद प्रयोगशाला में परिवहन होता है।

आवश्यक अभिकर्मक आवश्यक अभिकर्मकों को जोड़ते हैं और एक प्रोग्राम करने योग्य थर्मोस्टेट में डालते हैं - एक थर्मल साइक्लर (एम्पलीफायर)। एम्पलीफायर 30-50 गुना पीसीआर चक्र जिसमें तीन चरणों (denaturation, annealing और लम्बाई) से मिलकर दोहराया जाता है। इसका क्या मतलब है? अधिक पर विचार करें।

अनुचित रूप से पीसीआर प्रतिक्रिया, आनुवंशिक सामग्री की प्रतिलिपि

मैं। पीसीआर चरण - प्रतिलिपि के लिए अनुवांशिक सामग्री की तैयारी।
यह 95 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर होता है, जबकि डीएनए धागे डिस्कनेक्ट होते हैं, और "बीज" उन पर बैठे हो सकते हैं।

"बीज" विभिन्न वैज्ञानिक और उत्पादन संघों के लिए एक औद्योगिक विधि द्वारा किया जाता है, और प्रयोगशालाएं तैयार हो रही हैं। साथ ही, "बीज" पहचानने के लिए, उदाहरण के लिए, क्लैमिडिया, केवल क्लैमिडिया आदि के लिए काम करता है। इस प्रकार, यदि बायोमटेरियल का परीक्षण क्लैमाइडियल संक्रमण की उपस्थिति के लिए किया जाता है, तो "बीज" को क्लैमिडिया के लिए प्रतिक्रिया मिश्रण में रखा जाता है; यदि एपस्टीन-बाररा वायरस पर बायोमटेरियल का परीक्षण, तो एपस्टीन बाररा वायरस के लिए "बीज"।

द्वितीय। चरण - संक्रमण के कारण और "बीज" की आनुवंशिक सामग्री का एसोसिएशन।
यदि निर्धारित वायरस या बैक्टीरिया का डीएनए है, तो इस डीएनए पर "बीज" बैठता है। "बीज" में शामिल होने की यह प्रक्रिया पीसीआर का दूसरा चरण है। यह चरण 75 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गुजरता है।

तृतीय चरण - संक्रमण रोगजनक की जेनेटिक सामग्री की प्रतिलिपि बनाना।
यह खुद को विस्तार या आनुवंशिक सामग्री का पुनरुत्पादन की प्रक्रिया है, जो 72 डिग्री सेल्सियस पर होती है। एक एंजाइम "बिल्डर" "बीज" के लिए उपयुक्त है और एक नई डीएनए श्रृंखला संश्लेषित करता है। नई डीएनए श्रृंखला के संश्लेषण के अंत के साथ, पीसीआर चक्र समाप्त होता है। यही है, एक पीसीआर चक्र के लिए, अनुवांशिक सामग्री की संख्या में वृद्धि दोगुनी हो गई है। उदाहरण के लिए, प्रारंभिक नमूने में नमूना में पहले पीसीआर चक्र के बाद, किसी भी वायरस के 100 डीएनए अणु थे, परीक्षण वायरस के 200 डीएनए अणु पहले से ही होंगे। एक चक्र 2-3 मिनट तक रहता है।

पहचान के लिए आनुवंशिक सामग्री की पर्याप्त संख्या बनाने के लिए, 30-50 पीसीआर चक्र आमतौर पर उत्पादित होते हैं, जिनमें 2-3 घंटे लगते हैं।

गुणा आनुवांशिक सामग्री की मंच पहचान

वास्तविक पीसीआर इस पर समाप्त होता है और फिर पहचान का कोई कम महत्वपूर्ण चरण नहीं होता है। पहचान के लिए, इलेक्ट्रोफोरोसिस की विधि या लेबल "बीज" का उपयोग किया जाता है। इलेक्ट्रोफोरोसिस का उपयोग करते समय, प्राप्त डीएनए धागे आकार में अलग होते हैं, और विभिन्न लंबाई के डीएनए के टुकड़ों की उपस्थिति विश्लेषण का सकारात्मक परिणाम इंगित करती है (यानी, वायरस, बैक्टीरिया इत्यादि की उपस्थिति के बारे में)। लेबल वाले "बीज" का उपयोग करते समय, क्रोमोजेन (डाई) प्रतिक्रिया के अंतिम उत्पाद में जोड़ा जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया रंग के गठन के साथ होती है। रंग का विकास स्पष्ट रूप से इंगित करता है कि प्रारंभिक नमूने में वायरस या अन्य पता लगाने योग्य एजेंट मौजूद है।

