/ 16
Najslabše, najhujše Najboljše
Raziskava o okužbi s HIV je predmet:
2. osebe z sumom ali potrjeno diagnozo: bakterijska okužba pri otrocih, mlajših od 13 let, večkratne in ponavljajoče se; Kandidoza požiralnika, sapnika, bronchija ali pljuč; Rak vratnega vratu; razširjena ali ekstraktivna kokcidomikoza; kriptokkokokokoza ekstrapulacijskih; kriptosporidioza z drisko 1 mesec ali več; citomegalovirus lezion drugih organov, razen jeter, vranice, bezgavk vozlišč pri bolnikih, starejših od 1 mesec; citomegalovirusni retinitis z izgubo vida; Herpetična okužba, ki povzroča več razjed, ki niso sušene za 1 mesec, ali bronhitis, pljučnice, esophagitis; histoplazmoza, ki se je razširila ali ekstrapilenca; Izopaka z drisko več kot 1 mesec; Tuberkuloza skupna ali ekstrapulmonarna; pljučna tuberkuloza pri odraslih ali mladostnikih, starejših od 13 let; tuberkuloza ekstrapulić; Druga bolezen, ki jo povzročajo Mycobacterium, razen M. Tuberkuloze, razširjene ali ekstrapuloze; pljučnice, ki jih povzročajo pnevmatike; progresivna multifoksi levoentenalopatija; Salmonellus (razen Salmonella Typhi) septikemije ponavljajočih se; Moza toksoalaze mosa pri otrocih, starejših od 1 meseca; Caposhi Sarkom; limfoidna intersticijska pljučnica pri otrocih, mlajših od 13 let; Berkitta limfom; Imunoblastični limfom; primarni možganski limfom; Sindrom izčrpanja, hepatitis B, prevoz HBsAg; nalezljiva mononukleoza; ponavljajoče se zavetišče herpes pri osebah, starejših od 60 let; spolno prenosljive bolezni.
V visoko specializiranem laboratoriju se izvede:
a) določitev protiteles, ki krožijo v krvi, antigenih in imunskih kompleksih; gojenje virusa, odkrivanje genomskega materiala in encimov;
b) Ocena funkcij celičnega imunskega sistema. Glavna vloga pripada metodam serološke diagnostike, namenjene določanju protiteles, kot tudi antiges vzročenega sredstva v krvi in \u200b\u200bdrugih bioloških tekočinah telesa.
Testiranje za protitelesa proti HIV se izvede, da:
a) varnost hemotransphine in presaditev;
b) nadzor, testiranje za spremljanje preseganja okužbe s HIV in preučevali dinamiko svoje razširjenosti v določeni populaciji;
c) Diagnoza okužbe s HIV, tj. Prostovoljno testiranje seruma praktično zdravih ljudi ali bolnikov z različnimi kliničnimi znaki in simptomi, podobnimi okužbam z virusom HIV ali aidsom.
Sistem laboratorijske diagnostike okužbe s HIV je zgrajen v skladu s tristopenjskim načelom. Prva faza je pregled, ki je namenjena izvajanju primarnih študij krvi za prisotnost protiteles na HIV beljakovine. Druga faza referenc - omogoča uporabo posebnih metodoloških tehnik za pojasnitev (potrditev) primarni pozitivni rezultat, pridobljen na fazi presejanja. Tretji Ethan je strokovnjak, namenjen končnemu preverjanju prisotnosti in specifičnosti označevalcev HIV, opredeljenih na prejšnjih fazah laboratorijske diagnostike. Potreba po več fazah laboratorijske diagnostike je predvsem posledica gospodarskih vidikov.
V praksi se uporablja več testov, ki omogočajo zadostno stopnjo natančnosti za identifikacijo ljudi, okuženih z virusom HIV: \\ t
ELISA (ELISA) -Tecte (analiza trdne faze imunoasay), ki odkriva prvo raven, je značilna velika občutljivost, čeprav manj specifičnosti v nadaljevanju;
Imunski blot (zahodni blot), zelo specifičen in najbolj uporabljen test, ki omogoča razlikovanje HIV-1 in HIV - 2;
Antigenemia P25-Test Učinkovit v začetnih fazah okužbe;
Verižna reakcija polimeraze (PCR).
V primeru množičnega presejanja vzorcev krvi se priporoča, da se preskusijo sera mešanice iz skupine pregledane, sestavljene s takšnim izračunom, tako da končni redčenje vsakega vzorca ne presega 1: 100. Če se mešanica seruma izkaže, da je pozitivna, se izvede študija vsakega seruma pozitivne zmesi. Ta metoda ne vodi do izgube občutljivosti tako v Elisi kot v imunoblu, temveč zmanjšuje stroške dela in stroške primarnih raziskav za 60-80%.
V primarni serodiagnozi okužbe s HIV se skupna protitelesa določijo z uporabo preverjanja kvalificiranih testov - IFA in aglutinacijske reakcije. Na drugi (arbitražni) fazi uporabljate bolj zapleteno test - imunoblot, ki ne omogoča le potrditve ali zavrnitve začetnega sklepa, ampak tudi za to na ravni opredelitve protiteles na posamezne virusne beljakovine.
Povezani imunosorbent test. (IFA) je glavna in najbolj razširjena metoda za določanje protiteles do HIV. Toda pomanjkljivosti uporabe ELISA v serodiagnozi okužbe s HIV je treba pripisati pogoste napačne pozitivne rezultate. V zvezi s tem rezultat v ELISA ni podlaga za sklenitev kompozicije HIV ankete. To je posledica nezadostnega čiščenja imunosorbenta iz balastnih beljakovin; Spontana vezava serumskih protiteles s plastiko, če njegove parcele, ki jih imunosorbent, ki jih imunosorbent ni dovolj blokirano ali ne blokirajo z zelo posebnim nevtralnim beljakovinam; medsebojna interakcija z virusi HIV iz imunosorbenta različnih beljakovin, prisotnih v krvi oseb z določenimi, pogosteje avtoimunski patološki procesi vrste skleroze, SLE, tuberkuloze; S pogostimi donacijami, nalezljivimi in rakom, opeklinami, nosečnostjo, ponavljajočimi se hemotransphous, presajanjem organov, tkanin, kot tudi osebe na hemodializi; s prisotnostjo revmatoidnega faktorja v krvi, pogosto povzročajo HIV-lažne pozitivne reakcije; Prisotnost protiteles do gag proteinov HIV, pregledane v krvi, in predvsem na P24 protein (očitno, protitelesa nastanejo na ekso ali endogeno nepredeljen retrovirus. Ker se anti-P24 sintetizira na obvezno v zgodnjih fazah HIV-serokonverzije, nadaljnje imunološko spremljanje oseb s protitelesi proti proteinom HIV GAG, pa tudi odstranjevanje njih iz darovanja.
Občutljivost in specifičnost imunofermentalne analize se nenehno povečujejo. Kot rezultat, četrta generacija IFA ni slabša v njihovih diagnostičnih zmožnosti imunskega blota in se lahko uporablja ne le na pregledu, temveč tudi na fazi potrditve diagnoze okužbe s HIV [Soltskaya T., 1997].
Imunobloting. To je končna metoda serološke diagnostike, ki omogoča končni sklep o pozitivnosti HIV-pozitivnosti ali negativnosti anketiranja.
Obstaja jasna korelacija med rezultati pregleda seruma v Immunoblotu in ELISA - dvakrat pozitivna v ELISA z različnimi testnimi sistemi seruma v 97-98% primerov, je nato HIV pozitivno v imunoblotting. Če se je serum izkazal za pozitivno v IFA samo v enem od dveh uporabljenih preskusnih sistemov, so zaznani v imunoblot pozitivne le v 4% primerov. V 5% primerov, ko izvajajo potrditev raziskav oseb s pozitivnimi podatki, lahko IFA-Immunoblot daje "nedefinirane" rezultate, med njimi pa približno 20% primerov "nedefinirane" rezultate povzročajo protitelesa za gag beljakovine HIV-1 (P55, P25, P18). Prisotnost protiteles le na PECIEINS HIV-1 GAG je razlog za dodatno raziskavo krvnih serumov za okužbo s HIV-2.
Ocena rezultatov imunoblotiranja se izvaja strogo v skladu z navodili, ki so priložene preskusnemu sistemu. V odsotnosti navodil za razlago rezultatov je treba uporabiti merila WHO.
Pri pridobivanju pozitivnih rezultatov raziskav v referenčni fazi laboratorijske diagnoze okužbe s HIV in negativnim rezultatom študije po metodi imunskega blotanja je obvezna ponovna strokovna diagnoza izvedemo po 6 mesecih po prvi raziskavi.
Če rezultati imunablottacije po 12 mesecih po prvem vzorčenju ostanejo negativni ali negotovi, potem v odsotnosti dejavnikov tveganja, klinični simptomi ali drugi dejavniki, povezani z okužbo s HIV, preučujejo iz opazovanja razmotelja.
Med serološkimi metodami v primeru negotovih rezultatov imunobota, ki se uporabljajo kot strokovna diagnostika Radioimmunoprecipitacija (POČIVAJ V MIRU). Temelji na uporabi virusnih beljakovin, označenih z radioaktivnim jodom, in oborini so zaznani z uporabo števila beta. Slabosti metode se nanaša na visoke stroške opreme, potrebo po opremi za te namene posebnih prostorov.
Osebe, ki so diagnosticirane okužbe s HIV, so predmet stalnega dinamičnega opazovanja z obvezno laboratorijsko raziskavo vsakih 6 mesecev.
Polimerazna verižna reakcija (PCR) razkriva predhodno pomnožene nukleotidne sekvence, specifične za genom tega patogena. Izolirana množenje gena ali njegovega fragmenta, imenovanega ojačanja, PCR omogoča, da se izvede v cevi s termično stabilno DNA polimerazni encim. Za 2-3 ure PCR vam omogoča, da dobite milijone kopij določenega segmenta virusa. Ko je okužba s HIV iz celične RNA, vključno z virusnim RNA, če je bila reproducirana v celici ali je bila integrirana v njen genom, z uporabo povratne transkripcije in hibridizacije z označenimi oligonukleotidnimi "sondami", dobimo zadostno količino zdravila DNA, ki je zaznana in je značilna količinsko kot v zvezi s pripadnostjo genom HIV, na radioaktivni ali drugi nalepki sonde, vzpostavitev homologije DNK in aminokislinske sekvence, specifične za virus. Občutljivost PCR je odkrivanje virusnih genov v eni od petih tisoč celic.
