Na podlagi protiteles in določitve kazalnikov njihove koncentracije v krvni plazmi poteka diagnostika številnih telesnih stanj. Eden od kazalcev je antinuklearni faktor, ki pod svojim imenom združuje skupino različnih vrst protiteles, usmerjenih proti celičnim komponentam. Ko se ugotovi tak dejavnik, je smiselno govoriti o avtoimunski bolezni, zlasti o sistemskem eritematoznem lupusu.
Čeprav je test univerzalen za ugotavljanje številnih sistemskih patologij telesa, zlasti tako resne bolezni, kot je eritematozni lupus, so z njo povezane nekatere zanimive značilnosti. Uporablja se od leta 1957, vendar je tehnika postala razširjena šele od konca 80. let prejšnjega stoletja. Treba je opozoriti, da prisotnost vsadkov v dojkah poveča titer protiteles proti jedru, kar opazimo pri 5% do 55% vseh primerov pri ženskah.
Kaj so
Kompleks protiteles, ki vključuje antinuklearni faktor, predstavlja več kot 200 kazalcev, najpogosteje so to imunoglobulini razreda G, v redkih primerih IgM in IgA. Pojavljajo se pri patologijah, za katere je značilna avtoimunska ali revmatična narava lezije zaradi oslabljene tolerance imunosti na lastna tkiva.
V nekaterih pogojih imunski sistem usmeri vse svoje sile ne v boj proti tujim dejavnikom, ampak proti lastnim tkivom, celicam, kar se običajno ne bi smelo zgoditi. Toleranca na nekatere celice, na katere vpliva agresija, je oslabljena in razvije se avtoimunska bolezen. Protitelesa, nastala med boleznijo, ali kompleksi se imenujejo avtoimunska.
Mnogi ljudje imajo majhne količine avtoprotiteles, vendar to ni znak bolezni. Le resna okvara imunosti lahko povzroči zvišanje ravni avtoprotiteles, to je razlog za ustrezno diagnozo. Še vedno pa ga je treba dopolniti z drugimi študijami, zlasti s krvjo, urinom in kliničnimi manifestacijami.
Pri osebi s sistemskim eritematoznim lupusom se ANF poveča še preden se pojavijo prvi simptomi. Od vseh bolnikov ima 95% povečan antinuklearni faktor v krvi, ki ga dopolnjujejo simptomi bolezni, kar pa potrjuje diagnozo.
Mehanizem pojavljanja faktorja
Obstaja več razlogov, ki prispevajo k razvoju bolezni pri ljudeh. Vse se zgodi v določenem zaporedju:
- Pod vplivom ultravijoličnega sevanja sonca na kožo se sprožijo procesi gensko programirane celične smrti, ki se imenuje apoptoza. To je normalna reakcija telesa, vendar se pri boleznih sistemske narave limfociti začnejo močno seliti.
- Za imuniteto so na voljo prej nedostopne, nevidne komponente celic, zlasti celična membrana, nukleoli, histoni, membrana jedra in drugi. Postanejo goli in makrofagi, namesto da bi uporabili tak material, še naprej prenašajo informacije in izzovejo imunski odziv telesa.
- B-limfociti, ki proizvajajo protitelesa proti jedrom, se odzivajo na signal, ki ga pošilja makrofag; medsebojno delujejo z ustreznim antigenom in tvorijo kompleks.
- Kompleksi se odlagajo na membranah organov, tkiv, to se obilno pojavi na površini žilne stene od znotraj, aktivira se komplement ali lokalni imunski odziv.
- Poškodba moti delovanje organa.
Analize, indikacije
Obstaja več znakov, da je predpisan test na protitelesa proti jedrom. Najprej gre za sum razvoja sistemskega eritematoznega lupusa, Sjogrenovega sindroma. Če obstaja ena sistemska bolezen, zdravnik sumi na drugo, na primer se lahko v ozadju lupusa razvije antifosfolipidni sindrom.
