साइनसॉइडल कोशिकाएं (एंडोथेलियल कोशिकाएं, कुफ़्फ़र कोशिकाएं, तारकीय और पिट कोशिकाएं), साइनसॉइड के लुमेन का सामना करने वाले हेपेटोसाइट्स के खंड के साथ मिलकर एक कार्यात्मक और ऊतकीय इकाई बनाती हैं।
अन्तःस्तर कोशिकासाइनसोइड्स को लाइन करें और फेनेस्ट्रे को शामिल करें, जो साइनसॉइड और डिसे के स्थान के बीच एक स्टेप्ड बैरियर बनाते हैं। कुफ़्फ़र कोशिकाएँ एंडोथेलियम से जुड़ी होती हैं।
तारकीय कोशिकाएंयकृत हेपेटोसाइट्स और एंडोथेलियल कोशिकाओं के बीच डिस्क के स्थान में स्थित होते हैं। डिस्क स्पेसइसमें ऊतक द्रव होता है जो आगे पोर्टल क्षेत्रों के लसीका वाहिकाओं में बहता है। साइनसॉइडल दबाव में वृद्धि के साथ, डिस्क के स्थान में लसीका उत्पादन बढ़ जाता है, जो यकृत से शिरापरक बहिर्वाह के उल्लंघन में जलोदर के गठन में भूमिका निभाता है।
कुफ़्फ़र सेल में लिगेंड्स के लिए विशिष्ट झिल्ली रिसेप्टर्स होते हैं, जिसमें इम्युनोग्लोबुलिन एफसी टुकड़ा और पूरक सी 3 बी घटक शामिल हैं, जो एंटीजन प्रस्तुति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।
कुफ़्फ़र कोशिकाएं सामान्यीकृत संक्रमण या चोटों के दौरान सक्रिय होती हैं। वे विशेष रूप से एंडोटॉक्सिन लेते हैं और प्रतिक्रिया में कई कारकों का उत्पादन करते हैं, जैसे कि ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर, इंटरल्यूकिन्स, कोलेजेनेज और लाइसोसोमल हाइड्रॉलिस। ये कारक बेचैनी और अस्वस्थता की भावना को बढ़ाते हैं। इसलिए, एंडोटॉक्सिन का विषाक्त प्रभाव कुफ़्फ़र कोशिकाओं के स्रावी उत्पादों के कारण होता है, क्योंकि यह अपने आप में गैर-विषैला होता है।
कुफ़्फ़र सेल प्रोस्टाग्लैंडीन सहित एराकिडोनिक एसिड मेटाबोलाइट्स को भी स्रावित करता है।
कुफ़्फ़र कोशिका में इंसुलिन, ग्लूकागन और लिपोप्रोटीन के लिए विशिष्ट झिल्ली रिसेप्टर्स होते हैं। N-acetylglycosamine, mannose, और galactose के लिए कार्बोहाइड्रेट रिसेप्टर कुछ ग्लाइकोप्रोटीन, विशेष रूप से लाइसोसोमल हाइड्रॉलिस के पिनोसाइटोसिस का मध्यस्थता कर सकता है। इसके अलावा, यह आईजीएम युक्त प्रतिरक्षा परिसरों के तेज में मध्यस्थता करता है।
भ्रूण के जिगर में, कुफ़्फ़र कोशिकाएं एरिथ्रोब्लास्टोइड कार्य करती हैं। कुफ़्फ़र कोशिकाओं द्वारा एंडोसाइटोसिस की पहचान और दर ऑप्सनिन, प्लाज्मा फ़ाइब्रोनेक्टिन, इम्युनोग्लोबुलिन और टफ़ट्सिन, एक प्राकृतिक इम्युनोमोडायलेटरी पेप्टाइड पर निर्भर करती है। ये "लिवर सिस्टर्स" विभिन्न आकारों के मैक्रोमोलेक्यूल्स को फ़िल्टर करते हैं। बड़े, ट्राइग्लिसराइड-संतृप्त काइलोमाइक्रोन उनसे नहीं गुजरते हैं, और छोटे, ट्राइग्लिसराइड-गरीब, लेकिन कोलेस्ट्रॉल- और रेटिनॉल-संतृप्त अवशेष डिसे के स्थान में प्रवेश कर सकते हैं। एंडोथेलियल कोशिकाएं लोब्यूल में उनके स्थान के आधार पर कुछ भिन्न होती हैं। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी से पता चलता है कि बेसमेंट झिल्ली के गठन के साथ फेनेस्ट्रे की संख्या में काफी कमी आ सकती है; ये परिवर्तन विशेष रूप से शराब के रोगियों में जोन 3 में स्पष्ट हैं।