PCR, vključno s količinsko, se lahko uporablja samo, da se določi plazemska virusna obremenitev za reševanje vprašanja začetka zdravljenja zdravil pacienta ali spremembe protiretrovirusnih zdravil. PCR ni mogoče priporočiti za diagnozo okužbe s HIV, saj celo najbolj ultra-sodobne metode njegove formulacije in reagentov omogočajo, da določite virusno obremenitev vsaj določeno raven - 50 kopij / ml. In zapletenost proizvodnje PCR in njene visoke stroške (približno 200 $) zmanjšuje svojo obsežno uporabo kot metodo vsakodnevne laboratorijske diagnoze okužbe s HIV. Tako je PCR ostaja nepogrešljiv le za oceno plazemske virusne obremenitve pri bolnikih z že uveljavljeno diagnozo okužbe s HIV, da bi rešili vprašanje zdravljenja s pacientom.
Shematično, faze laboratorijske diagnostike okužbe s HIV so predstavljene na sl. Ena.
Sl. 1. Faze laboratorijske diagnostike okužbe s HIV
Med okužbo s HIV je obdobje "temnega laboratorijskega okna", ko število protiteles HIV ne zadostuje za občutljivost preskusnih sistemov. To obdobje se razlikuje od enega tedna do treh mesecev od trenutka okužbe HIV, odvisno od ravni občutljivosti preskusnega sistema. S tem pojavom obstajajo težave pri preučitvi krvi donatorjev od oseb, ki so v omenjenem obdobju okužbe z virusom HIV. Zato je v večini držav sveta je bil uveden sistem za uporabo krvi šele po skladiščenju za 3-6 mesecev, da bi izvajal obvezen ponovni pregled na odmerkih Klicanja HIV krvi in \u200b\u200bnjegovih komponent.
Za fazo primarnih manifestacij je značilna dejavnost replikacijskega procesa. Popravek viremije in antigenemije povzroča nastanek posebnih protiteles razreda IgM: anti-P24, anti GP41, anti GP120. Antigen P24 v delu okuženih delov se lahko zazna v krvi metode IFA po 2 tednih po okužbi in se določi na 8. teden. Nato, v kliničnem poteku okužbe s HIV, se za obdobje oblikovanja faze aidsa opazi drugo dviganje vsebnosti krvi v proteinu P24.
Videz popolne serokonverzije, ko se v periferni krvi zabeleži visoko raven posebnih protiteles razreda IgG na strukturne beljakovine HIV GP41, P24, GPL20, bistveno olajša diagnozo okužbe s HIV. Večina komercialnih nizov je zasnovana tako, da označuje točno takšna protitelesa.
Težave z odkrivanjem protiteles pri bolnikih z okužbo z virusom HIV se lahko pojavijo v obdobjih masivne viremije in antigenemije, ko se razpoložljiva specifična protitelesa v krvi porabi za vezavo virusnih delcev, in replikacijski proces je pred delovanjem novih protivirusnih protitelesa.
Pri ljudeh z dojenjem oslabljenim imunskim sistemom, Viresmia in Antigenemia se pojavijo prej in se ohranijo na visoki ravni pred boleznijo. Hkrati pa imajo ti bolniki z nizko vsebnostjo prostih protiteles do HIV, zaradi dveh razlogov - nezadostnih proizvodov protitelesa v limfocitih in vezavnih protiteles virov in topnih proteinov HIV, zato preskusne sisteme s povečano občutljivostjo ali modifikacijo analize Metode so potrebne za določitev okužbe. Sprostitev protiteles iz imunskih kompleksov.
Kljub obilju specifičnih označevalcev HIV, najpogosteje določena je prisotnost skupnih protiteles do HIV beljakovin. Izraz "Skupaj" pomeni prisotnost dveh razredov protiteles (IgG in IgM) in širok spekter protiteles na različne, predvsem na strukturne, HIV beljakovine.
Opredelitev celic CD4. Glavni klinični in laboratorijski kazalnik diagnoze stopnje okužbe z virusom HIV, stopnja uničenja imunskega sistema pri bolnikih v vsakdanjem življenju je bila opredelitev vsebine CD4 + Simphocite: zmanjšanje ravni pod 200 celic / mm3 je Glavno merilo za diagnozo aidsa. Menijo, da vse osebe, okužene z virusom HIV, z zneskom CD4 + -limfocitov 200 celic / mm3 in nižjo, potrebujejo v protivirusni terapiji in preprečevanje pnevmatske pljučnice. In čeprav je 1/3 HIV-okuženega s količino C04 + -limfocitov manjša od 200 celic / mm3, ni kliničnih manifestacij, izkušnje so pokazale, da imajo simptomi v naslednjih dveh mesecih, zato se vsi štejejo za bolnikov na fazi aidsa.
Trenutno nove diagnostične tehnologije omogočajo identifikacijo etioloških in patoogenetskih vzrokov mnogih bolezni in radikalno vplivajo na rezultate zdravljenja. Morda so najbolj impresivni rezultati uvedbe teh tehnologij v klinični praksi doseženi na področju imunologije in diagnosticiranje nalezljivih bolezni.
Preskusni sistemi, ki temeljijo na imuno-enamant in imunohemyluminescenčne analize, omogočajo identifikacijo protiteles različnih razredov, ki bistveno povečajo vsebino informacij o metodah klinične, analitične občutljivosti in specifičnosti za diagnozo nalezljivih bolezni. Opozoriti je treba, da so najpomembnejši uspehi pri diagnosticiranju okužb povezani z izvajanjem metode polimeraze verižne reakcije na laboratorijsko prakso, ki se šteje za "zlato standard" pri diagnosticiranju in vrednotenju učinkovitosti zdravljenje številnih nalezljivih bolezni.
Za študijo se lahko uporabijo različni biološki material: serum, plazma v krvi, strganje, bioptat, plevralna ali spinalna tekočina (SMG). Prvič, metode laboratorijske diagnostike okužb so namenjene identifikaciji bolezni, kot so virusni hepatitis B, C, D, citomegalovirus okužbe, spolno prenosljive okužbe (gonane, klamidial, mikoplazma, ureaplasmen), tuberkuloza, okužba s HIV itd.
Okužba s HIV - bolezen, ki jo povzroča virus humane imunske pomanjkljivosti (HIV), dolgo časa vztrajno v limfocitih, makrofagih, živčnih celicah, ki povzročajo počasi progresivno škodo na imunski in živčni sistemi telesa, ki se kažejo s sekundarnimi okužbami, tumorji, Subakutni encefalitis in druge patološke spremembe.
Patogeni za okužbe so virusi imunske pomanjkljivosti osebe 1. in druge vrste (HIV-1, HIV-2) - Glejte družino retrovirusov, predložitve počasnih virusov. Virioni so sferični delci s premerom 100-140 nm. Virusni delci ima zunanji fosfolipidni lupino, vključno z glikoproteini (strukturnimi beljakovinami) z določeno molekulsko maso, izmerjeno v kilodaltotoni. HIV-1 je GPL60, GPL20, GP41. Notranji plašč virusa, ki pokriva jedro, ki ga predstavljajo beljakovine z znano molekulsko maso - P17, P24, P55 (HIV-2 vsebuje GPL40, GPL05, GP36, P16, P25, P55).
Hip genoma vključuje RNA in Reverse Transcriptaze Encim (vzvratno). Da bi GENE Retrovirus povezati z genomom gostiteljske celice, najprej s pomočjo obrnitve, se zgodi sinteza DNK na matrici virusne RNA. Nato je DNK provirusa vgrajena v genom gostiteljice. HIV ima izrazito antigensko variabilnost, kar bistveno presega taka virus gripe.
V človeškem telesu je glavni cilj HIV T-limfocitov, ki nosijo največjo količino receptorjev CD4 na površini. Po prodoru HIV v kletko z uporabo rerverze glede na njegovo RNA, virus sintetizira DNK, ki je vgrajen v genetski aparat gostitelja (CD4 limfocite) in ostaja tam za življenje v stanju provirusa. Poleg T-limfocitehelpers so prizadeti makrofagi, v limfocitih, celicah nevroglijske, črevesne sluznice in nekatere druge celice. Razlog za zmanjšanje količine T-limfocitov (CD4 celic) ni le neposredni citopatski učinek virusa, temveč tudi njihovo združevanje z ne-okuženimi celicami. Skupaj z lezijo T-limfocitov pri bolnikih z okužbo s HIV, je poliklonalna aktivacija B-limfocitov s povečanjem sinteze imunoglobulinov vseh razredov, zlasti IgG in IGA, in naknadno izčrpavanje tega oddelka za imun Sistem. Kršitev ureditve imunskih procesov se kaže tudi s povečanjem ravni α-interferona, β2-mikroglobulina, zmanjšanja ravni IL-2. Zaradi oslabitve funkcije imunskega sistema, zlasti z zmanjšanjem števila T-limfocitov (CD4) na 400 celic v 1 μl krvi in \u200b\u200bmanj, se pojavijo pogoji za nenadzorovano replikacijo HIV s pomembnim povečanjem število virionov v različnih okoljih. Zaradi poraza številnih povezav imunskega sistema, oseba, okužena z virusom HIV, postane brezkrito, preden povzročajo vzročne uslužbence različnih okužb.
Glede na naraščajočo imunosupresijo se razvijajo hude progresivne bolezni, ki jih ne najdemo pri ljudeh z normalno delujočm imunskim sistemom. To so bolezni, ki jih je Svetovna zdravstvena organizacija (WHO) opredeljena kot označevalca aidsa ali bolezni indikatorjev aidsa.
Indikatorske kazalnike AIDS.
Prva skupina - bolezni, ki so del težke imunske pomanjkljivosti (raven CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.
Druga skupina je bolezni, ki se lahko razvijejo ob ozadju hude imunske pomanjkljivosti in v nekaterih primerih brez njega.
Zato je v teh primerih potrebna laboratorijska potrditev diagnoze.
Prva skupina:
- kandidiaza požiralnika, sapnika, bronhija;
- ekstrapolna kriptokokoza;
- cryptosporidia z drisko več kot 1 mesec;
- citomegalovirusne lezije različnih organov poleg jeter, vranice ali bezgavk v pacientu, mlajši od 1 meseca;
- okužba, ki jo povzroča tančica preprostih herpes, ki se kaže z razjedami na koži in sluznici, ki poosebljajo več kot 1 mesec, pa tudi bronhitis, pljučnico ali esophagitis vsakega trajanja, ki vpliva na pacienta, starejši od enega meseca;
- generalizirana sarcoma Capos pri bolnikih, mlajših od 60 let;
- možganski limfom (primarni) pri bolnikih, mlajših od 60 let;
- limfocitna intersticijska pljučnica in / ali pljučna limfoidna displazija pri otrocih, mlajših od 12 let;
- razširjena okužba, ki jo povzročajo atipične mikobakterije (Mycobacterije kompleksa M. Aviumintracellulare) z lokalizacijo iz ekstrapilacije ali lokalizacije (dodatno na svetlobo) v koži, limfnih vozliščih, bezgavke v pljučih;
- pnevmatska pljučnica;
- progresivna multi-razred leukoentenalopatija;
- toksoplazmoza možganov pri bolnikih, starejših od enega meseca.