Simptomi, ko se je vredno testirati
Vedno obstajajo simptomi, katerih videz bi moral opozoriti osebo, jo prisiliti, da opravi pregled. Zdravnik mora pacienta usmeriti, če:
- Artritis, ki se kaže z vnetjem sklepa, z bolečino, oteklino, oslabljeno gibljivostjo, pordelostjo kože nad njo in zvišano telesno temperaturo.
- Pregled perikarditisa, plevritisa, katerega vzrok ni znan, ne bo motil.
- Poškodbe ledvic, povezane s kršitvijo imunskega sistema, pojavom sprememb v analizi urina, zlasti beljakovin, krvi.
- Drugi pokazatelj je hemolitična varianta anemije, pri kateri se eritrociti uničijo v velikih količinah, raven bilirubina v krvi naraste in analiza urina.
- Indikacija je zmanjšanje ravni trombocitov, nevtrofilcev v formuli levkocitov.
- Kožne manifestacije v obliki izpuščaja, odebelitve, ki se pojavi po izpostavitvi soncu.
- Raynaudov sindrom, pri katerem prsti in roke občasno spreminjajo barvo. Postanejo bledi, modri ali pordela, občutljivost je motena, bolečina skrbi.
- Indikacija so neznačilni simptomi nevrologije ali psihiatrije.
- Če se temperatura dvigne, se pojavi utrujenost, zmanjša se telesna teža in povečajo bezgavke.
Raziskovalne sorte
Obstajata dve metodi, ki vam omogočata, da določite protitelesa proti jedru v krvi. Prva se imenuje posredna imunofluorescenčna mikroskopija. Celična linija zanjo izhaja iz adenokarcinoma v predelu grla. Če obstajajo antinuklearna protitelesa, se vežejo na specifične antigene, nakar se dodajo oznake, ki lahko svetijo v določenem spektru svetlobe. Pod mikroskopom je mogoče določiti intenzivnost, vrsto sijaja.
Ta tehnika je priznana kot najboljša za določanje indikatorja antinuklearnih protiteles. Ima drugo ime - testni lističi za lupus.
Rezultat študije je titer ali največja redčenje krvi, ki daje sijaj. Če je rezultat pozitiven, je opisana vrsta sijaja. Titer naraste, ko se veliko kopiči protitelesa. Nizek titer lahko štejemo za negativen rezultat, z visokim titrom pa lahko rečemo, da se koncentracija antinuklearnih protiteles povečuje.
Druga diagnostična možnost je encimska imunska analiza. Njegovo bistvo je v tem, da protitelesa, ki so v krvi, pridejo v stik z ustreznim antigenom, rezultat pa je, da raztopina spremeni barvo.
Treba je opozoriti, da pozitiven rezultat testa ni absolutna diagnoza. To je signal, da je potreben dodaten pregled, ki bo pomagal prepoznati bolezen v zgodnjem obdobju in predpisati zdravljenje. Z negativno analizo antinuklearnih dejavnikov lahko govorimo o njihovi popolni odsotnosti, vendar diagnoza domnevne avtoimunske patologije ni izključena.
Za različne kazalnike je nujno opraviti krvne preiskave. Vendar je treba spomniti, da na rezultat lahko vpliva vnos nekaterih zdravil, pa tudi akutne ali kronične bolezni. Specialist bo vedno pomagal razumeti vse zapletenosti, nato pa bo postavil diagnozo, priporočil, kaj storiti naprej.
Dolgo sem hotel pisati o antinuklearnem faktorju, vendar me je ves čas nekaj ustavilo. Zakaj? No, ker s pisanjem o tem poskušam dojeti neizmernost in kratkost očitno ni sestra mojega talenta)))
Določanje antinuklearnega faktorja (ANF) je glavna metoda za odkrivanje antinuklearnih protiteles, ki omogoča odkrivanje večine vrst protiteles proti jedru. Rezultat določanja ANF je samo dejstvo prisotnosti avtoprotiteles, končni titer razredčitve seruma in vrsta luminiscence celičnega jedra.
ANF ni eno protitelo!