आज, लेबल वाले "बीज" के साथ-साथ उपयुक्त सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके, आप तुरंत पीसीआर के परिणामों को "पढ़ सकते हैं"। यह तथाकथित समय पीसीआर है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के पास ऐसा मूल्य क्यों है?

पीसीआर विधि के महत्वपूर्ण फायदों में से एक उच्च संवेदनशीलता है - 95 से 100% तक। हालांकि, ये लाभ निम्नलिखित शर्तों के अनिवार्य अवलोकन पर आधारित होना चाहिए:

1. सही बाड़, जैविक सामग्री का परिवहन;
2. बाँझ, डिस्पोजेबल उपकरण, विशेष प्रयोगशालाओं और प्रशिक्षित कर्मियों की उपस्थिति;
3. विश्लेषण के दौरान तकनीकों और बाँझपन का सख्त पालन

संवेदनशीलता विभिन्न ज्ञात सूक्ष्मजीवों के लिए अलग है। उदाहरण के लिए, हेपेटाइटिस सी वायरस की पहचान करने के लिए पीसीआर विधि की संवेदनशीलता 97-98% है, यूरेप्लाज्मा का पता लगाने की संवेदनशीलता 99-100% है।

पीसीआर विश्लेषण में रखी गई संभावनाएं अनगिनत विश्लेषणात्मक विशिष्टता प्राप्त करना संभव बनाती हैं। इसका मतलब है कि उस सूक्ष्मजीव की पहचान, जो की तलाश में थी, और समान या पास नहीं।
डायग्नोस्टिक संवेदनशीलता और पीसीआर विधि की विशिष्टता, अक्सर उन लोगों से अधिक है और संक्रामक बीमारियों की पहचान करने के लिए "गोल्ड स्टैंडर्ड" नामक संस्कृति विधि के लिए। संस्कृति संस्कृति की अवधि (कई दिनों से कई हफ्तों तक) को देखते हुए, पीसीआर विधि का लाभ स्पष्ट हो जाता है।

संक्रमण के निदान में पीसीआर
पीसीआर विधि (संवेदनशीलता और विशिष्टता) के फायदे आधुनिक चिकित्सा में अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला निर्धारित करते हैं।
पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के मुख्य क्षेत्र:

1. विभिन्न स्थानों की तीव्र और पुरानी संक्रामक रोगों का निदान
2. चिकित्सा की प्रभावशीलता की निगरानी
3. रोगजनक के प्रकार का स्पष्टीकरण

पीसीआर का उपयोग Obstetrics, Gynecology, Neonatology, बाल चिकित्सा, यूरोलॉजी, वेनियरोलॉजी, नेफ्रोलोजी, संक्रामक रोगों के क्लिनिक, ओप्थाल्मोलॉजी, न्यूरोलॉजी, फिजियोपुलोनोलॉजी इत्यादि में किया जाता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स का उपयोग अनुसंधान के अन्य तरीकों (एलिसा, एफआईएफ, रीफ, आदि) के साथ कुल मिलाकर किया जाता है। उनका संयोजन और उपयुक्तता उपस्थित चिकित्सक को निर्धारित करती है।

पीसीआर द्वारा मिली संक्रमण के संक्रमण

वायरस:

1. हिव -1 और एचआईवी -2 रेट्रोवायरस
2. herpetyiform वायरस
3. सरल हर्पस वायरस 1 और 2 प्रकार

पॉलिमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर, पीसीआर - पॉलिमरेज़ चेन रिएक्शन) जैविक नमूने में कुछ डीएनए टुकड़ों (जीन) की विभिन्न प्रतियों को प्राप्त करने के लिए एक विधि है।