Druga skupina:
- bakterijske okužbe, kombinirani ali ponavljajoči se pri otrocih, mlajših od 13 let (več kot dva primera za 2 leti opazovanja): sepsa, pljučnice, meningitis, kosti ali spoji, abscesi zaradi gemofilnih palic, streptokocci;
- kokcidioidomikoza je razširila (lokalizacija ekstrapilence);
- HIV-encefalopatija (HiV demenca, demenca AIDS);
- histoplazmoza z drisko obstojna več kot 1 mesec;
- isosport z drisko vztrajni več kot 1 mesec;
- sarcoma caposhi v kateri koli starosti;
- možganski limfom (primarni) pri osebah vseh starosti;
- druge limfome B-celice (z izjemo Hodgkinove bolezni) ali limfom neznanega imunofenofina: fino celični limfom (kot je limfom Berkitta itd.); Imunoblastična sarkoma (imunoblastični limfom, velike celice, razpršena histiocyte, razpršena nediferencirana);
- mycobacterioSoza se razširi (ne tuberkuloza) z lezijo poleg lahke kože, materničnega ali pečenja bezgavk;
- tuberkuloza ekstrapulić (s poškodbami notranjih organov, poleg pljuč);
- ponavlja se salmonellična septikemija;
- HIV-distrofija (izčrpanost, ostra izguba teže).
Tabela 1 (Glej sklicevanje na vir zgoraj) indikatorskih indikatorskih bolezni in njihova etiološka sredstva.
Obstaja veliko klasifikacij AIDS.
V skladu z novo klasifikacijo, ki jo je predlagal Center za nadzor bolezni (tabela 2 - Glej zgoraj navedeno izvor), se diagnoza aidsa določi osebe, ki imajo raven CD4-limfocitov manj kot 200 / μl μl, tudi v odsotnosti kazalnikov aidsa .
Kategorija B vključuje različne sindrome, od katerih so najpomembnejše batilne angioloze, orofaring vleče kandidiaza, ponavljajoči se kandidični vulvivaginitis, težko je, da je terapija, maternični displazijo, maternični karcinom, idiopatska trombocitopenska vijolična, leserioza, periferna nevropatija.
Protitelesa do HIV-1 in HIV-2 v krvi
Protitelesa do HIV-1 in HIV-2 v serumu je odsotna.
Opredelitev protiteles HIV je glavna metoda laboratorijske diagnoze okužbe s HIV. Metoda temelji na analizi imunoasay encim (IFA) - občutljivost več kot 99,5%, specifičnost - več kot 99,8%. HIV protitelesa se pojavijo v 90-95%, okuženih v enem mesecu po okužbi, 5-9% po 6 mesecih, v 0,5-1% kasneje. V fazi aidsa se lahko število protiteles zmanjša do popolnega izginotja.
Rezultat študije je izražen kvalitativno: pozitivno ali negativno.
Negativni rezultat študije kaže na odsotnost protiteles do HIV-1 in HIV-2 v serumu. Negativni rezultat laboratorijskih vprašanj takoj po njeni pripravljenosti. Po prejemu pozitivnega rezultata - odkrivanje protiteles proti HIV - Da bi se izognili lažnim pozitivnim rezultatom v laboratoriju, se analiza ponovi še 2 krat.
Imunobrotina za protitelesa do virusnih beljakovin HIV v serumu
Protitelesa za virusne beljakovine HIV v serumu je odsoten.
Metoda IFA za določitev protiteles proti HIV je pregled. Pri pridobivanju pozitivnega rezultata se metoda imunoblotiranja uporablja za potrditev njegove specifičnosti - števec padavin v gelu protiteles v serumu bolnika z različnimi virusnimi beljakovinami, ki so izpostavljena ločevanju molekulske mase z uporabo elektroforeze in nitroceluloze. Določene so protitelesa za virusne beljakovine GP41, GPL20, GPL60, P24, PI8, P17, itd.
Po priporočilih Ruskega centra za preprečevanje in nadzor aidsa je treba odkrivanje protiteles na eni izmed glikoproteinov GP41, GPL20, GPL60, šteti za pozitiven rezultat. V primeru odkrivanja protiteles na druge virusne beljakovine, se rezultat šteje za dvomljivo, je treba taka pacient preučiti dvakrat - po 3 in 6 mesecih.
Odsotnost protiteles do določenih proteinov HIV pomeni, da je metoda imuno-imunimenske imunija dala napačen pozitivni rezultat. Hkrati, v praktičnem delu, pri ocenjevanju rezultatov metode imunoferting, je treba voditi z navodili, ki jih je družba pritrjena na "set imunoblotting" uporablja.
Metoda imunoblota se uporablja za laboratorijsko diagnozo okužbe s HIV.
Antigen P24 v serumu
Antigen P24 v serumu je odsoten.
Antigen P24 je beljakovinec nukleotidne stene HIV. Stopnja primarnih manifestacij po okužbi s HIV je posledica začetka replikacijskega procesa. Antigen P24 se pojavi v krvi po 2 tednih po okužbi in ga lahko odkrije metoda ELISA od 2 do 8 tednov. Po 2 mesecih od trenutka okužbe Antigen P24 izgine iz krvi. V prihodnosti, v kliničnem poteku okužbe s HIV, je treba opozoriti drugo povečanje vsebnosti krvi beljakovin P24. Prihaja iz tvorbe pomoči. Obstoječe sisteme IFA za odkrivanje antigena P24 se uporabljajo za zgodnje odkrivanje HIV v krvi darovalci in otrocih, ki določajo napovedovanje pretoka aidsa in nadzoruje terapijo pri bolnikih z aidsom. ELISA ima visoko analitično občutljivost, ki omogoča zaznavanje HIV-1 antigena R24 v serumu v koncentraciji 5-10 pkg / ml in HIV-2 - manj kot 0,5 ng / ml in specifičnost. Vendar je treba opozoriti, da je raven antigena P24 v krvi predmet posameznih različic, kar pomeni, da je mogoče odkriti le 20-30% bolnikov z uporabo te študije v zgodnjem obdobju po okužbi (Rose NR et al., 1997).
Protitelesa na razredi antigena R24 IgM in IgG v krvi se pojavijo od 2. tedna, dosežejo vrh 2-4 tednov in držite na takšni ravni različnih časov: IGM razredna protitelesa - za več mesecev, izginjajo v enem letu po okužbi, In IgG protitelesa se lahko ohranijo že leta.
Algoritem za diagnozo okužbe z virusom HIV je odvisen od faze bolezni in je značilna sprememba dinamike detekcijskih protiteles različnih razredov (sl. 1, 2 - glej zgoraj navedeno izvor).
Rezultat študije je izražen kvalitativno - pozitiven ali negativen. Negativni rezultat študije kaže na odsotnost protiteles do HIV-1 in HIV-2 in antigena P24 v serumu.
Negativni rezultat laboratorijskih vprašanj takoj po njeni pripravljenosti. Po prejemu pozitivnega rezultata - odkrivanje protiteles do HIV-1 in HIV-2 in / ali antigena P24 - Da bi se izognili lažnim pozitivnim rezultatom v laboratoriju, se analiza ponovi še 2 krat.
Ne glede na rezultate študije vzorca pacienta v krvi in \u200b\u200brezultatih treh študij se laboratorij pošljejo regionalnemu centru za pomoč, da potrdi pozitiven rezultat ali preverjanje nedoločenega rezultata. V takih primerih končni odziv na to študijo izda regionalni center za pomoč.
Odkrivanje HIV s polimerazno verižno reakcijo (kvalitativno)
Odkrivanje metode HIV metode polimeraze verižne reakcije - PCR (kvalitativno) se izvede, da:
- dovoljenje dvomljivih rezultatov raziskav imunovblotiranja;
- za zgodnjo diagnozo okužbe s HIV;
- nadzor nad učinkovitostjo protivirusnega zdravljenja;
- opredelitve faze bolezni aidsa (okužba s prehodom na bolezen).
Ko primarna okužba, HIV, PCR metoda omogoča identifikacijo HIV RNA v krvi po 10-14 dneh po okužbi.
Rezultat študije je izražen kvalitativno: pozitivno ali negativno. Negativni rezultat študije kaže na pomanjkanje HIV RNA.
Pozitivni rezultat je identifikacija HIV RNA - dokazuje okužbo pacienta.
Zaznavanje HIV s polimerazno verižno reakcijo (kvantitativno)
HIV v krvi je odsoten.
Neposredna količinska določitev HIV RNA s PCR omogoča natančnejšo natančno kot določanje vsebnosti celice CD4, predvideti hitrost razvoja aidsa pri ljudeh, okuženih z HIV, zato natančneje oceni njihovo preživetje. Visoka vsebnost virusnih delcev običajno korelira z izrazito okvarjenim imunskim statusom in nizkimi celicami CD4. Nizka vsebnost virusnih delcev običajno korelira z bolj uspešnim imunskim statusom in višjo vsebnostjo CD4 celic. Vsebina virusne RNA v krvi omogoča napovedovanje prehoda bolezni v klinično fazo. Pri vzdrževanju RNA-1 HIV\u003e 74 100 kopij / ML, skoraj vsi bolniki razvijejo klinično sliko AIDS (Senior D., Holden E., 1996).
Verjetnost razvoja pripomočkov je 10,8-krat višja pri osebah z vsebnostjo HIV-1 v krvi\u003e 10.000 izvodov / ml od tistih z HIV-1 v krvi<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.
Ameriška strokovna ekipa je razvila indikacije za zdravljenje bolnikov z virusom HIV. Zdravljenje je prikazano bolnikom s celicami CD4 v krvi<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20.000 kopij / ml (PCR). Ocena rezultatov protiretrovirusnega zdravljenja pri posameznikih, okuženih z virusom HIV, se izvajajo za zmanjšanje ravni HIV serumske RNA.
Z učinkovitim zdravljenjem se mora stopnja Virhije med prvimi 8 tednima zmanjšati in je pod mejo občutljivosti (PCR) (PCR) (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.
Danes se v klinično prakso uvedejo številne raziskovalne metode za diagnosticiranje okužbe s HIV, pa tudi za vse druge virusne okužbe. Med njimi je vodilna vloga dodeljena serološkim študijem. Glavne metode diagnosticiranja okužb s HIV so predstavljene v tabeli 3 (glej sklicevanje na zgoraj navedeno vir), kjer so razdeljeni glede na pomembnost vsake metode za odkrivanje virusov na štiri ravni:
- A - Preskus se običajno uporablja za potrditev diagnoze;
- B - Preskus je koristen v določenih okoliščinah za diagnozo posameznih oblik okužbe;
- C - Preskus se redko uporablja za diagnostične namene, vendar je zelo pomemben za epidemiološke raziskave;
- D - Preskus običajno ne uporabljajo laboratoriji za diagnostične namene.
Ker za diagnosticiranje virusnih okužb, poleg izbire optimalne analize metode, je prav tako pomembno za pravilno opredelitev in jemanje biomateriala za študijo, v tabeli 4 (glej sklicevanje na vir zgoraj) zagotoviti priporočila za izbiro optimalnega biomateriala Za študijo HIV.