साइनसॉइडल एंडोथेलियल कोशिकाएं रिसेप्टर-मध्यस्थता वाले एंडोसाइटोसिस का उपयोग करके संचलन से मैक्रोमोलेक्यूल्स और छोटे कणों को सक्रिय रूप से हटा देती हैं। वे हयालूरोनिक एसिड (संयोजी ऊतक का मुख्य पॉलीसेकेराइड घटक), चोंड्रोइटिन सल्फेट, और अंत में मैनोज युक्त एक ग्लाइकोप्रोटीन के साथ-साथ FcIgG टुकड़ों के लिए II और III रिसेप्टर्स और एक लिपोपॉलीसेकेराइड-बाइंडिंग प्रोटीन के लिए एक रिसेप्टर के लिए सतह रिसेप्टर्स ले जाते हैं। एंडोथेलियल कोशिकाएं ऊतक-हानिकारक एंजाइमों और रोगजनक कारकों (सूक्ष्मजीवों सहित) को हटाकर एक सफाई कार्य करती हैं। इसके अलावा, वे नष्ट हुए कोलेजन के रक्त को साफ करते हैं और लिपोप्रोटीन को बांधते और अवशोषित करते हैं।
जिगर की तारकीय कोशिकाएं(वसा भंडारण कोशिकाएं, लिपोसाइट्स, इटो कोशिकाएं)। ये कोशिकाएँ डिसे के सबेंडोथेलियल स्पेस में स्थित होती हैं। उनमें लंबे साइटोप्लाज्मिक बहिर्गमन होते हैं, जिनमें से कुछ पैरेन्काइमल कोशिकाओं के निकट संपर्क में होते हैं, जबकि अन्य कई साइनसोइड्स तक पहुंचते हैं, जहां वे रक्त प्रवाह के नियमन में भाग ले सकते हैं और इस प्रकार पोर्टल उच्च रक्तचाप को प्रभावित कर सकते हैं। एक सामान्य जिगर में, ये कोशिकाएं, जैसा कि यह थीं, रेटिनोइड्स के लिए मुख्य भंडारण स्थल हैं; रूपात्मक रूप से, यह कोशिका द्रव्य में वसा की बूंदों के रूप में प्रकट होता है। इन बूंदों के निकलने के बाद, स्टेलेट कोशिकाएं फाइब्रोब्लास्ट के समान हो जाती हैं। एंडोटिलिन -1 और पदार्थ पी के संपर्क में आने पर उनमें एक्टिन और मायोसिन और अनुबंध होता है। जब हेपेटोसाइट्स क्षतिग्रस्त हो जाते हैं, तो स्टेलेट कोशिकाएं वसा की बूंदों को खो देती हैं, फैलती हैं, ज़ोन 3 में माइग्रेट करती हैं, मायोफिब्रोब्लास्ट के समान एक फेनोटाइप प्राप्त करती हैं, और टाइप I, III का उत्पादन करती हैं। और IV कोलेजन, और लैमिनिन भी। इसके अलावा, वे कोशिका मैट्रिक्स प्रोटीन और उनके अवरोधकों का स्राव करते हैं, जैसे कि मेटालोप्रोटीनिस के ऊतक अवरोधक (अध्याय 19 देखें)। डिसे के स्थान के कोलेजनाइजेशन से हेपेटोसाइट में प्रोटीन-बाध्य सब्सट्रेट के सेवन में कमी आती है।
गड्ढे की कोशिकाएँ।ये बहुत ही मोबाइल लिम्फोसाइट्स हैं - प्राकृतिक हत्यारे, जो साइनसॉइड के लुमेन का सामना करने वाले एंडोथेलियम की सतह से जुड़े होते हैं। उनके माइक्रोविली या स्यूडोपोडिया एंडोथेलियल अस्तर में प्रवेश करते हैं, जो डिसे के अंतरिक्ष में पैरेन्काइमल कोशिकाओं के माइक्रोविली से जुड़ते हैं। ये कोशिकाएं लंबे समय तक नहीं रहती हैं और रक्त लिम्फोसाइटों को प्रसारित करके नवीनीकृत होती हैं जो साइनसॉइड में अंतर करती हैं। वे केंद्र में छड़ के साथ विशेषता कणिकाओं और पुटिकाओं को दिखाते हैं। पिट कोशिकाओं में ट्यूमर और वायरस से संक्रमित हेपेटोसाइट्स के खिलाफ सहज साइटोटोक्सिसिटी होती है।
साइनसॉइडल सेल इंटरैक्शन
कुफ़्फ़र कोशिकाओं और एंडोथेलियल कोशिकाओं के साथ-साथ साइनसॉइड कोशिकाओं और हेपेटोसाइट्स के बीच एक जटिल बातचीत होती है। Kupferalipolysaccharides द्वारा कोशिकाओं का सक्रियण एंडोथेलियल कोशिकाओं द्वारा hyaluronic एसिड के तेज को रोकता है। यह प्रभाव संभवतः ल्यूकोट्रिएन्स द्वारा मध्यस्थ है। साइनसॉइड कोशिकाओं द्वारा निर्मित साइटोकिन्स या तो हेपेटोसाइट प्रसार को उत्तेजित या बाधित कर सकते हैं।