Metodo za odkrivanje ANP je razvil Tan (1982), pri čemer je kot substrat uporabil človeško presadljivo epitelioidno celično linijo HEp-2 (to ime ste morda videli na obrazcu za analizo). Ta celična linija izhaja iz tumorja človeškega grla (adenokarcinom). Zaradi primerjalne nezahtevnosti te linije, velikih jeder in prisotnosti vseh človeških antigenov je bila metoda posredne imunofluorescencije (nRIF) z uporabo neprekinjene celične linije HEp-2 glavna metoda za odkrivanje ANP.
Druge celične linije se lahko uporabljajo tudi kot substrati (glej vrtiljak); vendar je zaradi dobre morfologije in enostavnosti gojenja linija Hep-2 postala splošno priznan substrat za posredno imunofluorescenco. V angleški literaturi se ta metoda včasih imenuje FANA (Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).
Včasih se pod izrazom "antinuklearna protitelesa" imunološki laboratoriji nanašajo na teste, ki temeljijo na metodah encimske imunske analize in imunokemijske analize ter na metodi imunofluorescencije.
Antinuklearni faktor (ANF) je protitelo, ki ga odkrijemo z imunofluorescenco.
Odkriti je treba ANF razreda IgG, saj odkrivanje ANF, ki ga predstavljajo drugi razredi imunoglobulinov, nima neodvisnega pomena.
Titr ANF je opredeljen kot zadnja redčenje pacientovega seruma, ki ima jasno fluorescenco (luminescenco) celičnih jeder. Pri uporabi celične linije HEp-2 je priporočljivo uporabiti začetni titer 1:80; v tem primeru so normalni titri ANF manjši od 1: 160. Za določitev končnega titra se običajno uporablja titracija s korakom x2 (1: 160-1: 320 - 1: 640 - 1: 1280 - 1: 2560 - 1: 5120 itd.).
V ozadju poslabšanja bolezni se običajno zabeležijo titri ANF, večji od 1: 640, z remisijo pa se lahko titri zmanjšajo na 1: 160-1: 320.
Točkovanje rezultatov odkrivanja ("v križih" +++) omogoča laboratorijem, da prihranijo reagente in zmanjšajo stroške dela za izvajanje raziskav. V tem primeru določitev končnega titra ni mogoča
Zaželeno je določiti končni titer pri vseh pozitivnih bolnikih, kar omogoča razjasnitev prisotnosti avtoprotiteles v serumu, ki so tesneje povezane z aktivnostjo procesa.
Vrste sijočih jeder
Vrsta jedrskega sija je ena ključnih značilnosti pri odkrivanju ANF. Vsaka vrsta antinuklearnih protiteles (ANA) ima posebne celice v celici in odraža interakcijo pacientovega seruma s strukturami v celici. Vrsta luminiscence je odvisna od prisotnosti specifičnih avtoprotiteles v krvi, na podlagi katerih je mogoče narediti predhodni zaključek glede tistih vrst protiteles, ki so prisotne v tem serumu. Vrsta luminescence celičnega jedra bistveno poveča vsebnost informacij pri odkrivanju ANF.
Uporaba celic HEp-2 omogoča opredelitev več kot 20 različnih variant jedrskega obarvanja; za klinično prakso pa zadošča, da izločimo glavne. Vsaka vrsta sijaja ima zelo značilne lastnosti, ki omogočajo razlikovanje ene možnosti od druge.
Ob homogena vrsta sijaja Avtoprotitelesa reagirajo s tistimi antigeni, ki so v jedru razpršeno porazdeljeni, t.j. so del kromatina.
Na kakšen način? Protitelesa proti nukleosomom, DNA, histonom.
Kdaj? Pri bolnikih s SLE in lupusom, ki ga povzroča zdravilo, pa tudi pri bolnikih s sklerodermo.
Pogosto odkrivanje visokega titra ANP s homogeno vrsto fluorescence kaže na diagnozo SLE.
Vrsta perifernega sijaja lahko ločeno ločimo, čeprav je nekakšen homogen. Periferni tip luminescence najdemo pri bolnikih s protitelesi proti dvoverižni DNK in jo odkrijemo predvsem pri SLE, boleznih jeter.
Zrnati tip (pegasti, mrežasti) je najpogostejša in hkrati največ nespecifično.