आणविक जीवविज्ञान की एक विधि के रूप में पीसीआर का सार स्थितियों में विशेष एंजाइमों के साथ एक निश्चित जीन (डीएनए अनुभाग) की कई चुनिंदा प्रतिलिपि बनाना है कृत्रिम परिवेशीय।। पीसीआर की एक महत्वपूर्ण विशेषता निर्दिष्ट शर्तों से संबंधित एक विशिष्ट डीएनए (जीन) अनुभाग की प्रतियों की तैयारी है। डीएनए कॉपी प्रक्रिया के लिए समानार्थी "प्रवर्धन" है। डी एन ए की नकल विवो में।प्रवर्धन माना जा सकता है। हालांकि, प्रतिकृति के विपरीत, पॉलिमरस श्रृंखला प्रतिक्रिया की प्रक्रिया में, लघु डीएनए अनुभागों को बढ़ाया जाता है (न्यूक्लियोटाइड के अधिकतम 40,000 जोड़े)।

बुनियादी सिद्धांत

इसलिए, पीसीआर तापमान चक्र दोहराए जाने की प्रक्रिया में विट्रो में कुछ डीएनए टुकड़ों की एक बहु-प्रतिलिपि है। एक ही तापमान चक्र के भीतर प्रतिक्रिया प्रक्रिया कैसे आगे बढ़ती है?

एक न्यूक्लियोटाइड श्रृंखला का गठन एंजाइम डीएनए पॉलिमरस द्वारा किया जाता है। हालांकि, काम शुरू करने के लिए, एंजाइम को स्टार्टर साइट की आवश्यकता होती है। साइट्स के रूप में, "प्राइमर्स" (बीज) 15-20 न्यूक्लियोटाइड की लंबाई के साथ सिंथेटिक ओलिगोन्यूक्लियोटाइड होते हैं। प्राइमर्स दो (सीधे और रिवर्स) होना चाहिए, वे डीएनए मैट्रिक्स साइटों के पूरक हैं और यह प्राइमर्स द्वारा एक डीएनए खंड सीमित है, डीएनए पॉलीमरेज़ को एकाधिक में कॉपी किया जाएगा। पॉलिमरस के संचालन में न्यूक्लियोटाइड, डीएनए मैट्रिक्स के पूरक अनुक्रमों के अनुक्रमिक जोड़ शामिल हैं। इस प्रकार, एक तापमान चक्र में, दो नए डीएनए टुकड़े फिर से संश्लेषित होते हैं (क्योंकि डीएनए अणु - डबल-चेन, फिर प्रारंभ में दो मैट्रिस)। इस प्रकार, प्राइमरों द्वारा परिभाषित डीएनए अनुभाग की अरबों प्रतियां ट्यूब में 25-35 चक्रों के लिए जमा होती हैं। एक अलग चक्र की संरचना को निम्नानुसार दर्शाया जा सकता है:

1. डीएनए denaturation (पिघलने, डीएनए श्रृंखलाओं के बीच विसंगति) - 95 डिग्री सेल्सियस - 1 या 2 मिनट;
2. एनीलिंग प्राइमर्स (बीज एक डीएनए मैट्रिक्स से जुड़े होते हैं, इस चरण का तापमान प्राइमर की न्यूक्लियोटाइड संरचना द्वारा निर्धारित किया जाता है) - 60 डिग्री सेल्सियस (उदाहरण के लिए) - 1 मिनट;
3. डीएनए की लम्बाई (पॉलिमरेज डीएनए श्रृंखला को संश्लेषित करता है) - 72 डिग्री सेल्सियस - 1 मिनट (समय संश्लेषित खंड की लंबाई पर निर्भर करता है)।

प्रयोगशाला में पॉलिमरस श्रृंखला प्रतिक्रिया की विधि के उपयोग के लिए उपकरण ढांचा में शामिल होना चाहिए:

1. (या, जैसा कि इसे भी कहा जाता है, थर्मल साइक्लर);
2. सी के लिए सिस्टम (पीसीआर परिणामों को देखने के लिए);
3. सिस्टम (पीसीआर परिणामों का विश्लेषण करने के लिए);
4. (नमूना तैयारी के लिए);
5. सेट (यांत्रिक या इलेक्ट्रॉनिक)।