शरीर में एंडोटॉक्सिन का मुख्य स्रोतएक ग्राम-नकारात्मक आंतों का वनस्पति है। वर्तमान में, इसमें कोई संदेह नहीं है कि यकृत मुख्य अंग है समाशोधन एंडोटॉक्सिन। एनडोटॉक्सिन सबसे पहले कोशिका द्वारा ग्रहण किया जाता हैकामी कुफ़्फ़र (केके), झिल्ली रिसेप्टर के साथ बातचीतसीडी 14. रिसेप्टर को स्वयं के रूप में बांध सकता है lipopolysaccharide(एलपीएस), और लिपिड ए-बाध्यकारी प्रोटीन के साथ इसका परिसरप्लाज्मा गांठ। लीवर मैक्रोफेज के साथ एलपीएस की बातचीत प्रतिक्रियाओं का एक झरना ट्रिगर करती है, जो उत्पादन और रिलीज पर आधारित होती है साइटोकिन्स का आयन और अन्य जैविक रूप से सक्रियमध्यस्थ।
मैक्रो की भूमिका के बारे में कई प्रकाशन हैंबैक्टीरियल एलपीएस के उत्थान और निकासी में यकृत (एलके), हालांकि, अन्य के साथ एंडोथेलियम की बातचीत मेसेंकाईमलकोशिकाओं, विशेष रूप से पेरिसिनसॉइडल Ito कोशिकाओं द्वारा, व्यावहारिक रूप से अध्ययन नहीं किया जाता है।
शोध विधि
200 ग्राम वजन वाले सफेद नर चूहों को 1 मिलीलीटर बाँझ खारा में अंतःक्षिप्त किया गया था अत्यधिक शुद्ध lyophilizedएलपीएस इ। कोलाई 0.5 की खुराक में तनाव 0111,2.5, 10, 25 और 50 मिलीग्राम/किलोग्राम। 0.5, 1, 3, 6, 12, 24, 72 घंटे और 1 सप्ताह की अवधि में, आंतरिक अंगों को संज्ञाहरण के तहत हटा दिया गया और 10% फॉर्मेलिन बफर में रखा गया। सामग्री पैराफिन ब्लॉकों में एम्बेडेड थी। धारा 5 माइक्रोन मोटी दागी गई थी प्रतिरक्षाऊतकरसायनstreptavidin-बायोटिनडेस्मिन के प्रति एंटीबॉडी की विधि द्वारा, α - निर्बाध - मांसपेशी एक्टिन (ए-जीएमए) और परमाणु प्रतिजनअच्छी तरह से फैलने वाली कोशिकाएं (पीसीएनए, " डकोस"). डेस्मिन का उपयोग मार्कर के रूप में किया गया था पेरिसिनसॉइडलIto कोशिकाएं, A-GMA - asमार्कर वी पेशीतंतुकोशिकाओं, पीसीएनए - प्रसार कोशिकाएं। जिगर की कोशिकाओं में एंडोटॉक्सिन का पता लगाने के लिए, शुद्ध एंटी-आरई-ग्लाइकोलिपिडएंटीबॉडीज (इंस्टीट्यूट ऑफ जनरल एंड क्लिनिकल पैथोलॉजी केडीओ, मॉस्को)।
अध्ययन के परिणाम
25 मिलीग्राम / किग्रा और उससे अधिक की खुराक पर, एलपीएस प्रशासन के 6 घंटे बाद घातक झटका देखा गया। जिगर के ऊतकों पर एलपीएस के तीव्र संपर्क ने इटो कोशिकाओं की सक्रियता का कारण बना, जो उनकी संख्या में वृद्धि से प्रकट हुआ था। संख्या डेस्मिनपॉजिटिवएलपीएस इंजेक्शन के बाद कोशिकाएं 6 घंटे से बढ़ीं और अधिकतम तक पहुंच गईं मा से 48-72 घंटे (चित्र 1, ए, बी)।
चावल। 1. चूहा जिगर वर्ग एसवाई, संसाधितएलएसएबी -मुझे- चेन्नीमीdes . के लिए एंटीबॉडी मेरा(एक बैंड α - निर्बाध ग्रीवा एक्टिन (सी), x400 (ए, बी) x200 (सी)।
ए - एंडोटॉक्सिन की शुरूआत से पहलेपर, एकल डेस्मिनपॉजिटिवपेरिपोर्टल ज़ोन में इतो कोशिकाएँ; बी- 72 घंटेएंडोटॉक्सिन के प्रशासन के बाद पर: असंख्य डेस्मिनपॉजिटिवइतो कोशिकाएं; में- एन . की शुरूआत के 120 घंटे बादडोटॉक्सिन: α - कोमल मांसपेशियाँ ny actin केवल मौजूद हैचिकनी पेशी कोशिकाओं में सहकह जहाजों।