Na kakšen način? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B antigeni in PCNA.
Kdaj? SLE, Sjogrenova bolezen / sindrom, skleroderma, dermatomiozitis / polimiozitis, RA in številne druge bolezni. Nizki titri (1: 160-1: 320) ANF z zrnatim tipom fluorescence je lahko v krvnem serumu klinično zdravih posameznikov BREZ znakov sistemske bolezni.
Odkrivanje zelo visokih titrov ANP (1: 2560-1: 10000) z velikozrnatim tipom jedrske fluorescence običajno kaže na diagnozo in zahteva dodatne preiskave za identifikacijo antigena RNP.
Jedri nukleolusov lahko delujejo kot tarče za ANA, kar vodi do odkrivanja nukleolarni tip fluorescence.
Na kakšen način? RNA polimeraza 1, NOR, U3RNP, PM / Scl.
Kdaj? Skleroderma in njene sorte.
Centromerični tip opazimo ga, ko se pojavijo protitelesa proti kromosomskim centromerom, in ga najdemo le v celicah, ki se delijo. Njegova prisotnost je značilna za sindrom CREST (varianta skleroderme).
Citoplazemski tip sijaja.
Na kakšen način? Protitelesa proti sintetizam tRNA, zlasti Jo-1, ki jih opazimo pri polimiozitisu. Poleg tega se odkrije pri bolnikih z ANA, usmerjenimi proti drugim sestavinam celične citoplazme: pri avtoimunskem hepatitisu, pri primarni biliarni cirozi.
Opredelimo lahko številne druge vrste sijaja. Protitelesa proti Scl-70 dajejo drobnozrnati obarvanje jedra in jeder, anti -p80 - svetleče točke v jedru, ki jih v mitotičnih celicah ni.
Pogosto se lahko pojavi kombinacija več vrst luminiscence, na primer drobnozrnatega in nukleolarnega, kar je značilno za protitelesa proti Scl-70.
Včasih pri nizkih razredčitvah prevladuje ena vrsta fluorescence, na primer zrnata, pri nadaljnjih razredčitvah pa se odkrijejo homogene ali centromerične vrste fluorescence, kar kaže na prisotnost različnih vrst ANA v serumu bolnika.
Antinuklearna protitelesa (ANA, ANA, antinuklearna protitelesa, antinuklearni faktor-ANF)-metoda NIF na celični liniji HEp-2 z določitvijo vrste fluorescence.- indikator avtoimunskih bolezni vezivnega tkiva. ANA je skupina avtoprotiteles proti beljakovinam in drugim sestavinam (vključno z DNA), ki jih najdemo v jedru celic. Glavne indikacije za uporabo: izključitev diagnoze - sistemski eritematozni lupus (meni se, da se ANA pojavi v 90% primerov SLE, z drugimi besedami, negativen rezultat z verjetnostjo približno 90% izključuje diagnozo SLE), diferencialna diagnoza sistemskih kolagenskih bolezni (sistemski eritematozni lupus, skleroderma, nodularni periarteritis, dermatomiozitis), kronični aktivni hepatitis.
Do danes je bilo opisanih več kot 200 sort ANA, usmerjenih proti nukleinskim kislinam, histonom, beljakovinam jedrske membrane, komponentam spliceosomov, ribonukleorheinom, nukleolarnim proteinom in centromerom. Hkrati poškodujejo vezivno tkivo, kar je prispevalo k uvedbi določanja antinuklearnega faktorja kot testa za sistemske bolezni vezivnega tkiva. Izraz "antinuklearni faktor" pomeni test za odkrivanje antinuklearnih protiteles z uporabo metode posredne imunofluorescence.