पीसीआर प्रयोगशाला के पूर्ण कार्यप्रणाली के लिए मुख्य और सहायक उपकरण के अलावा, कुछ उपभोग्य सामग्रियों की आवश्यकता होती है: ट्यूबों और डिस्पेंसर के लिए बाँझ युक्तियाँ, ट्यूब, तिपाई।

एक पूर्ण proymerase श्रृंखला प्रतिक्रिया करने के लिए एक पारंपरिक पीसीआर प्रयोगशाला में अभिकर्मक आधार में बफर, प्राइमर्स (छोटे सिंथेटिक डीएनए टुकड़ों, पूरक प्रारंभ और डीएनए मैट्रिक्स के विश्लेषण खंड के अंत) के साथ एक डीएनए polymerase एंजाइम शामिल है, एक मिश्रण न्यूक्लियोटाइड्स (ए, टी, जी, सी)। शुद्ध पानी भी बिल्कुल जरूरी है।

पीसीआर विधि के लाभ

अध्ययन की उच्च संवेदनशीलता

विधि की संवेदनशीलता इस तरह की है कि पीसीआर को बढ़ाना और लक्ष्य अनुक्रम की पहचान करना, भले ही यह 10 5 कोशिकाओं के नमूने में एक बार होता है।

विश्लेषण की विशिष्टता

पीसीआर आपको कई सूक्ष्मजीवों और मेजबान जीव के डीएनए की उपस्थिति में एक विशेष संक्रामक एजेंट के डीएनए की पहचान करने की अनुमति देता है, साथ ही साथ जीनोटाइपिंग भी कर सकता है। विशेष रूप से प्रतिक्रिया के घटकों का चयन (प्राइमर्स), आप एक साथ पास के सूक्ष्मजीवों के डीएनए की पहचान कर सकते हैं।

पीसीआर विधि की बहुमुखी प्रतिभा

तथ्य यह है कि संक्रामक बीमारियों के पीसीआर निदान, या किसी व्यक्ति की वंशानुगत रोगों के लिए, आप एक ही उपकरण का उपयोग कर सकते हैं, नमूने (नमूने) की तैयारी के लिए सार्वभौमिक प्रक्रियाओं का पालन कर सकते हैं और विश्लेषण का विश्लेषण करते हैं, साथ ही साथ एक ही प्रकार के अभिकर्मकों।

बचने वाला समय

पीसीआर का महत्वपूर्ण लाभ संस्कृति माइक्रोबायोलॉजिकल काम के चरणों की कमी है। नमूने की तैयारी, परिणामों की प्रतिक्रिया और विश्लेषण को जितना संभव हो सके और काफी हद तक स्वचालित किया जाता है। इसके कारण, परिणाम प्राप्त करने का समय 4-5 घंटे तक घटाया जा सकता है।

पीसीआर की विधि की प्रभावशीलता

अध्ययन नैदानिक \u200b\u200bसामग्री का अक्षांश

एक बहुलक श्रृंखला प्रतिक्रिया के साथ एक नमूने के रूप में, न केवल रोगी से जैविक सामग्री का उपयोग किया जा सकता है, बल्कि कई अन्य सब्सट्रेट जिनमें उच्च संवेदनशीलता वाले डीएनए अणुओं की पहचान की जा सकती है, उदाहरण के लिए, पानी, मिट्टी, भोजन, सूक्ष्मजीव, washes , और भी बहुत कुछ।

इस अद्वितीय विधि के सभी सूचीबद्ध फायदे उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता, संक्रामक एजेंट की पहचान और किसी भी मानव जीन, उच्च दक्षता और समय की बचत, डैशबोर्ड की सार्वभौमिकता के जीनोटाइपिंग को पूरा कर रहे हैं - हमें नैदानिक \u200b\u200bनिदान में व्यापक रूप से पीसीआर विधि का उपयोग करने की अनुमति दें, चिकित्सा अभ्यास, वैज्ञानिक अनुसंधान, नियंत्रण गुण और कई अन्य क्षेत्रों।