पहले में सप्ताह संख्या डेस्मिनपॉजिटिवकोशिकाओं में कमी आई, लेकिनबेंचमार्क से अधिक था। पर इस मामले में, हमने की उपस्थिति का निरीक्षण नहीं किया ए-जीएमए-पॉजिटिवसाइनस में कोशिकाएंदाह जिगर। आंतरिक सकारात्मकए-जीएमए के प्रति एंटीबॉडी के साथ दाग होने पर नियंत्रण करें चिकनी पेशी कोशिकाओं की पहचान करने के लिए प्रयोग किया जाता हैपोर्टल पथ के शिरापरक वाहिकाएँ जिनमें A-GMA होता है (चित्र 1, में)।इसलिए, इटो कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि के बावजूद, एक बारएलपीएस के प्रभाव से परिवर्तन नहीं होता है ( अंतरविभेदन) उन्हें मायोफिब्रोब्लास्ट में।
चावल। 2. जिगर के खंडचूहों, इलाज कियाएलएसएबी -लेबल एंटीबॉडीजपीसीएनए। ए - एन . की शुरूआत से पहले डोटॉक्सिन: सिंगलप्रोलिफायरिंग जीन पैथोसाइट्स, x200; बी - एंडोटॉक्सिन की शुरूआत के 72 घंटे बाद: कई प्रोलिफेरिंग हेपेटोसाइट्स, x400।
बढ़ती मात्रा डेस्मिनपॉजिटिवपोर्टल ज़ोन के भीतर सेल शुरू हो गए हैं। एलपीएस प्रशासन के बाद 6 घंटे से 24 घंटे तक पेरिसिनसॉइडलकोशिकाएँ केवल पोर्टल पथों के आसपास पाई जाती थीं, अर्थात्। 1 एसी क्षेत्र में नूसा. 48-72 घंटे के समय जब अफीम देखी गईअधिकतम मात्रा डेस्मिनपॉजिटिवगोंदवर्तमान, वे एसिनस के अन्य क्षेत्रों में भी दिखाई दिए; फिर भी, अधिकांश Ito कोशिकाएँ अभी भी परिधीय रूप से स्थित थीं।
शायद यह इस तथ्य के कारण है कि परिधीय रूप सेस्थित सीसी कैप्चर करने वाले पहले व्यक्ति हैंपोर्टल शिरा के माध्यम से या प्रणालीगत परिसंचरण से आंत से आने वाले एंडोटॉक्सिन। एके प्रेरित QC एक विस्तृत श्रृंखला का उत्पादन करता हैसाइटोकिन्स, जिन्हें इटो कोशिकाओं के सक्रियण को ट्रिगर करने के लिए माना जाता है और अंतरविभेदनउन्हें मायोफिब्रोब्लास्ट में। जाहिर है, यही कारण है कि सक्रिय यकृत मैक्रोफेज (एसिनस के पहले क्षेत्र में) के पास स्थित इटो कोशिकाएं साइटोकिन्स की रिहाई के लिए सबसे पहले प्रतिक्रिया करती हैं। हालाँकि, हमने अपने अध्ययन में उनका अवलोकन नहीं किया। अंतरविभेदनमें पेशीतंतुकोशिकाओं, और इससे पता चलता है कि सीके और हेपेटोसाइट्स द्वारा स्रावित साइटोकिन्स उस प्रक्रिया का समर्थन करने वाले कारक के रूप में काम कर सकते हैं जो पहले ही शुरू हो चुकी है अंतरविभेदन, लेकिन वे संभवतः इसे लीवर के एलपीएस के एकल एक्सपोजर के साथ ट्रिगर करने में सक्षम नहीं हैं।
कोशिकाओं की प्रोलिफ़ेरेटिव गतिविधि में वृद्धि भी मुख्य रूप से एसिनस के पहले क्षेत्र में देखी गई। इसका शायद मतलब यह है कि सभी (या लगभग सभी) प्रक्रियाओं का लक्ष्य आउट के विषय में- और अंतरकोशिकीय अंतःक्रियाओं का पैरासरीन विनियमन, परिधीय क्षेत्रों में आगे बढ़ें। एलपीएस प्रशासन के बाद 24 घंटे से प्रसार कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि देखी गई; सकारात्मक कोशिकाओं की संख्या बढ़कर 72 घंटे हो गई (अधिकतम प्रसार गतिविधि, अंजीर। 2, ए, बी)।