Ena od metod za odkrivanje antinuklearnega faktorja v krvi (antinuklearna protitelesa) je metoda posredne imunofluorescencije z nanašanjem pacientovega seruma na celice tkiva presajene človeške celične linije HEp-2 (epitelijski karcinom grla človeka Hep-2, ki vsebuje različne celice jedrski antigeni) z uporabo označenega konjugata s človeškimi protitelesi. Druge človeške celične linije se lahko uporabljajo tudi kot substrati; vendar so zaradi dobre morfologije in priročnosti gojenja linije Hep-2 postale splošno priznan substrat za posredno imunofluorescenco. Metodo odkrivanja ANP je Tan razvil leta 1982 z uporabo epitelioidne celične linije HEp-2, ki jo je mogoče presaditi pri ljudeh. Ta celična linija, ki izhaja iz adenokarcinoma človeškega grla, je velika poliploidna ne-keratinizirana ploščata epitelijska celica, ki tvori enoslojno steklo. Pacientov serum se inkubira s tkivnim substratom, medtem ko se antinuklearna protitelesa iz bolnikovega seruma (če so prisotna) vežejo na ustrezne jedrske antigene. Mesta vezave avtoprotiteles odkrijemo s protitelesi proti človeku, označenimi s fluoresceinom. Rezultate reakcije ovrednotimo z mikroskopijo z uporabo luminescenčnega mikroskopa in vizualno ocenimo naravo luminiscencije vezanih protiteles. Med prednostmi HEp-2 (v primerjavi s kriosekcijo živalskih tkiv) je mogoče omeniti visoko frekvenco celične delitve, ki omogoča odkrivanje protiteles proti antigenom, izraženim le med celično delitvijo, in odsotnost matriksa celičnega tkiva , kar otežuje vizualizacijo specifične fluorescence v primerjavi s histološkimi odseki. Pri nekaterih boleznih, kot so SLE, sistemska skleroderma (sistemska skleroza), nekaterih okužbah, pacientov imunski sistem zaznava jedra (beljakovine jeder) celic lastnih tkiv kot tuja in proti njim proizvaja protitelesa (protitelesa proti jedrom - AHA). Hkrati poškodujejo vezivno tkivo, kar je prispevalo k uvedbi določanja antinuklearnega faktorja kot testa za sistemske bolezni vezivnega tkiva.
Pri razlagi podatkov je treba upoštevati, da spekter AHA vključuje veliko skupino avtoprotiteles proti DNK, nukleoproteine, histone, jedrske ribonukleoproteine in druge sestavine jedra. Tako je test namenjen odkrivanju različnih protiteles proti sestavinam jedra in citoplazmi, ki so bile prvič odkrite pri SLE. V prihodnosti so bila diagnostična merila testa razširjena v povezavi z odkrivanjem teh protiteles in pri drugih boleznih vezivnega tkiva.
Pri presejalnih testih za določanje skupne ANA se običajno uporablja niz naslednjih antigenov, ki so glavni označevalci avtoimunskih bolezni vezivnega tkiva: SS-A (Ro), SS-B (La), BNP70, Sm, RNP / Sm, J01, centromera B.
Glavni antigeni, ki se uporabljajo v sodobnih kompletih za odkrivanje jedrskih protiteles razreda IgG, so predstavljeni z naslednjim nizom:
- SS -A (Ro) - jedrski ribonukleoproteini (polipeptidi). Na njih najdemo protitelesa, pogosteje pri sistemski sklerodermiji (60% primerov), Sjogrenovem sindromu (do 70% primerov) in pri SLE (do 30% primerov). Menijo, da če so ta protitelesa v krvi nosečnic, je to pokazatelj tveganja za povečan pojav neonatalnega lupusu podobnega sindroma pri novorojenčku (sindrom neonatalnega lupusa). Ta materina protitelesa prehajajo skozi posteljico in povzročijo poškodbe ploda, kar povzroči hemolitično anemijo in trombocitopenijo. Hude posledice vključujejo poškodbe prevodnega sistema otrokovega srca (do stalne srčne stimulacije). Opozoriti je treba, da pri ženskah, pri katerih so med nosečnostjo odkrili pomemben titer teh protiteles, brez očitnih kliničnih znakov, pozneje nastanejo avtoimunske bolezni, vključno s SLE.
- SS -B (La) - jedrske beljakovine. Protitelesa proti njim se odkrijejo v do 60% primerov s Sjogrenovim sindromom in v 15% primerov s SLE.