Za spremljanje okuženega HIV, je treba uporabiti možnosti za celovito študijo imunskega statusa - količinska in funkcionalna opredelitev vseh njenih povezav: humoralna, celična imunost in nespecifična odpornost na splošno.
V sodobnih laboratorijskih pogojih večstopenjsko načelo vrednotenja imunološkega stanja vključuje določitev subpopulacije limfocitov, krvnih imunoglobulinov. Pri ocenjevanju kazalnikov je treba upoštevati, da je za okužbo s HIV značilno znižanje razmerja CD4 / CD8 T celic, manjši od 1. CD4 / CD8 indeks 1.5-5 prikazuje normativno stanje, več kot 2,5 - označuje Hiperaktivnost, manj 1.0 - označuje imunsko pomanjkljivost. Tudi razmerje CD4 / CD8 je lahko manj kot 1 s hudim pretokom vnetnega procesa.
Od načelnega pomena je to razmerje pri ocenjevanju imunskega sistema pri bolnikih z aidsom, saj HIV selektivno vpliva in uničuje limfocite CD4, zaradi katerih se razmerje CD4 / CD8 zmanjša na vrednosti, bistveno manj kot 1.
Ocena imunološkega statusa temelji tudi na odkrivanju skupnih ali "groznih" napak v sistemu celične in humoralne imunosti: hipergamaglobulinemija (povečanje koncentracije IGA, IGM, IgG) ali hipogammaglobulinemije v terminalni fazi; povečanje koncentracije krožnih imunskih kompleksov; zmanjšane citokine izdelke; Slabitev odziva limfocitov na antigene in mitogene.
Kršitev razmerja populacij v splošni krogli v limfocitih je značilna za insuficienco humoralne imunosti. Vendar pa so te spremembe nesmrtnice za okužbo s HIV in se lahko pojavijo z drugimi boleznimi. V celoviti oceni številnih drugih laboratorijskih kazalnikov, je treba upoštevati, da je za okužbo s HIV značilna tudi za: anemijo, limfe in levkopenijo, trombocitopenijo, povečanje ravni β2-mikroglobulina in C-reaktivnega proteina, povečanje Dejavnost transaminaze v serumu.
Klinična in laboratorijska diagnoza okužbe s HIV Ima tri smeri:
- Vzpostavitev dejstva, okuženih z virusom HIV, diagnozo okužbe s HIV.
- Določanje faze kliničnega potek bolezni in prepoznavanje sekundarnih bolezni.
- Napoved napredovanja kliničnega potek bolezni, laboratorijskega nadzora nad učinkovitostjo zdravljenja in neželenih učinkov protiretrovirusnih zdravil.
1. Vzpostavitev okužbe z virusom HIV, diagnosticiranje okužbe s HIV
Za določitev okužbe s HIV se uporabljajo naslednji posebni kazalniki: protitelesa proti HIV, antigenom HIV, ponudnikom HIV RNA in DNA. Protitelesa na HIV se določijo z metodo analize imunoasay (ELISA) ali imunoblotting, ki je v bistvu vrsta ELISA. Antigeni (beljakovine) HIV določajo metodo IFA. S pomočjo molekularnih genetskih metod polimerazne verižne reakcije (PNRR) in BDNA se lahko določi RNA HIV in DNK provirusa. Uporaba dodatnih metod za hibridizacijo nukleinskih kislin s posebnimi DNA sondami omogoča preskušanje specifičnosti sekvenc DNA, pridobljenih med PCR. Občutljivost PCR je odkrivanje virusnih genov v eni od petih tisoč celic.
Pri primarni okužbi se upoštevajo naslednja dinamika označevalcev HIV v okuženih krvi. V prvem mesecu, kot posledica aktiviranja replikacijskega procesa, se pojavi ostro povečanje virusne obremenitve (vsebina HIV RNA v plazmi), nato pa zaradi razširjanja virusa in masne okužbe ciljnih celic v krvi in Limfna vozlišča, postane mogoče določiti provirusno DNA. Glavna diagnostična vrednost je dejstvo, da se odkrije začasna DNA, integrirana v ciljni genom celice.
Virusna obremenitev odraža intenzivnost replikacijskega procesa v okuženih celicah. V obdobju primarne okužbe je raven virusne obremenitve drugačna, če je okužena z različnimi podtipi HIV, vendar je dinamika njegovih sprememb približno enaka. Torej, ko je okužba z podtipom, na primer, če je v prvem mesecu po okužbi vrednost virusne obremenitve 700 kopij / ml, nato pa se v 2. mesecu zmanjša na 600, v tretjem do 100 , v 4. do 50 kopijah / ml. Takšna dinamika opazimo ob ozadju povečanja vsebnosti krvi v specifičnih protiteles do HIV. Vsebina predane DNK v krvni mononuclears, okužena z virusom HIV, je značilna relativna konstantnost v prvih 6 mesecih z manjšimi nihanji v nekaterih podtipih. Tako obremenitve RNA in DNK nista enaka.
V fazi inkubacije nekaj časa se pojavijo posebna protitelesa na HIV v znesku, ki zadostuje za določitev obstoječih laboratorijskih metod. Pred registracijo protiteles se v krvi ne beljakovin opazi zelo kratek čas, ki zatrjuje replikacijski proces in strukturni protein P24. Antigen P24 je mogoče zaznati v krvi z analizo inasmatik, ki je že po 1-2 pedala po okužbi in določena do 8. tedna, potem njegova vsebina se strmo zmanjša. Nadalje, v kliničnem poteku okužbe z virusom HIV, je treba opozoriti drugo dviganje vsebnosti krvi beljakovin P24. Pade na obdobje oblikovanja aidsa. Izginotje v krvi prostega (ne vezanega na protitelesa) jedro beljakovin P24 in videz specifičnih protiteles na HIV proteine, označeni s pojavom serokonverzije (sl. 9.6).
Viryia in Antigenemia povzročata oblikovanje posebnih protiteles IgM-razreda (anti-P24, anti-GR41, anti-GR120, anti-GR160). Prosti IGM in IgG IgG protitelesa na P24 protein se lahko pojavijo, od 2. tedna, njihova vsebina se dvigne v 2-4 tednih, doseže določeno raven, na kateri je shranjen za mesece (IGM) in leta (IgG) (sl. 9.7).
Videz popolne serokonverzije, ko se v periferni krvi zabeleži visoko raven SPEX IGG razrednih protiteles na strukturne beljakovine HIV P24, GP41, GP120, GR160, bistveno olajša diagnozo okužbe s HIV. HIV protitelesa se pojavljajo v 90-95%, okuženih 3 mesece po okužbi, v 5-9% - v obdobju od 3 do 6 mesecev od trenutka okužbe in v 0,5-1% v poznejših rokih.
Kljub dejstvu, da so protitelesa na HIV nazadnje, glavna laboratorijska diagnostična indikator do sedanjosti je odkrivanje posebnih protiteles s strani ELISA in IMMUNOBLOTTING metode.
Podatki, predstavljeni v tabeli 9.2 [Show] in 9.3. [Show] To jasno pokaže visoko občutljivost sodobnih sistemov testnih imunoferapij pri določanju protiteles do HIV, boljše od občutljivosti imunoblottacije. V nekaterih primerih, ko prejmete primarni pozitivni rezultat v ELISA, ga je mogoče potrditi v imunoblotiranju šele po 2-3 tednih.
| Tabela 9.3. Primer spremljanja serokonverzije (n.fleury, 2000) | |||||
| Trenutek odločnosti | Antigen P24, pg / ml | Protitelesa za proteine \u200b\u200bHIV | |||
| ELISA, OP OP / OP KR ** | Imunobloting. | ||||
| HIV. Duo. | Gen-zaslon. | Uniforma | |||
| Pacient 1. | |||||
| Primarno. | 17 | 1,24 | manj kot 1. | manj kot 1. | * |
| Po 4 dneh | 67 | 1,36 | 1,85 | manj kot 1. | - |
| V 7 dneh | * | 2,33 | 6,84 | manj kot 1. | - |
| Po 2 dneh | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gP160. |
| Pacient 2. | |||||
| Primarno. | 400 | 13 | manj kot 1. | manj kot 1. | - |
| V 5 dneh | 450 | 18 | 2,11 | manj kot 1. | - |
| Po 10 dneh | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gP160. |
| Opomba: * - Opredelitev ni bila izvedena ** - Razmerje optične gostote preskusnega vzorca seruma za kritično (prag) Optične gostote vrednosti |
|||||
Pri preučevanju bolnikov z okužbo z virusom HIV (okuženim) z uporabo preskusnih sistemov imunoblontanja vodilnih podjetij v vseh primerih se protitelesa odkrijejo na GP160 in P24 / 25, na druge beljakovine protiteles, v 38,8-93,3% primerov (tabela. 9.4. [Show] ).
Težave z odkrivanjem protiteles pri bolnikih z okužbo z virusom HIV se lahko pojavijo v obdobjih masivne viremije in antigenemije, ko so razpoložljiva specifična protitelesa v krvi povezana z virusnimi delci, in reptativni proces je pred izdelavo novih protivirusnih protiteles. Takšno stanje se lahko pojavi in \u200b\u200bizgine med infekcijskim procesom.
Pri bolnikih s prvotno oslabljenim imunskim sistemom, Viresmia in Antigenemia se pojavijo prej in se ohranijo na visoki ravni pred boleznijo. Pri takšnih bolnikih, je nizka vsebnost prostih protiteles do HIV, zaradi dveh razlogov - nezadostnih proizvodov protiteles v limfocitih in protiteles, ki veže z viriori in topnimi proteini HIV, zato preskusni sistemi s povečano občutljivostjo ali modifikacijo analitskih metod potrebne, ki zagotavljajo fazo sproščanja protiteles iz imunskih kompleksov.
Najpogosteje zmanjšanje vsebnosti protiteles proti HIV v določenih razlogov se pojavi v terminalu fazi, ko protitelesa na HIV v serumu CROWEIM ne smejo zajeti z uporabo metod imununimalne analize, niti imumumoblet metode (Western blot). Poleg videza specifičnih protiteles do HIV, je imunski odziv v prvih 4 mesecih značilen z zmanjšanjem vsebnosti krvi okuženega CD4 + - in povečanje CD8 + -Cells. Nato se stabilizirana vsebina CD4 in CD8 receptorjev, ki prevažajo celice, in ostane nespremenjena. Povečanje vsebnosti limfocitov CD8 je zaščitna reakcija, ker Cell-odvisna Tpotoksičnost se izvaja s CD8 + -limfociti, ki so namenjene uničevanju celic, okuženih s HPV. Sprva, citotoksične limfocite (CTLS) reagirajo na regulativni beljakovine virusa NEF, ki igra pomembno vlogo pri zmanjševanju virusne (RNA) obremenitve v plazmi okuženega HIV-okuženega v prvih mesecih. Potem je CTL odziv oblikovan in drugim, vklj. Strukturni, HIV beljakovine, ki so posledica 12 mesecev po okužbi, se Zpotoksični učinek bistveno poveča.