हेपेटोसाइट्स और साइनसॉइड कोशिकाओं दोनों का प्रसार हुआ। हालांकि, रंगपीसीएनए नहीं देता प्रोलिफ़ेरी के प्रकार की पहचान करने की क्षमतासाइनसॉइडल कोशिकाओं को चलाना। साहित्य के अनुसार, एंडोटॉक्सिन की क्रिया में वृद्धि होती है क्यूसी की संख्या उन्हें लगता है कि यह के बारे में हैयकृत मैक्रोफेज के प्रसार के कारण और अन्य अंगों से मोनोसाइट्स के प्रवास के कारण दोनों आगे बढ़ता है। सीके द्वारा जारी साइटोकिन्स इटो कोशिकाओं की प्रजनन क्षमता को बढ़ा सकते हैं। इसलिए, यह मान लेना तर्कसंगत है कि प्रोलिफ़ेरेटिंग कोशिकाओं का प्रतिनिधित्व द्वारा किया जाता है पेरिसिनसॉइडलइतो कोशिकाएं। हमारे द्वारा दर्ज की गई उनकी संख्या में वृद्धि स्पष्ट रूप से वृद्धि कारकों के संश्लेषण को बढ़ाने और क्षति की स्थितियों के तहत बाह्य मैट्रिक्स को बहाल करने के लिए आवश्यक है। यह यकृत की प्रतिपूरक-पुनर्योजी प्रतिक्रियाओं में से एक लिंक में से एक हो सकता है, क्योंकि इटो कोशिकाएं बाह्य मैट्रिक्स, स्टेम सेल कारक और हेपेटोसाइट वृद्धि कारक के घटकों का मुख्य स्रोत हैं, जो मरम्मत और भेदभाव में शामिल हैं। जिगर की रोवका उपकला कोशिकाएं। अनुपस्थित Ito कोशिकाओं का समान परिवर्तन पेशीतंतुकोशिकाओंइंगित करता है कि यकृत फाइब्रोसिस के विकास के लिए एंडोटॉक्सिन आक्रामकता का एक प्रकरण पर्याप्त नहीं है।
इस प्रकार, एंडोटोक के लिए तीव्र जोखिम सिना संख्या में वृद्धि का कारण बनता है डेस्मिनपॉजिटिवइटो कोशिकाएं, जो कि लीवर के खराब होने का एक अप्रत्यक्ष संकेत है। मात्रा पेरिसिनसॉइडलकोशिकाओं में वृद्धि होती है, जाहिर तौर पर उनके प्रसार के परिणामस्वरूप। एंडोटॉक्सिन आक्रामकता का एक एकल प्रकरण उत्क्रमण का कारण बनता है मेरी सक्रियता पेरिसिनसॉइडलइतो कोशिकाएंऔर नहीं ले जाता है अंतरविभेदनमायोफिब्रोब्लास्ट में। इस संबंध में, यह माना जा सकता है कि सक्रियण के तंत्र में और अंतरविभेदनइटो कोशिकाओं में, न केवल एंडोटॉक्सिन और साइटोकिन्स शामिल होते हैं, बल्कि इंटरसेलुलर इंटरैक्शन के कुछ अन्य कारक भी होते हैं।
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पेराक्रिन स्राव और प्रत्यक्ष सेल-टू-सेल संपर्कों द्वारा अंतरकोशिकीय संचार को महसूस किया जा सकता है। यह ज्ञात है कि हेपेटिक पेरिसिनसॉइडल कोशिकाएं (एचपीसी) क्षेत्रीय स्टेम कोशिकाओं को स्थापित करती हैं और उनके भेदभाव को निर्धारित करती हैं। एक ही समय में एचपीसी आणविक और सेलुलर स्तर पर खराब विशेषता रखता है।
परियोजना का उद्देश्य चूहे के यकृत पेरिसिनसॉइडल कोशिकाओं और विभिन्न स्टेम कोशिकाओं जैसे मानव गर्भनाल रक्त (यूसीबी-एमसी) के मोनोन्यूक्लियर सेल अंश और चूहे की अस्थि-मज्जा व्युत्पन्न बहुसंख्यक मेसेनकाइमल स्ट्रोमल कोशिकाओं (बीएम-एमएमएससी) के बीच बातचीत का अध्ययन करना था।
सामग्री और तरीके। चूहा बीएम-एमएससी और एचपीसी, मानव यूसीबी-एमसी कोशिकाओं को मानक तकनीकों का उपयोग करके प्राप्त किया गया था। एचपीसी पैरासरीन विनियमन का अध्ययन करने के लिए हमने बॉयडेन चैंबर्स और वातानुकूलित एचपीसी सेल मीडिया का उपयोग करके एचपीसी के साथ यूसीबी-एमसी या बीएम-एमएमएससी कोशिकाओं को सह-संवर्धित किया। विभेदित लेबल वाली कोशिकाओं को सह-सुसंस्कृत किया गया था और उनकी बातचीत को चरण-विपरीत फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी और इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री द्वारा देखा गया था।