- Scl-70 je beljakovinski encim, ki sodeluje pri izmenjavi nukleinskih kislin (topoizomeraza-1). Protitelesa proti tej beljakovini so najbolj specifična pri sistemski sklerodermiji (do 70% primerov).
- Dvoverižna DNA je nativna DNK. Protitelesa proti DNK so najbolj specifična pri SLE (do 80% primerov) in jih pri revmatoidnem artritisu in sklerodermi praktično ne zaznamo.
- RNP / Sm-Kompleks antigena RNP / Sm je sestavljen iz ribonukleoproteinov U1: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; in tudi iz Sm-polipeptidov: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Protitelesa, ki nastanejo proti tem antigenom, so najbolj specifična za mešane bolezni vezivnega tkiva - t.j. ob prisotnosti simptomov skleroderme, revmatoidnega artritisa, SLE, polimiozitisa (približno 95% primerov) in v manjši meri pri SLE (do 30% primerov).
- Jo -1 - encim - aminoaciltransportna RNA sintetaza. Autoprotitelesa proti tej beljakovini so diagnostično pomembna pri miozitisu (polimiozitis / dermatomiozitis).
- CENP-B (Centromere)-za odkrivanje protiteles proti centromerom (Anti-Centromer B), za diagnosticiranje sindroma CREST (ta sindrom je kombinacija kalcifikacije kože, Raynaudovega sindroma, motenj gibljivosti požiralnika, sklerodaktilije, telangiektazije). CREST sindrom se nanaša na varianto sistemske skleroderme (sistemska skleroza). Ta protitelesa pri bolnikih kažejo na ugoden potek sistemske sklerodermije in na rahlo lezijo notranjih organov.
- Hep-2 celice-humani epitelijski karcinom grla Hep-2 celice, ki vsebujejo veliko različnih jedrskih antigenov, vključno z antigenom SS-A (Ro) in antigeni centromere. Protitelesa proti Hep-2 najdemo pri bolnikih s polimiozitisom in dermatomiozitisom do 90% primerov.
- Mitohondrije (PDC) - PDC - kompleks piruvat dehidrogenaze. Velika skupina antimitohondrijskih protiteles so avtoprotitelesa, ki nastanejo na encimih kompleksa piruvat dehidrogenaze, ki se nahajajo v mitohondrijih celic in sodelujejo pri oksidativni dekarboksilaciji piruvata.
ANA pogosto najdemo pri biliarni cirozi jeter.
AHA običajno ne vstopajo v žive celice in so zato neškodljive. Včasih pa tvorijo komplekse antigen-protitelo, ki povzročijo poškodbe tkiva (na primer poškodbe ledvic pri SLE). Zaradi vpletenosti številnih organov v patološki proces je diagnostična vrednost definicije AHA majhna in rezultati analize le delno potrjujejo klinične podatke.
Poleg revmatičnih bolezni ANA najdemo pri kroničnem aktivnem hepatitisu do 50% primerov. Pojav (nizek titer) je možen pri vnetnih boleznih, onkologiji in virusnih okužbah.
- Primerjalna pogostost odkrivanja antinuklearnih protiteles.
Bolezen in stanje Stopnja zaznavanja,% SLE 95-100 Lupoidni hepatitis (novo ime - kronični avtoimunski hepatitis) 70 -80% Feltyjev sindrom (Felty. 1924) - revmatoidni artritis + splenomegalija + nevtropenija + levkopenija + limfadenopatija. 95-100 Sistemska skleroderma 75-80 Sindrom zdravila lupus (hidralazin, prokainamid, izoniazid) Približno 50 Sjogrenov sindrom (avtoimunska sistemska poškodba vezivnega tkiva. Zanj je značilna vpletenost v patološki proces žlez zunanje sekrecije, predvsem slinaste in solzne ter kronični progresivni potek). 40-75 Klinično zdravi sorodniki bolnika s SLE Približno 25 Diskoidni eritematozni lupus 15-50 Kronični juvenilni artritis, revmatoidni artritis 15-30 Nodozni periarteritis 15-25 Dermatomiozitis in polimiozitis 10-30 Revmatizem Okoli 5 Raynaudov sindrom 15-20