पीसीआर आवेदन

आणविक जीवविज्ञान की आधुनिक विधि के रूप में पॉलिमरस श्रृंखला प्रतिक्रिया के अनुप्रयोग विविध हैं। कई मायनों में, यह उस सामग्री के अक्षांश के कारण होता है जिसका विश्लेषण किया जा सकता है (लगभग सबकुछ, जिससे अधिक या कम गुणवत्ता की पहचान करना संभव है डीएनए अध्ययन की वस्तु बन सकता है), साथ ही चयनित प्राइमर्स। पीसीआर के मुख्य अनुप्रयोग:

नैदानिक \u200b\u200bदवा

• संक्रामक रोगों का निदान
• वंशानुगत रोगों का निदान
• उत्परिवर्तन की पहचान करें
• जीनोटाइपिंग
• सेल टेक्नोलॉजीज
• आनुवंशिक पासपोर्ट का निर्माण

परिस्थितिकी

• पर्यावरणीय निगरानी
• भोजन का विश्लेषण
• आनुवंशिक रूप से संशोधित जीवों का विश्लेषण (जीएमओ)

न्यायिक चिकित्सा और आपराधिक

• व्यक्तित्व की पहचान
• पितृत्व स्थापना

औषध

पशुचिकित्सा

वैज्ञानिक अनुसंधान (आण्विक जीवविज्ञान, जेनेटिक्स)

पीसीआर की प्रयोगशाला का संगठन।

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साइट स्वयं को परिचित करने के लिए पूरी तरह से संदर्भ जानकारी प्रदान करती है। रोगों का निदान और उपचार एक विशेषज्ञ की देखरेख में होना चाहिए। सभी दवाओं में contraindications है। एक विशेषज्ञ की परामर्श अनिवार्य है!

तरीका पोलीमरेज श्रृंखला अभिक्रिया लगभग तीस साल पहले अमेरिकी वैज्ञानिक द्वारा खोला गया था कैरी मुलिस। तकनीक एक नैदानिक \u200b\u200bउपकरण के रूप में दवा में व्यापक है, और इसके सार में विशेष एंजाइम की मदद से डीएनए अनुभाग की प्रतिलिपि बनाने में शामिल है ( पोलीमर्स) टेस्ट ट्यूब में कृत्रिम तरीका।

इस विधि को किस क्षेत्र में लागू किया जाता है?

कॉपी डीएनए क्या है और यह दवा कैसे हो सकती है?
यह तकनीक आपको निम्न अनुमति देती है:

• चयन और क्लोन जीन।
• अनुवांशिक और संक्रामक रोगों का निदान करें।
• पितृत्व को परिभाषित करें। बच्चे ने आंशिक रूप से अपने जैविक माता-पिता से अनुवांशिक विशेषताओं को विरासत में पाया है, हालांकि, इसकी अपनी अनूठी अनुवांशिक पहचान है। उनके पास मूल जीन के समान कुछ जीन हैं - आपको रिश्तेदारी की स्थापना के बारे में बात करने की अनुमति देता है।

फोरेंसिक अभ्यास में पॉलिमरस श्रृंखला प्रतिक्रिया भी लागू की जाती है।

अपराध दृश्य में, कार्यवाही अनुवांशिक सामग्री के नमूने एकत्र करती है। इनमें शामिल हैं: बाल, लार, रक्त। इसके बाद, बहुलक प्रतिक्रिया की विधि के कारण, डीएनए को संदिग्ध की अनुवांशिक सामग्री के साथ नमूना की पहचान और तुलना की जा सकती है।

दवा प्रभावी रूप से एक बहुलक श्रृंखला प्रतिक्रिया का उपयोग करती है:

• पल्मोनोलॉजिकल अभ्यास में - निमोनिया, क्षय रोग की जीवाणु और वायरल प्रजातियों के भेदभाव के लिए।
• स्त्री रोग संबंधी और मूत्र संबंधी अभ्यास में - यूरेप्लाज्मोसिस, क्लैमिडिया, माइकोप्लाज्मा संक्रमण, गार्डनेरेलोसिस, हर्पस, गोनोरिया का निर्धारण करने के लिए।
• गैस्ट्रोएंटेरोलॉजिकल प्रैक्टिस में।
• हेमेटोलॉजी में - Onkovirus और Cytomegalovirus संक्रमण को निर्धारित करने के लिए।
• वायरल हेपेटाइटिस, डिप्थीरिया, साल्मोनेलोसिस के रूप में ऐसी संक्रामक बीमारियों के तेजी से निदान में।

वर्तमान में, संक्रामक बीमारियों के निदान में यह विधि सबसे आम है ( हेपेटाइटिस वायरल ईटियोलॉजी, एचआईवी, वेनरियल रोग, तपेदिक, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस).