परिणाम। खेती के पहले सप्ताह के दौरान पीएचसी की वसा-भंडारण क्षमता के कारण विटामिन ए की ऑटोफ्लोरेसेंस थी। बीएम-एमएमएससी ने सभी सह-संस्कृति मॉडलों में उच्च व्यवहार्यता का प्रदर्शन किया। एचपीसी के साथ बीएम-एमएमएससी के वातानुकूलित मीडिया सह-संस्कृति में 2 दिन के ऊष्मायन के बाद हमने एमएमएससी के आकारिकी में परिवर्तन देखा - वे आकार में कम हो गए और उनके अंकुरित छोटे हो गए। α-स्मूथ मसल एक्टिन और डेस्मिन की अभिव्यक्ति मायोफिब्रोब्लास्ट के समान थी - इन विट्रो में इटो सेल कल्चर का एक मध्यवर्ती रूप। ये परिवर्तन एचपीसी द्वारा पैरासरीन उत्तेजना के कारण हो सकते हैं। यूसीबी-एमसी कोशिकाओं पर एचपीसी का सबसे गहरा प्रभाव संपर्क सह-संस्कृति में देखा गया, जिससे यूसीबी-एमसी कोशिकाओं के लिए अपनी व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए प्रत्यक्ष सेल-टू-सेल संपर्क बनाना महत्वपूर्ण है। हमने सह-संस्कृतियों में एचपीसी/यूसीबी और एचपीसी/बीएम-एमएमएससी कोशिकाओं के बीच कोई सेल फ्यूजन नहीं देखा। अपने आगे के प्रयोगों में हम स्टेम कोशिकाओं के यकृत विभेदन के लिए एचपीसी द्वारा उत्पादित वृद्धि कारकों का अध्ययन करने की योजना बना रहे हैं।
परिचय।
यकृत कोशिकाओं की विविधता में विशेष रुचि है पेरिसिनसॉइडल यकृत कोशिकाएँ (Ito कोशिकाएँ). वृद्धि कारकों और बाह्य मैट्रिक्स घटकों के स्राव के कारण, वे हेपेटोसाइट्स का एक माइक्रोएन्वायरमेंट बनाते हैं, और कई वैज्ञानिक अध्ययनों ने लीवर स्टेलेट कोशिकाओं की क्षमता को पूर्वज कोशिकाओं (हेमेटोपोएटिक वाले सहित) के लिए एक माइक्रोएन्वायरमेंट बनाने और उनके भेदभाव को प्रभावित करने की क्षमता को दिखाया है। हेपेटोसाइट्स इन सेल आबादी के इंटरसेलुलर इंटरैक्शन को विकास कारकों या प्रत्यक्ष अंतरकोशिकीय संपर्कों के पैरासरीन स्राव द्वारा किया जा सकता है, हालांकि, इन प्रक्रियाओं के आणविक और सेलुलर आधार पूरी तरह से समझ में नहीं आते हैं।
इस अध्ययन का उद्देश्य।
बातचीत तंत्र का अध्ययन हेमेटोपोएटिक (एचएससी) और मेसेनकाइमल (एमएमएससी) स्टेम सेल वाली इटो कोशिकाएंइन विट्रो परिस्थितियों में।
सामग्री और तरीके।
चूहे के जिगर की इटो कोशिकाओं को दो अलग-अलग एंजाइमी तरीकों से अलग किया गया। उसी समय, चूहों के अस्थि मज्जा से स्ट्रोमल एमएमएससी प्राप्त किए गए थे। मानव गर्भनाल रक्त से पृथक हेमटोपोइएटिक स्टेम कोशिकाओं का मोनोन्यूक्लियर अंश। Ito कोशिकाओं के पैरासरीन प्रभावों का अध्ययन MMSCs और HSCs को उस माध्यम में संवर्धित करके किया गया जिसमें Ito कोशिकाएँ विकसित हुईं, और सह-संवर्धन कोशिकाओं द्वारा एक अर्धपारगम्य झिल्ली द्वारा अलग किया गया। कोशिकाओं की सह-खेती में अंतरकोशिकीय संपर्कों के प्रभाव का अध्ययन किया गया है। बेहतर विज़ुअलाइज़ेशन के लिए, प्रत्येक आबादी को एक व्यक्तिगत फ्लोरोसेंट लेबल के साथ लेबल किया गया था। कोशिका आकृति विज्ञान का मूल्यांकन चरण-विपरीत और प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा किया गया था। सुसंस्कृत कोशिकाओं की फेनोटाइपिक विशेषताओं का अध्ययन इम्यूनोसाइटोकेमिकल विश्लेषण द्वारा किया गया था।