Laboratorijske diagnostične diagrame okužbe s HIV
Ob upoštevanju dinamike specifičnih označevalcev okužbe z virusom HIV v praksi je priporočljivo, da se držijo naslednjih laboratorijskih diagnostičnih shem pri odraslih (Sl. 9.8-9.10).
Sheme odražajo tri glavne faze primarne laboratorijske diagnoze okužbe s HIV:
- Pregled.
- Referenca.
- Strokovnjak.
Potreba po več fazah laboratorijske diagnostike je predvsem posledica gospodarskih vidikov. Na primer, stroški metode imunoblotiranja s pomočjo domačih preskusnih sistemov ene strokovne študije je do $ 40, pregled (metoda IFA) je približno 0,2, to je razmerje 1: 200.
Na prvi stopnji (Sl. 9.8) je anketirana določena z opredelitvijo protiteles HIV z enim imunosnim testnim sistemom, ki je namenjen zaznavanju protiteles na obe vrsti virusa - HIV-1 in HIV-2.
Proizvajalci v predlaganih preskusnih sistemih, virusni lizat, rekombinantne proteine, sintetični peptidi se uporabljajo kot antigenska osnova. Vsak od navedenih nosilcev antigenskih determinantov HIV ima svoje prednosti in slabosti. Zato, ko izberete testne sisteme približno enakih stroškov, raje določite z največjo občutljivostjo (prednostno 100%). Med preskusnimi sistemi enakih stroškov in občutljivosti je priporočljivo, da se prebiva, da ima največjo specifičnost.
Na podlagi virusnega lizata so bili ustvarjeni prvi preskusni sistemi za laboratorijsko diagnozo okužbe s HIV. V osemdesetih letih prejšnjega stoletja so takšni preskusni sistemi značilni zaradi občutljivosti manj kot 100% in nizka specifičnost, ki jo je pokazala velika količina (do 60%) lažnih pozitivnih rezultatov.
Pri tvorbi viriona v kulturi limfocitov se njegova lupina ustvari iz zunanje membrane in zato vsebuje antigene glavne komplekse histokompatibilnosti I in II razredov. Ta okoliščina določa lažne pozitivne reakcije, če so protitelesa za alohigensko histokompatibilnost prisotna v krvi bolnikov.
Kasneje, da dobimo virus, je bilo predlagano uporabo kulture makrofagov, v katerih se virusni delci oblikujejo predvsem intracelularno z ugotavljanjem ne iz zunanje membrane celice, ampak iz membranov endoplasmatskega retikuluma. Takšna tehnologija je zmanjšala število lažnih pozitivnih rezultatov.
Nekatere od najboljših v najpomembnejših značilnostih - občutljivosti in specifičnosti - encimi se pripoznajo kot kombinacija prečiščenega virusnega lizata s sintetičnimi peptidi, ki predstavljajo najbolj antigehne segmente virusnih beljakovin ali rekombinantnih proteinov.
Občutljivost preskusnega sistema je odvisna tudi od značilnosti drugih komponent sklopov. Tako, testne sisteme, ki uporabljajo konjugate, ki prepoznajo protitelesa ne le razred IgG, ampak tudi IgM, in IgA, vam omogočajo, da prepoznate prejšnjo fazo serokonverzije. Uporaba preskusnih sistemov je obetavna, s katero lahko hkrati določite protivirusna protitelesa, in antigena P24, ki omogoča še predhodno laboratorijsko diagnostiko okužbe s HIV.
Primarni pozitivni rezultat je treba ponovno preveriti z ponovno preučevanjem vzorca v istem preskusnem sistemu, vendar prednostno še eno serijo in drug laboratorijski pomočnik. Če je bil med ponovnim pregledom dosežen negativen rezultat, se študija izvede tretjič.
Po potrditvi pozitivnega rezultata je zaželeno, da ponovno namestite kri in jo razišče na HIV protitelesa kot primarno. Ponavljajoča se kri vam omogoča, da preprečite napako zaradi netočnosti označevanja cevi in \u200b\u200bizpolnite oblik navodil.
Seropozitivna krvna seropogena stopnja se pošlje na referenčne študije, opravljene z uporabo dveh ali treh visoko specifičnih sistemov IFA. V primeru dveh pozitivnih rezultatov, se strokovna študija izvaja imunoblotting.
Aplikacija v referenčni diagnostiki imunoopimenskih preskusnih sistemov, s katerimi lahko razlikujete posebna protitelesa na HIV-1 in HIV-2, omogoča nadaljnje delo in vam omogoča, da razišče pozitiven vzorec na strokovni fazi takoj z uporabo ustreznega imunoblotiranja (HIV-1 ali HIV-2).
Laboratorijsko strokovno mnenje o okužbi s HIV se izvede le na podlagi pozitivnega rezultata imunoblotiranja (zahodnega blota). Pri izvajanju strokovne diagnostike je treba uporabiti nomenklaturo genov gena in HIV, predlaganih leta 1990 (tabela 9.5 [Show] ).
Posebnost imunoblotskih pasov je treba oceniti zelo previdno in skrbno oceniti z uporabo rezultatov preskusnega seruma (pozitivne in negativne), ki se izvajajo vzporedno s študijem eksperimentalnih vzorcev, in vzorec imunoblota z oznako HIV beljakovin (pritrjeno s strani proizvajalca v preskusni sistem). Razlaga dobljenih rezultatov je treba izvesti v skladu z navodili, povezanimi s preskusnim sistemom. Kot pravilo, merilo pozitivnosti je obvezna prisotnost protiteles na dva beljakovina (predhodnik, zunanji ali transmembran), kodiran z ENV gen, in možno prisotnost protiteles do proizvodov dveh drugih strukturnih HIV genov - gag in Pol (Tabela 9.6. [Show] ).
| Tabela 9.6. Merila za razlago rezultatov imunoblotiranja za HIV-1 in HIV-2 (WHO, 1990) | |||
| Rezultat. | HIV-1. | HIV-2. | |
| Pozitivno | +/- Strip Pol. +/- Band gag. | 2 ENV trakovi (predhodnik, zunanji GP ali transmembranski GP) +/- Strip Pol. +/- Band gag. |
|
| Negativno | Brez posebnih vrv HIV-1 | Manjkajoči posebni trakovi HIV-2 | |
| Negotovost | Drugi profili, ki se ne štejejo za pozitivne ali negativne | ||
V primeru dvomljivega rezultata je treba uživati \u200b\u200bv seznamu priporočil za končno pojasnilo rezultatov imunobrotiranja (tabela 9.7 [Show] ).
| Tabela 9.7. Priporočila za končno pojasnitev negotovih rezultatov imunoblet (WHO, 1990) | |
| Prisotnost pasov, ki ustrezajo proteinom HIV | Razlaga rezultata, nadaljnje ukrepe |
| HIV-1. | |
| Samo P17. | |
| Samo P24 in GP160 | Tako se lahko pojavi nenavadna slika na začetku serokonverzije. Izvesti je treba takojšnjo ponovno preučitev vzorca. Če se dobi isti profil, je potrebno po 2 tednih po odstranitvi prvega vzorca, da vzamete drugi vzorec za testiranje v imunoblotiranju |
| Drugi profili | Ti profili (GAG in / ali ROL brez ENV) lahko kažejo na serokonverzije ali ne-komerske reakcije |
| HIV-2. | |
| Samo P16. | Lahko razvrstimo kot negativne, dodatne definicije ne zahtevajo |
| V prisotnosti ali odsotnosti gaga / ROL-a | Ponovna preskusiti istega vzorca, vendar uporablja drugo serijo reagentov |
| Samo P24 ali GP140 | Ta nenavaden profil se lahko pojavi na začetku serokonverzije. Izvesti je treba takojšnjo ponovno preučitev vzorca. Če je isti profil dosežen, 2 tedna po jemanju 1. vzorca, je treba vzeti drugi vzorec za testiranje v imunoblotting |
| Drugi profili | Ti profili (GAG in / ali ROL brez ENV) lahko kažejo na serokonverzijo ali nespecifične reakcije. |
O priporočilih ruskega znanstvenega in metodološkega centra za preprečevanje in nadzor aidsa, je rezultat pozitiven v prisotnosti protiteles vsaj enega od GP41, GP120 beljakovin v kombinaciji s protitelesi do drugih specifičnih beljakovin HIV-1 ali brez protitelesa. Ta priporočila so narejena na podlagi izkušenj z delom s serumi otrok iz v bolnišničnih žariščih, ki so pogosto opredeljena protitelesa le ene od beljakovin virusnih lupin.
Glavni del primarnih anketiranih seropozitivnih bolnikov se nanaša na fazo obstojne splošne limfadenopatije (PGL) ali asimptomatske faze. Zato se na imunoblotu (nitroceluloški trak, na kateri imobilizirani HIV beljakovine imobilizira), praviloma določi naslednja kombinacija protiteles do HIV-1: protitelesa na lupinske beljakovine GP160, GP120 in GP41, ki jo kodiramo genome ENV, v kombinaciji s protitelesi do osrednjih beljakovin P24 (beljakovin nukleokapid, kodiran z genomom GAG) in P31 / 34 (endonukleaza, ki jo kodiramo Pol Genome).
Pozitivne reakcije samo z gag in / ali RL proteini se lahko pojavijo v primeru zgodnje faze serokonverzije, kot tudi kažejo okužbo, ki jo povzroči HIV-2, ali ne-specifične reakcije.
V primeru pridobivanja dvomljivega rezultata se lahko uporaba različnih metodoloških tehnik pojasni z dejstvom okužbe s HIV.
Glede na tehnične zmogljivosti (prisotnost diagnostičnih sklopov in reagentov, oprema posebne opreme in usposabljanje osebja), strokovni laboratorij izvaja dodatne diagnostične študije (sl. 9.10).
V nekaterih primerih je priporočljivo uporabiti molekularne genetske metode, ki omogočajo določitev genetskih sekvenc HIV v serumu, v krvnih limfocitih ali vozliščih LEMPH. Preverjanje specifičnosti sekvenc DNA, pridobljenih kot rezultat PCR, se lahko izvede s hibridizacijo nukleinskih kislin s posebnimi DNA sondami.
Metode radioimunoprecipipipacije (RIP) in posredno imunofluorescenco (IFL) se lahko uporabijo tudi za končno preverjanje serumov z dvomljivimi rezultati v imunoblutiranju.
Odkrivanje HIV RNA v krvni plazmi ni kakovostna ali kvantitativna metoda, ni pomembna za diagnozo okužbe s HIV. Ta rezultat je treba potrditi s standardnimi metodami, kot so imunoblotiranje, po 2-4 mesecih po prejemu glavnega dvomljivega ali negativnega odziva.
Sprostitev HIV v celični kulturi je resnica v zadnjem primeru. Vendar pa je metoda zapletena, cesta in se izvaja le v posebej opremljenih raziskovalnih laboratorijih.