प्रतिक्रिया के दौरान क्या होता है?

प्रतिक्रिया ही रासायनिक रूप से सरल है। प्रतिक्रिया के लिए डीएनए का स्रोत रक्त, बाल, त्वचा का एक टुकड़ा इत्यादि की बूंद के रूप में कार्य कर सकता है। सिद्धांत रूप में, प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक अभिकर्मकों, एक परीक्षण ट्यूब, जैविक सामग्री का नमूना और एक गर्मी स्रोत की आवश्यकता होती है।

पॉलिमरसेस प्रतिक्रिया आपको संक्रमण की पहचान करने की अनुमति देती है, भले ही जैविक सामग्री के साथ नमूने में रोगगर के केवल एक या अधिक डीएनए अणु हों।

प्रतिक्रिया प्रवाह के दौरान, डीएनए polymerase एंजाइम के लिए धन्यवाद, दोगुना ( प्रतिकृति) डीएनए प्लॉट। Deoxyribonucleic एसिड खुद ( संक्षेप में डीएनए) आनुवंशिक जानकारी की सहायक कोशिकाओं को भंडारण और संचरण सुनिश्चित करना हमारे लिए महत्वपूर्ण है। डीएनए के पास एक प्रकार की सर्पिल है, जिसमें दोहराव वाले ब्लॉक होते हैं। ये ब्लॉक न्यूक्लियोटाइड बनाते हैं जो सबसे छोटे डीएनए कण होते हैं। न्यूक्लियोटाइड एमिनो एसिड से गठित होते हैं।

दोहराए गए चक्रों के दौरान डीएनए अनुभागों की प्रतिकृति की प्रक्रिया होती है। न केवल मूल डीएनए टुकड़ा को ऐसे चक्र में कॉपी किया जाता है, लेकिन पिछले प्रवर्धन चक्र में पहले से ही दोगुनी करने वाले उन टुकड़ों की प्रतिलिपि बनाई गई है। यह सब ज्यामितीय प्रगति की प्रक्रिया जैसा दिखता है।

मौजूद:

• प्राकृतिक प्रवर्धन ( यह डीएनए की प्रतिलिपि बनाने और प्रजनन की प्रक्रिया है), जो हमारे शरीर में होता है और एक निर्धारक, पूर्व निर्धारित प्रक्रिया है।
• कृत्रिम प्रवर्धन, जो बहुलक श्रृंखला प्रतिक्रिया के कारण होता है। इस मामले में, प्रतिलिपि प्रक्रिया को नियंत्रित किया जाता है और आपको न्यूक्लिक एसिड के छोटे क्षेत्रों को भी दोगुना करने की अनुमति देता है।

प्रत्येक प्रतिलिपि चक्र को पूरा करने के बाद, न्यूक्लिक एसिड टुकड़ों की संख्या ज्यामितीय प्रगति में बढ़ जाती है। यही कारण है कि प्रक्रिया को "चेन रिएक्शन" कहा जाता है।

तीस-चालीस चक्र, टुकड़ों की संख्या कई अरब तक पहुंच जाती है।

प्रवर्धन के लिए कृत्रिम परिवेशीय। (कृत्रिम परिवेशीय) यह आवश्यक है कि बायोस्रियल में निदान करने के लिए लिया गया था, डीएनए का एक विशिष्ट विदेशी टुकड़ा मौजूद था ( यही है, डीएनए एक रोगी नहीं है, बल्कि कारक एजेंट है)। यदि निर्मित समाधान में कोई विशिष्ट खंड नहीं है - पॉलिमरस की कार्रवाई के तहत श्रृंखला प्रतिक्रिया नहीं जाएगी। यह पीसीआर की उच्च विशिष्टता के तथ्य को बताता है।