परिणाम।
पेरिसिनसॉइडल कोशिकाओं के अलगाव के एक सप्ताह के भीतर, हमने उनकी वसा जमा करने की क्षमता के कारण ऑटोफ्लोरेसेंस की उनकी क्षमता पर ध्यान दिया। फिर कोशिकाएं अपने विकास के एक मध्यवर्ती चरण में चली गईं और एक तारकीय आकार प्राप्त कर लिया। चूहे के अस्थि मज्जा MMSCs के साथ Ito कोशिकाओं की सह-खेती के प्रारंभिक चरणों में, सभी खेती प्रकारों में MMSCs की व्यवहार्यता को बनाए रखा गया था। दूसरे दिन, जब एमएमएससी की खेती इतो कोशिकाओं के संस्कृति माध्यम में की गई, एमएमएससी की आकृति विज्ञान बदल गया: वे आकार में कम हो गए, और प्रक्रियाएं छोटी हो गईं। एमएमएससी में अल्फा-स्मूथ मसल एक्टिन और डेस्मिन की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई, जो मायोफिब्रोब्लास्ट्स के साथ उनकी फेनोटाइपिक समानता को दर्शाता है, इन विट्रो में सक्रिय इटो कोशिकाओं के विकास का एक मध्यवर्ती चरण। हमारा डेटा संस्कृति में एमएमएससी के गुणों पर इटो कोशिकाओं द्वारा स्रावित पैरासरीन कारकों के प्रभाव को दर्शाता है।
इटो कोशिकाओं के साथ हेमटोपोइएटिक स्टेम कोशिकाओं की सह-खेती के आधार पर, यह दिखाया गया है कि हेमेटोपोएटिक स्टेम सेल केवल तभी व्यवहार्य रहते हैं जब इटो कोशिकाओं के साथ सह-खेती करें। मिश्रित संस्कृतियों के फ्लोरोसेंट विश्लेषण के अनुसार, विभिन्न आबादी से कोशिकाओं के संलयन की घटना सामने नहीं आई थी।
जाँच - परिणाम। हेमटोपोइएटिक स्टेम कोशिकाओं की व्यवहार्यता बनाए रखने के लिए, इटो कोशिकाओं के साथ सीधे अंतरकोशिकीय संपर्कों की उपस्थिति एक निर्णायक कारक है। पैरासरीन विनियमन केवल तभी नोट किया गया जब एमएमएससी की खेती एक पोषक माध्यम में की गई जिसमें इटो कोशिकाएं बढ़ीं। सेल कल्चर में एचएससी और एमएमएससी के विभेदन पर आईटीओ कोशिकाओं द्वारा उत्पादित विशिष्ट कारकों के प्रभाव का अध्ययन भविष्य के अध्ययनों में करने की योजना है।
शफीगुलिना ए.के., ट्रोनडिन ए.ए., शेखुतदीनोवा एआर, कलिगिन एम.एस., गाज़िज़ोव आईएम, रिज़वानोव ए.ए., गुमेरोवा ए.ए., कियासोव ए.पी.
SEI HPE "स्वास्थ्य और सामाजिक विकास के लिए संघीय एजेंसी के कज़ान राज्य चिकित्सा विश्वविद्यालय"
शीर्ष - साइनसोइडल यकृत उपकला कोशिकाओं (ईसी) के नीचे, निकटतम हेपेटोसाइट्स (पीसी) के पड़ोस में इटो सेल (एचएससी) का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। एस - यकृत साइनसॉइड; केसी - कुफ़्फ़र सेल। नीचे बाईं ओर - एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत संस्कृति में इटो कोशिकाएं। नीचे दाईं ओर - इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी से इटो कोशिकाओं (HSCs) के कई वसा रिक्तिका (L) का पता चलता है जो रेटिनोइड्स को संग्रहीत करते हैं।
इतो कोशिकाएं(समानार्थी शब्द: जिगर की तारकीय कोशिका, वसा भंडारण सेल, वसाभ, अंग्रेज़ी हेपेटिक स्टेलेट सेल, एचएससी, आईटीओ सेल, इटो सेल) - पेरिसाइट्समें निहित, दो अलग-अलग राज्यों में कार्य करने में सक्षम - शांतऔर सक्रिय. सक्रिय Ito सेलगठन में एक प्रमुख भूमिका निभाते हैं सिकाट्रिकियलक्षति में ऊतक जिगर.