Vsebina CD4 + - celic v krvi je nespecifična indikator, vendar v spornih primerih (IFA + ", Immunoblot" - ", prisotnost kliničnih znakov okužbe / aids HIV), se lahko uporablja kot vodilo za sprejetje strokovne odločitve. Če ima laboratorij zmožnost opravljanja samo imunoflating, je treba upoštevati priporočila, določene v tabeli. 9.7 in na sl. 9.9.
Osebe, s strokovnim preizkusom seruma, katerih dvomljivi (negotovi) rezultati, razen v primeru odkrivanja protiteles le na P17 (HIV-1) ali P16 (HIV-2), je treba ponovno preskusiti 6 mesecev (po 3 mesecih ). V primeru resnične okužbe s HIV po 3-6 mesecih se "pozitivni" govornik opazi v spektru protiteles - dodatno tvorbo protiteles na druge virusne beljakovine. Lažna reakcija je značilna, da se ohranja dolgo časa dvomljivega vzorca imunskega blotanja ali izginotja sumljivih črtov. Če bodo po navedenem obdobju rezultate ponavljajočega imunobtacije negativne ali dvomljive, potem v odsotnosti dejavnikov tveganja, kliničnih simptomov ali drugih dejavnikov, povezanih z okužbo s HIV, se lahko oseba šteje za seronetive za protitelesa do HIV-1 in HIV-2.
False-pozitivni rezultati zaradi vsebnosti krvi protiteles do allotigenske histokompatibilnosti, ki je del HIV Shell, se manifestirajo na imunoblotu v obliki pasu na ravni GP41 in GP31. Vzroki drugih nespecifičnih reakcij (na primer na P24, ki jih pogosto najdemo pri ljudeh z avtoimunskimi procesi), še niso pojasnjeni.
Izboljšanje proizvodne tehnologije imunodermenskih testnih sistemov je omogočilo doseganje visoke občutljivosti - do 99,99%, medtem ko je občutljivost metode imunobloting 97%. Zato lahko negativna neskladnost v imunoblutiranju pod pozitivnimi rezultati v IFA kaže na začetno obdobje serokonverzije, za katero je značilna nizka raven specifičnih protiteles. Zato je treba študijo ponoviti po 1,5-2 mesecih., To je čas, ki je potreben za dokončanje serokonverzije, doseže koncentracijo specifičnih protiteles v krvi, ki zadostuje za zaznavanje metode imunoblotiranja.
Pozitivni rezultat (rezultati) študije o referenčni ali le fazi laboratorijske diagnoze okužbe z virusom HIV, to je pozitiven rezultat v ne-imuno-imunicijskem testnem sistemu, kot rezultat, ki ga ne potrjujejo strokovne metode, je razlagati kot prisotnost v krvi anketiranih protitelesnih protiteles. V okviru navzkrižne reakcije pomeni vezavo neeptičnih območij v beljakovinah ali HIV peptidih, ki se uporabljajo kot antigenska osnova v preskusnem sistemu, v katerem je bil dosežen pozitiven rezultat.
V odsotnosti imunske pomanjkljivosti in kliničnih znakov okužbe s HIV se take osebe štejejo za seronetive glede na protitelesa na HIV in jih je treba prekiniti.
Končna diagnoza nalezljivega virusa HIV se uveljavlja le na podlagi vseh kliničnih, epidemioloških in laboratorijskih podatkov. Obvestite bolnikovo diagnozo okužbe z virusom HIV, je prav samo obiskuje zdravnika.
Glavna metoda potrditve (strokovne) laboratorijske diagnostike okužbe z virusom HIV je imunoblot. Vendar pa je glede na njegovo manjšo občutljivost v primerjavi z IFA predlagana več raziskovalcev za uporabo kombinacije več preskusnih sistemov za končno določanje prisotnosti posebnih protiteles do HIV. Na primer, G. van der Groen et al. Ponuja alternativno imunoblotiranje. Postopek za preverjanje pozitivnih rezultatov faze presejanja laboratorijske diagnoze okužbe s HIV. Vključuje študijo gradiva vzporedno v treh preskusnih sistemih, ki temeljijo na različnih metodah odkrivanja specifičnih protiteles do HIV (več različic EIFA, reakcijo aglutinacije) z uporabo antigena različne narave. Avtorji so uspeli izbrati takšne kombinacije preskusnih sistemov, katerih uporaba zagotavlja 100-odstotno občutljivost n specifičnosti v primerjavi z rezultati, dobljenimi v imunoblotiranju.
Poceni te metode strokovne diagnoze je nedvomna prednost, vendar pomanjkanje informacij, ki so posebej virusne proteine, imajo protitelesa v pacientovi krvi, ne omogoča ocenjevanja specifičnosti reakcije v vsakem posameznem primeru, kot tudi skladbo Spremembe v spektru protiteles v zgodnji fazi serokonverzije.
Laboratorijska diagnoza okužbe s HIV pri otrocih, rojenih iz matere, okuženih z virusom HIV, ima svoje lastne značilnosti. Od trenutka rojstva za dolgo časa (do 15 mesecev) v krvi takih otrok lahko kroži protitelesa proti HIV. Samo imunoglobulini razreda IgG prodre skozi placentalno pregrado, tako da IGM in IGA specifični Nmmmplobulini IGM in IGA razredov omogočajo potrditev okužbe, vendar negativni rezultat ne more navesti odsotnosti HIV.
Pri otrocih, mlajših od 1 mesecev, replikacija HPV še ni, in edina metoda preverjanja je PCR. Določanje antigena P24 pri otrocih, starejših od 1 meseca, je tudi potrditvena metoda.
Odsotnost protiteles do HIV v novorojenčkih ne pomeni, da virus ne prodre skozi placentno pregrado. V vsakem primeru so otroci mater, okuženih z HIV, veljajo laboratorijske in diagnostične raziskave in opazovanje v 36 mesecih od rojstva.
Rezultati laboratorijskih študij o označevalcih HIV zahtevajo previdno razlago in jih je treba obravnavati le skupaj s podatki o epidemioloških in kliničnih pregledih. Po drugi strani pa je treba opozoriti, da kljub visoki občutljivosti sodobnih metod negativne rezultate raziskav ne morejo v celoti odpraviti prisotnosti okužbe s HIV. Zato je negativen rezultat študije, na primer z imunobrotiranjem, je mogoče oblikovati le kot odsotnost posebnih protiteles do HIV-1 in HIV-2.
Diagnoza okužbe s HIV pri seronegativnih bolnikih
Kakovost preskusnih sistemov, ki se uporabljajo v laboratorijski diagnosticiranju okužbe z virusom HIV, se vsako leto izboljša, njihova občutljivost pa se poveča. Vendar pa lahko visoka variabilnost HIV privede do novih vrst, protitelesa, ki jih obstoječi preskusni sistemi ne smejo priznati. Poleg tega obstajajo primeri atipičnega humoralnega odziva imunskega sistema gostiteljskega organizma na virus. Torej, L.Montagnier leta 1996 je poročal o dveh bolnikih z aidsom, ki v predhodno več let niso bili ugotovljeni v krvi specifičnih protiteles, diagnoza je narejena na podlagi kliničnih podatkov in potrjuje laboratorij samo za sprostitev HPV- 1 v celični kulturi. V takih primerih je treba uporabiti priporočila WHO, v skladu s katerim je klinična diagnoza okužbe s HIV pri odraslih in otrocih možna v prisotnosti enega od 12 indikatorskih bolezni AIDS:
- kandidiaza požiralnika, sapnika, bronchi, pljuč;
- ekstravalna kriptokoza;
- cryptosporidia z drisko več kot en mesec;
- cytomegalovirus poraz vseh organov (razen za obe jetri, vranicami in bezgavke vozlišča v bolniku, starejše od 1 meseca):
- okužba, ki jo povzroča virus preprostih herpes, je vztrajna več kot 1 mesec pri bolniku, starejših od 1 meseca;
- možganski limfom pri bolniku, mlajših od 60 let;
- limfocitna intersticijska pljučnica v otroku, mlajši od 13 let;
- različna okužba, ki jo povzročajo bakterije Micobacterium Avium Intracelulare ali M.Kansassii Group;
- pnevmatska pljučnica;
- progresivna multi-razred leuko-encefalopatija;
- toksoplazmoza centralnega živčnega sistema pri bolnikih, starejših od 1 meseca.
Prisotnost ene od teh bolezni vam omogoča diagnosticiranje okužbe s HIV, če ni laboratorijskega testiranja krvi za prisotnost protiteles do HIV ali celo po prejemu seronegativnega rezultata.
Vir: Medicinska laboratorijska diagnostika, programi in algoritmi. Ed. prof. Karpischenko A.I., St. Petersburg, Intermedica, 2001
Diagnoza okužbe s HIV vključuje dve fazi: vzpostavitev dejanskega dejstva okužbe z okužbo s HIV in določitvijo faze bolezni. Določitev faze neločljivo sledi in iskanju narave potek bolezni, nato pa oblikovanje napovedi tega bolnika, kot tudi izbiro taktike zdravljenja.
Kot veste, diagnoza vse nalezljive bolezni temelji na primerjavi epidemioloških, kliničnih in laboratorijskih podatkov, pretiravanje vrednosti ene od skupin teh podatkov pa lahko privede do diagnostičnih napak.
Epidemiološka merila za okužbo s HIV .
Prva faza diagnoze okužbe s HIV je zbiranje epidemiološke zgodovine in drugih epidemioloških podatkov o bolniku. Odsotnost epidemioloških podatkov lahko bistveno ovirajo diagnozo okužbe s HIV in ovirajo antiepidemične dejavnosti.
Epidemiološka merila je včasih lahko odločilna pri oblikovanju diagnoze okužbe s HIV, vendar imajo lahko tudi pomožno vrednost. Merilo za visoko verjetnost okužbe je odkrivanje osebe, ki je anketirala, takšne dejavnike tveganja okužbe, kot transfuzija darovalske krvi, pridobljene iz osebe, okužene z virusom HIV, rojstvo pregledane ženske, okužene z virusom HIV. Verjetnost okužbe je odlična v primeru rojstva matere, okužene z HIV, spolnim stikom z okuženo osebo, okuženo z virusom HIV, skupni parenteralni sprejem zdravil z okuženo osebo, okuženo z virusom HIV. Določeno tveganje okužbe je zaznano z zanesljivimi parenteralnimi intervencijami, ki se izvajajo z orodji, verjetno kontaminirano HIV (to je v notranjih bolnišnicah in podobnih žarišča okužb s HIV s parenteralno s prenosom HIV).
O opaznem tveganju okužbe se lahko razpravlja v primerih, ko anketirani poročajo spolne odnose ali parenteralno zdravljenje z drogami na območjih, kjer je HIV bistveno razdeljen med to skupino prebivalstva, na katerega pripada subjekt.