पीसीआर डायग्नोस्टिक्स के चरण

1. अध्ययन के तहत सामग्री से, डीएनए प्रतिष्ठित है।
2. डीएनए को न्यूक्लियोटाइड से एक विशेष समाधान में जोड़ा जाता है।
3. डीएनए प्रोटीन लुढ़का के क्रम में, 90 95 डिग्री सेल्सियस के तापमान के लिए समाधान को गर्म करें।
4. तापमान को 60 डिग्री तक कम करें।
5. तापमान के तापमान को बढ़ाने के चक्रों को कम करते समय, न्यूक्लिक एसिड वर्गों की संख्या बढ़ जाती है।

6. इलेक्ट्रोफोरोसिस संचालित करके, परिणाम सारांशित किया गया है, और प्रतिक्रिया परिणामों की गणना की जाती है।

इस डायग्नोस्टिक्स के क्या फायदे हैं?

• सार्वभौमिकता: इस विधि के लिए, किसी भी न्यूक्लिक एसिड नमूने उपयुक्त हैं।
• उच्च विशिष्टता: कारक एजेंट में डीएनए श्रृंखलाओं के अद्वितीय अनुक्रम हैं, जो उनकी विशेषता हैं। इसलिए, बिताए गए पीसीआर के परिणाम विश्वसनीय होंगे, एक अन्य रोगजनक के जीनोम के साथ एक रोगजनक के जीन को भ्रमित करना असंभव है।
• एक भी कारक एजेंट अणु की उपस्थिति के प्रति संवेदनशीलता।

• अनुसंधान के लिए आवश्यक छोटी सामग्री। यहां तक \u200b\u200bकि रक्त की एक बूंद भी उपयुक्त है। परिणाम प्राप्त करने की क्षमता, नमूना की न्यूनतम मात्रा का उपयोग करके, बाल चिकित्सा, नवजात, न्यूरोलॉजिकल अध्ययन, साथ ही साथ फोरेंसिक दवा के अभ्यास के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।
• सुस्त, पुरानी संक्रमण को निर्धारित करने की संभावना, और न केवल तीव्र।
• कई रोगजनक संस्कृतियों को अन्य तकनीकों के साथ एक परीक्षण ट्यूब में खेती करना बहुत मुश्किल है, और पॉलिमरस प्रतिक्रिया वांछित मात्रा में गुणा संस्कृति की अनुमति देती है।

इस निदान के क्या नुकसान हैं?

• यदि कोई डीएनए न केवल एक जीवित रोगजनक है, बल्कि मृतक भी है - दोनों डीएनए का प्रवर्धन पीसीआर आयोजित करने के लिए सामग्री में होगा। तदनुसार, निदान के बाद उपचार को उचित रूप से नियुक्त किया जा सकता है। कुछ समय बाद, उपचार की प्रभावशीलता के नियंत्रण से गुजरना बेहतर होता है।
• सूक्ष्मजीवों की उपस्थिति के लिए बढ़ी हुई संवेदनशीलता को किसी भी तरह से नुकसान भी माना जा सकता है। आखिरकार, मानव शरीर में एक सशर्त रोगजनक माइक्रोफ्लोरा मौजूद है, यानी, ये सूक्ष्मजीव हैं जो आंतों, पेट, अन्य आंतरिक अंगों में रहते हैं। ये सूक्ष्मजीव केवल कुछ प्रतिकूल परिस्थितियों के तहत मनुष्य को नुकसान पहुंचा सकते हैं - स्वच्छता आवश्यकताओं के साथ अनुपालन, दूषित पेयजल इत्यादि। पीसीआर तकनीक भी इन सूक्ष्मजीवों के डीएनए को बढ़ाती है, हालांकि वे पैथोलॉजी का नेतृत्व नहीं करते हैं।
• विभिन्न परीक्षण प्रणालियों का पीसीआर परिणाम दिखा सकता है जो एक-दूसरे से टूट जाएंगे। इस तकनीक के कई संशोधन हैं: " नेस्ट», « असममितीय», « उल्टे», « मात्रात्मक»पीसीआर और अन्य।