एक अक्षुण्ण यकृत में, स्टेलेट कोशिकाएं पाई जाती हैं शांत अवस्था. इस अवस्था में, कोशिकाओं में साइनसोइडल को कवर करने वाले कई बहिर्गमन होते हैं केशिका. कोशिकाओं की एक और विशिष्ट विशेषता उनमें उपस्थिति है कोशिका द्रव्यभंडार विटामिन ए(रेटिनोइड) वसा की बूंदों के रूप में। शांत इटो कोशिकाएं सभी यकृत कोशिकाओं का 5-8% बनाती हैं।
इटो कोशिकाओं के बहिर्गमन को दो प्रकारों में विभाजित किया जाता है: पेरिसिनसॉइडल(सबेंडोथेलियल) और इंटरहेपेटोसेलुलर. पहले वाले कोशिका शरीर को छोड़ देते हैं और साइनसॉइडल की सतह के साथ फैलते हैं केशिका, इसे पतली उंगली के आकार की शाखाओं से ढका हुआ है। पेरिसिनसॉइडल बहिर्गमन छोटे विली से ढके होते हैं और केशिका एंडोथेलियल ट्यूब की सतह के साथ और भी आगे तक फैले हुए लंबे माइक्रोप्रोट्रूशियंस होते हैं। इंटरहेपेटोसेलुलर बहिर्गमन, हेपेटोसाइट्स की प्लेट पर काबू पाने और पड़ोसी साइनसॉइड तक पहुंचने के बाद, कई पेरिसिनसॉइडल बहिर्वाह में विभाजित होते हैं। इस प्रकार, इटो सेल औसतन दो आसन्न साइनसोइड्स से थोड़ा अधिक कवर करता है।
जब लीवर खराब हो जाता है, तो इटो कोशिकाएं बन जाती हैं सक्रिय अवस्था. सक्रिय फेनोटाइपप्रसार द्वारा विशेषता कीमोटैक्सिस, सिकुड़न, रेटिनोइड स्टोर्स का नुकसान और समान कोशिकाओं का निर्माण मायोफिब्रोब्लास्टिक. सक्रिय यकृत स्टेलेट कोशिकाएं भी नए के बढ़े हुए स्तर को दर्शाती हैं जीन, जैसे कि, 1-ICAM , chemokinesऔर साइटोकिन्स. सक्रियण फाइब्रोजेनेसिस के प्रारंभिक चरण की शुरुआत को इंगित करता है और उत्पादन में वृद्धि से पहले होता है ईसीएम-प्रोटीन। जिगर की चिकित्सा के अंतिम चरण में वृद्धि की विशेषता है apoptosisसक्रिय आईटीओ कोशिकाएं, जिसके परिणामस्वरूप उनकी संख्या तेजी से कम हो जाती है।
स्टेनिंग का उपयोग माइक्रोस्कोपी के तहत इतो कोशिकाओं की कल्पना करने के लिए किया जाता है। गोल्ड क्लोराइड. यह भी स्थापित किया गया है कि अन्य मायोफिब्रोब्लास्ट्स से इन कोशिकाओं के भेदभाव के लिए एक विश्वसनीय मार्कर प्रोटीन की उनकी अभिव्यक्ति है रील में.
कहानी [ | ]
पर 1876 कार्ल वॉन कुफ़रउन कोशिकाओं का वर्णन किया जिन्हें उन्होंने "स्टर्नज़ेलन" (तारकीय कोशिका) नाम दिया था। जब गोल्ड ऑक्साइड से दाग दिया जाता है, तो कोशिकाओं के कोशिका द्रव्य में समावेशन दिखाई देते हैं। गलती से उन्हें फैगोसाइटोसिस द्वारा पकड़े गए एरिथ्रोसाइट्स के टुकड़े मानते हुए, 1898 में कुफ़र ने "तारकीय सेल" पर अपने विचारों को एक अलग प्रकार के सेल के रूप में संशोधित किया और उन्हें वर्गीकृत किया फ़ैगोसाइट. हालांकि, बाद के वर्षों में, कुफ़्फ़र की "तारकीय कोशिकाओं" के समान कोशिकाओं का विवरण नियमित रूप से दिखाई दिया। उन्हें विभिन्न नाम दिए गए थे: अंतरालीय कोशिकाएँ, पैरासिनुसॉइड कोशिकाएँ, लिपोसाइट्स, पेरिसाइट्स। इन कोशिकाओं की भूमिका 75 वर्षों तक एक रहस्य बनी रही, जब तक कि एक प्रोफेसर (तोशियो इतो) ने इसकी खोज नहीं की पेरिसिनसॉइडल स्पेसमानव यकृत कुछ कोशिकाएं जिनमें वसा का समावेश होता है। इतो ने उन्हें "शिबो-सेशु सैबो" कहा - वसा-अवशोषित कोशिकाएं। यह महसूस करते हुए कि समावेशन कोशिकाओं द्वारा उत्पादित वसा थे ग्लाइकोजन, उन्होंने अपना नाम बदलकर "शिबो-चोजो सैबो" कर दिया - वसा-भंडारण कोशिकाएं। पर