Hkrati se spolne komunikacije in vnos drog na območjih z nizko širjenjem okužbe s HIV ne izključuje okužbe s HIV.
Pomanjkanje zanesljivih dejavnikov tveganja za okužbo s HIV lahko dvomijo na laboratorijske raziskave. V takih primerih je priporočljivo ponoviti laboratorijske študije.
Klinični kriteriji okužbe s HIV.
Zgodnja diagnoza okužbe z virusom HIV zagotavlja pravočasnost bolnikove terapije in uvajanje preventivnih ukrepov v Osredotočenosti Opozorilo Nenamerni prenos virusa iz zdrave osebe, okužene. Končno, zgodnja diagnoza omogoča pravočasno izvajanje delavnice, psihološke pomoči, socialne rehabilitacije. Prvi uspehi pri zdravljenju bolnikov omogočajo zgodnjo diagnozo, da bi bistveno razširili življenje bolnikov in celo upanja na zdravilo.
Kompleksnost zgodnjega diagnoze, ki temelji na klinični sliki, je nesmisečen, polimorfizem simptomov v fazi II, ki že ni omenjal odsotnosti klinike v fazi I. Kljub temu pa v vseh primerih nemotivirane mašljivosti, prisotnost nočnega znojenja, glavobola, Zlasti v ozadju kratkotrajne vročine (3-10 dni) s temperaturo 38-38,50 ° C, ki jo spremlja tonzilitis, podaljšan sindrom driske, izguba teže v kratkem času, je to predvsem potrebno izključiti okužbo s HIV. Diagnoza v tem obdobju pomaga identifikaciji različnih kožnih izpuščajev (madež, papula, rozela, pištole) ali furunkuloze v objektivnem pregledu. Prisotnost limfadenopatije, tudi v primerih povečanja ene skupine limfnih vozlišč in vse več, z večino, ki je ustvarila, z večjim deležem verjetnosti, dopušča sumijo klinično okužbo s HIV. Za bolezen je še posebej značilna za povečanje zadnjega, submandibularnega, superprevodnega, aksilarne in komolce limfnih vozlišč. Praviloma povečajo velikost do 2-5 cm v premeru, neboleč, gosto elastično doslednost, občasno se združijo v konglomerat. Zelo značilno je za okužbo s HIV povečanje več kot enega vozlišča, več kot eno skupino (z izjemo dimeka), kar je več kot 3 mesece.
Pogosto v zgodnji fazi bolezni, prisotnost psiho-nevroloških simptomov: občutek anksioznosti, depresije, slano hoje, zmanjšanje vizualnega ostrine, konvulzivne napade z znaki poraz poraz psiho-čustvene sfere (kršitev spomina , pozabljivost, neustreznost vedenja, čustvenih čustev). Na najbolj značilne značilnosti zgodnja faza okužbe z virusom HIV vključuje:
1. Zmanjšanje telesne mase manj kot 10%;
2. Spremembe na koži in sluznice (sebororski dermatitis, folikulitis, Prurigo, psoriaza, glivične utripajo žeblje, ponavljajoče se razjede v ustni votlini, nekrotični gingivitis);
3 . Herpes zavetišča v osebah, mlajših od 50 let;
4. Ponavljajoče se okužbe zgornjih dihalnih poti;
At. vmesna faza Bolezni, za katere je značilna klinika razporejene superinfekcije, ki je nastala kot posledica imunske pomanjkljivosti, je najbolj značilna:
1 . Postopno zmanjšanje telesne teže več kot 10%;
2 . Driska nejasnih genov, ki se nadaljuje več kot 1 mesec ..;
3 . Kandidiaza ustne votline;
4 . Leukoplakia;
5. Pljučna tuberkuloza;
6. Periferna nevropatija;
7. Lokalizirane oblike CAPOS SARCOMA;
8. Razširjanje lužjih herpes;
9. Huda, ponavljajoča se bakterijska okužba (pljučnice, sinusitis, piomyoza).
Za pozni faziOmogočanje diagnosticiranja okužbe s HIV ali, v vsakem primeru, da izvede diferencialna diagnostika vključuje:
1. Pnevmatska pljučnica;
2 . Toksoplazmoza;
3. Kriptokokoza;
4. Okužba CMV;
5. Preproste herpes;
6. Progresivna multi-razred leukoentenalopatija;
7. Histoplazmoza;
8. Canstadose Esophagitis;
9. Okužba MAC;
10. Salinelese septikemija;
11. Ekstravalna tuberkuloza;
12. Limfom, sarcoma capos;
13. Cachexia;
14. HIV-encefalopatija.
Leta 1988, ki je ponudil klinično diagnostiko ocena paleterjev simptomovObstoječa v bolnikovem sumljivem okužbi s HIV:
Persising splošna limfadenopatija 0
Spremembe na koži in sluznice 1
Zmanjšanje mase telesne mase 1
Izrazita utrujenost 1.
Preproste herpes 2.
Driska za več kot 1 mesec. štiri
Zvišana telesna temperatura, ki traja več kot 1 mesec. štiri
Zmanjšanje telesne teže več kot 10% 4
Lung Tuberkuloza 5.
Ponavljajoča se bakterijska okužba 5
Leukoplakia ustna votlina 5
Stotimatitis, ust Trush 5
Lokalizirana sarcoma Caposhi 8
Cachexia 12.
Hkrati je količina točk od 0 do 3 ocenjena kot verjetnost okužbe s HIV zelo majhna, 4 -11 točk - bolezen je verjetno 12 in več.
Na splošno je klinična diagnoza okužbe s HIV, predvsem diagnoza spektra patologije, povezane z aidsom pri bolniku s sekundarno imunsko pomanjkljivostjo. Ker bolezni indikatorske indikatorske bolezni vključujejo 23 nozoloških oblik, je najprimernejši sindromični pristop k diagnozi. Skoraj vedno vzame bolnika s splošnim sindromom zastrupitve (nemotivirana šibkost, letargija, hitra utrujenost), ki se razvija v ozadju dolgega podfebrika ali mrzlice nejasne geneze, pogosteje ponoči in zjutraj, ki jo spremlja bogata. Stalni sindrom neizpolnjenega splošnega periferne limfadenopatije, ki je 20%, ki ga spremlja Hepato Splenomegalija različnih stopenj resnosti. Ena od vodilnih sindroma bolezni je sindrom bronho-pljučne patologije, kako globoke lezije pljučne tkanine v obliki pnevmatske pljučnice se razvija na kmetijah bolezni, za pnevmocistozo se razvije v ozadju globoke imunske pomanjkljivosti. Toda s trajanjem več kot 1 mesec, sindrom nemotivirane driske se nanaša na zgodnje pojavljati, je značilna odpornost na zdravljenje z zdravili. Eden od sindromov okužbe s HIV je valovna arentaralna artralgija nejasne etiologije. Sindrom lezij in sluznice je treba pripisati tudi značilnim manifestacijam bolezni, ki se kaže zaradi nespecifičnega makulo-papularnega izpuščaja, odporna na terapijo s steroidi z ekcem, stafilokokvilnim impetigom. Dermatološke manifestacije vključujejo tudi ponavljajoče se glivic (mikaza, kandimeaza, bakterijske (folikuli, furunculosis, hidravlične), virusne (herpes) lezije kože in sluznice. Končno, okužba s HIV je značilna neoplazme, predvsem v obliki Caposhi in limfoma sarkoma in tudi nekatere druge vrste tumorjev.
Prisotnost bolnika vsaj dveh kliničnih in dveh kliničnih in laboratorijskih (Leuko-lek-nevtropenija, hipogammaglobulinemija) izmed zgoraj navedenih simptomov omogoča visoko stopnjo zaupanja, da bi diagnosticirali okužbo s HIV z visoko stopnjo zaupanja. Hkrati pa v primeru identifikacije dveh zelo pogosto najdemo pri bolnikih s sindromi, kot so vročina in limfadenopatija, ki sta ostala za mesec in več, odporna nemotivirana driska, zmanjšanje telesne mase za več kot 10% ali bogate nočne potenje dajejo razloge za postavitev diagnoze in skrbnih laboratorijskih raziskav.
At. stopnje 2a.bolezen se lahko sumi le s simptomiranjem splošne limfadenopatije pri bolniku iz skupine tveganja ali v prisotnosti epidanamnese.
At. stopnje 2b. (zgodnje ali šibko izrabljene) somatsko dobro počutje, normalna dejavnost. Lezije kože in sluznice niso pomembne, ponavljajoče se okužbe dihalnega trakta niso ustvarjene, izguba telesne teže ne presega 10%.
Po priporočilih WHO, zanesljiva klinična diagnoza okužbe s HIV pri odraslih in otrocih, so možne v prisotnosti ene od 12 kazalnikov AIDS indikatorjev: 1) kavbidoze esophagusa, sapnika, bronhija, pljuč; 2) ekstragalna kriptokokoza; 3) Cryptosporidia z drisko več kot en mesec; 4) citomegalovirus poraz vseh organov (razen jeter, vranice in bezgavk v pacientu več kot 1 mesec); 5) okužba, ki jo povzroča preprost virus herpes, vztrajno več kot 1 mesec pri bolniku, starejših od 1 meseca; 6) Caposhi sarkoma pri bolniku, mlajših od 60 let; 7) možganski limfom pri bolniku, mlajših od 60 let; 8) limfocitna intersticijska pljučnica v otroku do 13 let, 9) razširjeno okužbo, ki jo povzročajo bakterije micobacterium avium Intracelulare ali M.Kansassii Group; 10) Pnevmatska pljučnica; 11) progresivna večrazred leicoentepholofalopatija; 12) Toksoplazmoza centralnega živčnega sistema pri bolnikih, starejših od 1 meseca. Prisotnost ene od teh bolezni omogoča diagnosticiranje okužbe s HIV, če ni serološkega imunoferjevega preskusa krvi ali celo po prejemu seronegativnega rezultata.
Diferencializem faz bolezni ni težko, t.j. Diferenciacija stopenj na kliničnih merilih. Po mnenju strokovnjakov CDC (ZDA), je najbolj objektivno merilo število T-pomočnikov, in ne klinične manifestacije, ker se številne od teh držav pogosto najdemo pri posameznikih, ki niso okuženi z virusom HIV. Leta 1991 je Center ugotovil, da je lahko diagnoza aidsa v primerih, če: a) V okuženem primeru obstaja ena od 23 držav, povezanih z aidsom, ali B), je okužena z virusom HIV in ima manj kot 200 CD4 + celic / mm.
Laboratorijska merila za okužbo s HIV.
Raziskava o okužbi s HIV je v glavnem predmet:
2 . Osebe s kliniki kandidadidov ezofagitis, bronhijskimi kandididi in pljuča, diseminirano ali ekstrakcijo kokcidomikoze, pnevmatske pljučnice, ekstraktivne kriptokokokokoze, kriptosporioza s inventorno drisko več kot 1 mesec, citomegalovirus poškodbe notranjih organov, razen jeter, vranice, bezgavke pri bolnikih, starejših od 6 mesecev, citmegalovirngo Retinitis z izgubo vida, herpetik okužbo z več-razjedami, ki traja več kot 1 mesec., Bronhitis, pljučnice ali esophagitis, ponavljajoče se zavetje herpes, sredstva ali ekstrapopoluoniranje histoplazmoze, pljučne tuberkuloze ali ekstrapulmonarna, jestroosioza z drisko trajanje več kot 1 mesec , skupna ali ekstrapultarna mak-okužba, progresivna multifoksi levoentephalofalopatija, možganska toksoplazmoza, saninelete septikemije, sarkoma kapsis, limfom, limfoida intersticijska pljučnica (pri otrocih)
Trenutno se uporabljajo različne metode za odkrivanje HIV, antigen in HIV genov, kot tudi metode za odkrivanje protiteles na HIV, se uporabljajo za laboratorijsko diagnozo okužbe s HIV. Vse te metode imajo različne učinkovitosti, zahtevajo različne opreme in drugačno raven usposabljanja osebja. Rezultati teh študij zahtevajo pristojne razlage.
... Diagnoza kakršne koli nalezljive bolezni temelji na primerjavi epidemioloških, kliničnih in laboratorijskih podatkov, pretiravanje vrednosti ene od teh podatkovnih skupin pa lahko privede do diagnostičnih napak.
Diagnoza okužbe s HIV vključuje dve stopnji:
JAZ. Stopnja - vzpostavitev dejstva okužbe z okužbo s HIV
;
II. Stopnja - določitev faze bolezni
.
Vzpostavitev dejstva okužbe z okužbo s HIV
Vzpostavitev dejanskega dejstva okužbe z okužbo s HIV (to je identifikacija okuženih s HIV) na zadnji strani vključuje tudi dve fazi:
I fazi- povezani imunosorbent test.(ELISA): Metoda IFA je presejalna (kvalificirana) - izbira domnevno okuženih oseb, to je, da je njegov namen prepoznati sumljive osebe in sejanje zdravih posameznikov; HIV protitelesa zaznajo z drugimi protitelesi na umetno protitelesa (protitelesa proti drugim protitelesom). Ta "pomožna" protitelesa bodo encim. Vsi pregledi presejanja morajo biti zelo občutljivi, da ne zamudite bolnika. Zaradi tega njihova specifičnost ni zelo visoka, to je, ELISA lahko da pozitiven odziv ("verjetno bolan") v neobičajnih ljudeh (na primer pri bolnikih z avtoimunskimi boleznimi: revmatizem, sistemski rdeči lupus itd.). Pogostost lažnih pozitivnih rezultatov pri uporabi različnih preskusnih sistemov se giblje od 0,02 do 0,5%. Če je človeška ELISA dala pozitiven rezultat, potem potrjuje dejstvo okužbe s HIV, je treba pregledati. Pri izvajanju ELISA v 3 - 5% primerov so možne lažne negativne rezultate - če se je okužba razmeroma v zadnjem času pojavila in raven protiteles je še vedno zelo nizka, ali v terminalni fazi bolezni, za katero je značilna huda poškodba imuna sistem z globoko kršitvijo procesa protiteles. Zato v prisotnosti podatkov, ki se pričajo za stik z okuženim virusom HIV ponavadi ponavljajoče se študije po 2 do 3 mesecih.
Faza II. - imunobloting. (pri modifikaciji zahodnega blota, zahodnega blota): To je bolj zapletena metoda in služi za potrditev dejstva okužbe. Ta metoda razkriva nedelažna protitelesa do HIV, ampak protitelesa na svoje ločene strukturne beljakovine (P24, GP120, GP41 itd.). Rezultati imunablota se štejejo za pozitivne, če se protitelesa zaznajo vsaj na tri beljakovine, od katerih je eden kodiran z geni ENV, drugi - geni GAG, tretji geni pol. Če so protitelesa zaznana na enega ali dva beljakovina, se rezultat šteje za dvomljivo in zahteva potrditev. V večini laboratorijev se diagnoza okužbe s HIV dvigne, če se protitelesa istočasno razkrijejo na P24, P31, GP4L in GPL20 / GP160 beljakovin. Bistvo metode: Virus se uniči na komponentah (antigenih), ki so sestavljeni iz ioniziranih aminokislinskih ostankov, zato se vse komponente, ki imajo zoro, razlikujejo drug od drugega; Potem, s pomočjo elektroforeze (električni tok), se antigeni distribuirajo na površini traku - če obstajajo protitelesa proti HIV v preskusnem serumu, bodo sodelovali z vsemi skupinami antigenov, kar se lahko razkrije.
OpozoritiTa HIV protitelesa se pojavijo v 90-95%, okuženih v 3 mesecih po okužbi, v 5-9% okuženih protiteles do HIV se pojavi po 6 mesecih in v 0,5-1% okuženih protiteles do HIV prikaže v poznejših datumih. V fazi aidsa se lahko količina protiteles zmanjša, do popolnega izginotja.
V imunologiji je takšna stvar "Serološko okno" - obdobje od okužbe pred videzom takega števila protiteles, ki jih je mogoče razkriti. Za HIV to obdobje običajno traja od 2 do 12 tednov, v redkih primerih. V obdobju "serološkega okna" na analizah je oseba zdrava, vendar je dejansko okužena HIV. Ugotovljeno je bilo, da je DNA HIV lahko v človeškem genomu vsaj tri leta brez znakov aktivnosti in protiteles do HIV (označevalci okužbe z virusom HIV) se ne pojavijo.
V tem obdobju ("serološko okno") za identifikacijo okuženih virov HIV in celo 1-2 tedna po okužbi reakcija polimeraze(PCR). To je izredno občutljiva metoda - teoretično, lahko razkrijete 1 DNA na 10 ml medija. Bistvo metode je naslednje: S pomočjo polimerazne verižne reakcije dobimo veliko kopij nukleinske kisline (virus je nukleinska kislina -funk ali RNA - v beljakovin plašč), ki nato zazna z oznako encimi ali Izotopi, kot tudi glede na značilno strukturo. PCR je draga diagnostična metoda, ko se pregledovanje ne uporablja pri načrtovanju.
Določitev faze bolezni
Razvoj AIDS temelji naNa prvem mestu, uničenje T-limfocitov-pomol, ki so označeni z monoklonskimi protitelesi - diferenciacijski grozdi - kot CD4. V zvezi s tem je diagnoza in spremljanje napredovanja bolezni nemogoče brez nadzora subpopulacije T-pomočnikov, ki je najbolj udobno izvedena s pomočjo laserskega celičnega sortarja.
S šibko izrecno okužbo s HIVŠtevilo T-limfocitov je izjemno spremenljiva indikator. Na splošno se znižanje števila celic CD4 (absolutno in relativno) zazna v osebah, okužba z virusom HIV se je zgodila vsaj pred enim letom. Po drugi strani pa je v zgodnjih fazah okužbe pogosto močno povečano število T-supresorjev (CD8) tako v periferni krvi kot v povečanih bezgavskih vozliščih.
Z izrazitimi pripomočkiabsolutna večina bolnikov ima zmanjšano skupno T-limfocita (manj kot 1000 v 1 μl krvi, vključno s limfociti CD4 - manj kot 22 v 1 μl, absolutna vrednost vsebnosti CD8 ostane v normalnem območju). V skladu s tem se razmerje CD4 / CD8 dramatično zmanjša. In vitro T-limfocitov odziv na standardne antigene in mitogene zmanjšuje strogo v skladu s sorazmerno zmanjšanim številom CD4.
Za poznejše aprte aids Skupna limfopija, nevtropenija, trombocitopenija (oziroma zmanjšanje števila limfocitov, nevtrofilcev in trombocitov), \u200b\u200banemija je značilna. Te spremembe so lahko posledica osrednjega zatiranja krvnih tvorbo zaradi poškodbe krvnih organov z virusom, kot tudi avtoimunsko uničenje celičnih subpopulacij na obrobju. Poleg tega je za pomoč, zmerno povečanje števila Gamma Globulins s prevladujočim povečanjem vsebine IgG. Bolniki s hudimi simptomi pomoči imajo pogosto povečano raven IGA. Na nekaterih fazah bolezni se raven takšnih pripomočkov znatno poveča kot 1-mikroglobulin, kislinski nalepk-interferon, 1-timozin. Enako se zgodi s izločanjem prostega neoptine - makrofage metabolita. Ni mogoče oceniti relativnega pomena vsakega od navedenih testov, katerega število se nenehno povečuje. Zato jih je treba upoštevati v sodelovanju z označevalci HIV imunovirološke in citološke narave. Za klinično analizo krvi, levkopenije, limfopenije (oziroma zmanjšanje števila levkocitov in limfocitov) je značilna.
1 faza - " faza inkubacije»
- protitelesa proti HIV še niso odkrita; Diagnoza okužbe s HIV na tej stopnji se dvigne na podlagi epidemioloških podatkov in laboratorija je treba potrditi z odkrivanjem virusa človeške imunske pomanjkljivosti, njenih antigenov, nukleinskih kislin HIV;
2 faza - " primarne manifestacije»
- v tem obdobju že ustvarjajo protitelesa:;
2a faza - " asimptomatsko»
- okužba s HIV se kaže le s proizvodnjo protiteles;
2B faza - " akutna okužba s HIV brez sekundarnih bolezni»
- v krvi bolnikov, e-poštne limfocite - "mononuklearcije" lahko najdemo in prehodno zmanjšanje ravni CD4-limfocitov (akutna klinična okužba opazimo v 50-90% okuženih oseb v prvih treh mesecih po okužbi; začetek a obdobje akutne okužbe je običajno pred seroconversion i.e. Videz protiteles proti HIV);
2B faza - " akutna okužba s HIV s sekundarnimi boleznimi»
- na podlagi zmanjšanja ravni CD4 limfocitov in sekundarnih bolezni različnih etiologij (Alarga, bakterijske in pnevmatske pljučnice, kandidate, okužbe herpes itd.), se pojavijo in razvijajo kot posledica te imunske pomanjkljivosti.
3 faza - " latent.»
- V odgovor na napredovanje imunske pomanjkljivosti se sprememba imunskega odziva spremeni v obliki prekomerne reprodukcije celic CD4, ki ji sledi postopno zmanjšanje ravni limfocitov CD4, v povprečju po stopnji 0,05-0.07X109 / \\ t l na leto; protitelesa proti HIV so zaznana v krvi;
4 faza - " stopnja sekundarnih bolezni»
- izčrpavanje limfocitov CD4 populacije, koncentracija protiteles proti virusu se znatno zmanjša (odvisno od resnosti sekundarnih bolezni, faze 4a, 4b, 4b);
5 faza - " terminal Stage.»
- Običajno je zmanjšanje količine CD4 celic nižje od 0,05x109 / L; Koncentracija protiteles proti virusu se bistveno zmanjša ali protitelesa ne smejo določiti.